生物物證常見技術(shù)課件

第三章生物物證常見技術(shù)第一節(jié)電泳技術(shù)第二節(jié)層析法第三節(jié)比色分析技術(shù)第四節(jié)離心技術(shù)第五節(jié)顯微鏡技術(shù)第一節(jié)電泳技術(shù)電泳是指在電場中的帶電粒子向電性相反方向發(fā)生位移的現(xiàn)象。是蛋白質(zhì)、核酸分析鑒定的主要技術(shù)之一。電泳原理在同一電泳條件下，不同帶電顆粒因其分子大小和帶電量的不同具有不同的泳動速度。因此電泳一定時間，就能相互分開。區(qū)帶電泳分類（一）據(jù)電場強度分：高壓；常壓；低壓。（二）據(jù)支持物種類分：濾紙；醋酸纖維薄膜；瓊脂糖凝膠；聚丙烯酰胺凝膠。（三）據(jù)支持物形狀分：水平板；垂直板；柱狀；圓盤；U形管；毛細(xì)管。（四）據(jù)原理分：等速；免疫；等電聚焦。（五）據(jù)方向分：單向；雙向。（六）據(jù)目的分：分析；制備。（七）據(jù)緩沖液pH分：連續(xù)pH；非連續(xù)pH。電泳槽電泳儀電泳步驟電泳的一般操作程序包括支持物的準(zhǔn)備、加樣、電泳、固定、染色、脫色、定性觀察及定量測定等過程。請觀看視頻1、高壓電極槽與進(jìn)樣機(jī)構(gòu)

2、填灌清洗機(jī)構(gòu)

3、毛細(xì)管

4、檢測器

5、鉑絲電極

6、低壓電極槽

7、恒溫機(jī)構(gòu)

8、記錄/數(shù)據(jù)處理層析操作第三節(jié)比色技術(shù)分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。比色技術(shù)分類光譜分析技術(shù)可分為發(fā)射光譜、吸收光譜和散射光譜三大類?；诎l(fā)射光譜分析的方法有火焰光度法、原子發(fā)射光譜法和熒光光譜法，基于吸收光譜分析的方法有紫外-可見光分光光度法，原子吸收分光光度法和紅外光譜法；基于散射光譜分析的方法有比濁法。

A=abc式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm3)，a為吸光系數(shù)。當(dāng)固定溶液層厚度l和吸光系數(shù)a時，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。722第四節(jié)離心技術(shù)離心技術(shù)是實驗室常采用的技術(shù)，主要是利用離心力將懸浮液中的懸浮微粒快速沉降，借以分離比重不同的各種物質(zhì)成分的方法。（二）根據(jù)溫度分類1、常溫離心機(jī)：室溫（25℃）下工作。常速離心時使用。2、低溫離心機(jī)：在4℃下工作。高速離心時使用。3、冷凍離心機(jī)：在0～－25℃工作。超速離心時使用。（三）根據(jù)體積大小和放置方式分類1、臺式離心機(jī)：體積小，放在操作臺上，用于微量物質(zhì)的提取。2、落地式離心機(jī)：體積大，放在地面上，用于大量物質(zhì)的提取。（四）根據(jù)供能方式分類1、自動式離心機(jī)：設(shè)置程序后，電腦程序控制離心速度和時間。2、電動式離心機(jī)：由操作者接通電源、利用旋鈕控制離心速度和時間的離心機(jī)。3、手動式離心機(jī)：第五節(jié)顯微鏡技術(shù)一、發(fā)明最早的顯微鏡是16世紀(jì)末期在荷蘭制造出來的。發(fā)明者可能是札恰里亞斯·詹森（眼鏡商）或漢斯·利珀希（科學(xué)家），他們用兩片透鏡制作了簡易的顯微鏡，但并沒有用于觀察。第一個使用者是伽利略。第二個是荷蘭商人安東尼·凡·列文虎克。1931年，恩斯特·魯斯卡研制了電子顯微鏡，1986年他被授予諾貝爾獎。二、分類（一）光學(xué)顯微鏡：通常皆由光學(xué)部分、照明部分和機(jī)械部分組成。目前光學(xué)顯微鏡主要有明視野顯微鏡（普通光學(xué)顯微鏡）、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡、偏光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡。（二）電子顯微鏡：有與光學(xué)顯微鏡相似的基本結(jié)構(gòu)特征，但它將電子流作為一種新的光源，使物體成像。可把物體放大到200萬倍。種類有掃描電鏡、分析電鏡、超高壓電鏡等。三、顯微鏡的使用方法

1.對光：

（1）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。

（2）撥動反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無陰影。反光鏡有平、凹兩面，光源強時用平面，較暗時用凹面，需要強光時，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。

（3）將待觀察的標(biāo)本置載物臺上，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器的同時，須俯身在鏡旁仔細(xì)觀察接物鏡與標(biāo)本之間的距離。

（4）左眼于接目鏡觀察，同時左手轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。

2．

接物鏡的使用及光線的調(diào)節(jié)：

顯微鏡一般具有三個接物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)換盤孔中。觀察標(biāo)本時，先使用低倍接物鏡，此時，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較小。后高倍接物鏡放大的倍數(shù)較大，能觀察微小的物體或結(jié)構(gòu)。再使用油鏡觀察，一般加一滴油后直接將油鏡頭浸入油滴中進(jìn)行鏡檢觀察。

3．

低倍、高倍、油鏡頭的識別：

（1）標(biāo)明放大倍數(shù)10×，40×，100×，或10/0.25，40/0.65，100/1.30。

（2）低倍鏡最短，高倍鏡較長，油鏡最長。

（3）鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。

（4）油鏡頭上?？逃泻谏h(huán)圈，或“油”字。

4．（1）光線對好后，移動推進(jìn)器尋找需要觀察的標(biāo)本。

（2）如標(biāo)本的體積較大，不能清楚查見其構(gòu)造因而不能確認(rèn)時，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。

（3）旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。

（4）調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象達(dá)到最清晰的程度。

5．

油鏡的使用方法：

（1）原理：油鏡的透氣孔最小，這樣進(jìn)入的光線就少，物體不易看清楚。同時又因自玻片透過的光線，由于發(fā)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線就更少，物體更看不清楚。采用一種和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏油，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線不通過空氣，這樣射入鏡頭的光線就較多，物象就看得清楚。（2）油鏡的使用：

a．將光線調(diào)至最強（聚光器提高，光圈開放）。

b．轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小滴于接物鏡正下方標(biāo)本上。

c．轉(zhuǎn)動接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。

d．俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。

e．慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見到標(biāo)本的物象為止。

f．轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清的程度。

g．左手徐徐移動推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。

h．標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。

6．

注意事項：

（1）使用顯微鏡之前，應(yīng)熟悉顯微鏡的各部名稱及使用方法，特別應(yīng)掌握識別三種接物鏡之特征。

（2）觀察無色和顏色較淺的標(biāo)本時，必須注意光線的調(diào)節(jié)。

（3）新鮮標(biāo)本觀察時，須加蓋玻片，以免標(biāo)本因蒸發(fā)而干燥變形或污染侵蝕接物鏡，同時可使標(biāo)本表面勻平，光線得以集中，有利于觀察。四、顯微鏡的保養(yǎng)1．顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實習(xí)臺上或裝

入木箱內(nèi)。

2．顯微鏡放到實習(xí)臺上時，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時與臺面接觸，這樣震動過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。

3．顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許二甲苯拭去。

4．顯微鏡不能在陽光下暴曬和使用。

5．接目鏡和