遺傳設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

21三體綜合征產(chǎn)前診斷

案例張某，女，31歲，商場(chǎng)收銀員，懷孕15周，擔(dān)心所孕胎兒不正常，前來進(jìn)行遺傳咨詢。經(jīng)詢問得知，張某的一表姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項(xiàng)優(yōu)生指標(biāo)均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某的丈夫，32歲，司機(jī)，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根據(jù)張某的情況，作中孕期唐氏篩查，結(jié)果張某血清的AFP,hCG

和uE3檢查結(jié)果陽(yáng)性，再進(jìn)行B超檢查胎兒情況，證實(shí)胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合癥的高風(fēng)險(xiǎn)，建議進(jìn)行產(chǎn)前診斷。

孕婦就診

常規(guī)篩查綜合分析風(fēng)險(xiǎn)值孕期檢查進(jìn)一步確診羊膜穿刺

診斷流程表6-2母親孕齡與Down綜合征發(fā)病率的關(guān)系

母親孕齡與Down綜合征發(fā)病率的關(guān)系

其發(fā)病率隨母親年齡增高而增高

新生兒出生時(shí)母親年齡Down綜合征的發(fā)病率其他主要染色體異常的發(fā)生率201/14201/500251/12501/480301/11401/420351/3601/190401/1001/77411/801/55421/601/43431/481/34441/381/27451/301/20細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析遺傳建議羊膜穿刺離心孕婦外周血中胎兒細(xì)胞檢測(cè)提取有核紅細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)流程羊膜穿刺---羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細(xì)胞（多為成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞）,經(jīng)體外培養(yǎng)后,可進(jìn)行染色體分析.酶和蛋白質(zhì)檢測(cè)性、染色體檢查和提取DNA作基因分析，也可不經(jīng)培養(yǎng)，用微量技術(shù)作酶和蛋白質(zhì)分析或直接提取DNA作基因診斷。時(shí)間：妊娠16~20周步驟：（B超監(jiān)視下進(jìn)行）孕婦排空膀胱—腰穿針穿刺—穿過腹壁和子宮 壁進(jìn)入羊膜腔—抽取羊水6、用于細(xì)胞培養(yǎng)則將懸液均勻分配到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，無菌封口后置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)；每隔幾天用倒置顯微鏡觀察生長(zhǎng)情況，根據(jù)需要更換部分培養(yǎng)基；培養(yǎng)15-20天，當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶壁時(shí)，可收獲細(xì)胞進(jìn)行染色體分析；7、用顯帶技術(shù)進(jìn)行染色體核型分析：（1）將制好的染色體標(biāo)本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。（2）放入預(yù)溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時(shí)間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時(shí)間。（3）在Giemsa染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。（4）鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標(biāo)本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標(biāo)本，可供攝像分析。

孕婦外周血中胎兒細(xì)胞檢測(cè)孕婦血有核紅細(xì)胞（NRBC）含量極少，大約每1ml母血中只含5～20個(gè)胎兒細(xì)胞，NRBC更少，為每1ml含2～6個(gè)。胎兒細(xì)胞，必須進(jìn)行分離純化才能利于進(jìn)一步分析，做產(chǎn)前診斷。目前，分離胎兒細(xì)胞有多種手段，主要包括密度梯度離心、磁激活細(xì)胞分類（MACS）、熒光激活細(xì)胞分類（FACS）、選擇性細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、尼龍毛柱分離法、單獨(dú)溶解紅細(xì)胞法等。其中密度梯度離心法是根據(jù)母血細(xì)胞與胎兒細(xì)胞的體積和內(nèi)部結(jié)構(gòu)等存在較大差異而推測(cè)出它們的密度也可能存在較大差異而設(shè)計(jì)的。密度梯度離心法分離出來的細(xì)胞丟失少、形態(tài)完整，但是富集的胎兒細(xì)胞純度與產(chǎn)量均不夠。還有改進(jìn)技術(shù)如采用多重密度梯度離心以提高純度。熒光激活細(xì)胞分類（FACS）法也是較常用的，分選CD71+細(xì)胞，富集的胎兒細(xì)胞純度與產(chǎn)量均較高，但操作步驟復(fù)雜可能導(dǎo)致細(xì)胞丟失;CD71并非專一與NRBC結(jié)合，CD71+細(xì)胞不一定是NRBC;而且所選NRBC形態(tài)略有改變，細(xì)胞膜欠完整，也會(huì)給產(chǎn)前診斷技術(shù)帶來困難。磁激活細(xì)胞分類（MACS）也是可行的。該技術(shù)的特點(diǎn)是在較短時(shí)間里獲得較多的靶細(xì)胞，且分離后的細(xì)胞仍有活性，可供培養(yǎng)和流式細(xì)胞分析等。分離了胎兒細(xì)胞之后就和羊水穿刺一樣做細(xì)胞核型分析。

產(chǎn)生原因：父母之一配子發(fā)生時(shí)減數(shù)分裂過程中出現(xiàn)不分離的結(jié)果，大多數(shù)是母親卵子形成過程中發(fā)生了21號(hào)染色體不分離（95%）；父親精子形成中發(fā)生21不分離而致該病約占5%。2、易位型（約占5%）：有典型的臨床表現(xiàn)。

常見核型：46，XX（XY），-14，+t（14；21）（p11；q11）3、嵌合型（約占2.5%）：臨床癥狀可以很典型，也可以很輕，主要取決于正常細(xì)胞與異常細(xì)胞之間的比例。核型：

46，XX（XY）/47，XX（XY），+21原因：正常的受精卵在胚胎發(fā)育早期卵裂過程中，發(fā)生21號(hào)染色體的不分離。

綜上總結(jié)給與遺傳建議：若出現(xiàn)上述情況則為21三體綜合癥。就目前的醫(yī)療水平而言，21-三體綜合征既沒有方法治愈也沒有方法預(yù)防，建議該孕婦不宜生育該患兒。如果核型為46，XX(XY)