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文檔簡(jiǎn)介
關(guān)于血脂及血漿脂蛋白檢驗(yàn)1第一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三2血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白檢驗(yàn)的重要性動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)冠心?。–HD)等心、腦血管疾病血脂代謝異常
第二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三3第三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三4臨床常規(guī)血脂和脂蛋白測(cè)定項(xiàng)目:總膽固醇(totalcholesterol,TC,包括FC和CE)甘油三酯(TG)高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)載脂蛋白等。第四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三5第一節(jié)
概述第二節(jié)
血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定本章內(nèi)容概要第五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三6一、血脂及血漿脂蛋白血脂:是血漿中脂類(lèi)(脂質(zhì))物質(zhì)的總稱(chēng)。包括中性脂肪(甘油三酯TG)和類(lèi)脂(膽固醇Ch、膽固醇酯CE
、磷脂、糖脂、游離脂肪酸)。定義:脂蛋白:脂類(lèi)難溶于水,正常血漿脂類(lèi)物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合成脂蛋白的形式運(yùn)輸和代謝。第一節(jié)概
述第六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三7(一)血漿脂蛋白的分類(lèi)
超速離心法:乳糜微粒CM極低密度脂蛋白VLDL低密度脂蛋白LDL高密度脂蛋白HDL電泳法:密度從低到高β脂蛋白前β脂蛋白α-脂蛋白乳糜微粒(CM)電泳速度由慢到快----------------------------------中間密度脂蛋白IDL脂蛋白(a)
Lp(a)第七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三8原點(diǎn)γ
β
α2
α1清蛋白-+血漿蛋白電泳-+原點(diǎn)β前β
α(CM)血漿脂蛋白電泳第八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三9(二)血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)血漿脂蛋白脂類(lèi):蛋白質(zhì):甘油三酯、磷脂、膽固醇、膽固醇酯載脂蛋白第九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三10
CM
乳糜微粒
VLDL
前β脂蛋白
LDL
β脂蛋白
HDL
α脂蛋白密度<0.950.95~1.0061.006~1.0631.063~1.210組成脂類(lèi)蛋白質(zhì)主要生理功能98~99%最少,1%90~95%5~10%含膽固醇及其酯最多含脂類(lèi)50%20~25%最多,約50%轉(zhuǎn)運(yùn)外源性TG轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性TG轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇到肝外組織逆向轉(zhuǎn)運(yùn)肝外膽固醇回肝含TG最多
TG多(次于CM)75~80%各種血漿脂蛋白的組成及功能第十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三11(三)載脂蛋白脂蛋白的蛋白部分稱(chēng)為載脂蛋白(apolipoprotein,Apo)定義:種類(lèi):第十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三12apoAapoBapoCapoDapoE
B48B100C-Ⅰ,Ⅱ,ⅢEB100A-Ⅰ,Ⅱ
CMVLDLLDLHDL第十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三13功能:①與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。②運(yùn)轉(zhuǎn)膽固醇和甘油三酯。③作為脂蛋白外殼的結(jié)構(gòu)成分,與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。④以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的連接物。(如:apoB100和apoE參與LDL受體的識(shí)別;apoE能被CM受體識(shí)別)⑤激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類(lèi)(如:ApoAI和CI能激活卵磷脂-膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶LCAT,ApoCⅡ激活LPL)第十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三14分布及特點(diǎn):第十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三15(四)脂蛋白受體定義:脂蛋白受體是一類(lèi)位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用,從而介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)脂蛋白的攝取與代謝,進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平。第十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三16脂蛋白受體的作用:位于各種細(xì)胞的膜上,脂蛋白轉(zhuǎn)化分解后的殘基主要通過(guò)脂蛋白受體被攝入細(xì)胞。不僅是運(yùn)送脂蛋白至細(xì)胞所必需,也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。種類(lèi):已有很多種,主要有LDL受體、殘粒受體(remnantreceptor)及清道夫受體(scavengerreceptor)其它有ApoE受體(CM)HDL受體和β-VLDL受體等。第十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三17LDL受體:分布于肝細(xì)胞、動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞膜表面識(shí)別結(jié)合ApoB100、E的脂蛋白如LDL、VLDL等。合成受體內(nèi)膽固醇的負(fù)反饋調(diào)節(jié)各種脂蛋白受體功能殘粒受體:
分布在代謝活躍的心肌、骨骼肌、脂肪等組織細(xì)胞。
識(shí)別、結(jié)合含ApoE的脂蛋白如CM殘粒和β-VLDL殘粒清道夫受體:
存在于巨噬細(xì)胞表面
識(shí)別、結(jié)合修飾的LDL(氧化型LDL和β-VLDL)第十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三18(五)脂代謝有關(guān)的酶類(lèi)與特殊蛋白質(zhì)酶:LPL、肝脂肪酶(HL或HTGL)、LCAT、HMG-CoA還原酶
參與TG分解、FC合成和酯化第十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三19脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白定義:血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,能促進(jìn)血漿各脂蛋白間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或雙向轉(zhuǎn)運(yùn)和交換,這類(lèi)特殊轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白稱(chēng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(lipidtransferprotein,LTP)。組成:膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP):可將LCAT催化生成的膽固醇酯由HDL轉(zhuǎn)移至VLDL、IDL和LDL中,在膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)中起關(guān)鍵作用
磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PTP):可促進(jìn)磷脂由CM、VLDL轉(zhuǎn)移至HDL
甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TTP):在富含TG的VLDL和CM組裝和分泌中起主要作用蛋白質(zhì):第十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三20(一)CM的代謝來(lái)源:由小腸粘膜細(xì)胞合成,經(jīng)淋巴入血。代謝過(guò)程:二、血漿脂蛋白代謝第二十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三21
功能:轉(zhuǎn)運(yùn)外源性TG。正常人CM在血漿中代謝迅速,半衰期為5-15分鐘,故正常人空腹12-14h后血漿中不含CM。第二十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三22(二)VLDL及LDL的代謝來(lái)源:VLDL主要由肝細(xì)胞合成,分泌入血,少量來(lái)自小腸;LDL是在血漿中由VLDL轉(zhuǎn)變而來(lái)代謝過(guò)程:第二十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三23功能:VLDL轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性TG;LDL轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇到肝外組織第二十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三24(三)HDL的代謝來(lái)源:主要由肝細(xì)胞合成,此外,小腸也可合成少量,還有血漿中CM、VLDL脂解過(guò)程中所釋放的磷脂、膽固醇及apo也可產(chǎn)生新生的HDL。代謝過(guò)程:第二十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三25功能:將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝進(jìn)行代謝(逆向轉(zhuǎn)運(yùn))。第二十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三26三、脂蛋白代謝紊亂(一)高脂蛋白血癥(多見(jiàn))定義:高脂血癥(hyperlipidemia,HLP)是指血漿中膽固醇和(或)甘油三酯濃度異常升高。血漿脂類(lèi)以血漿脂蛋白形式存在,因此,高脂血癥一般指高脂蛋白血癥(hyperlipoproteinemia)。近年來(lái),已逐漸認(rèn)識(shí)到血漿中HDL降低也是一種脂代謝紊亂。成人空腹12~14h血清(漿)TG>2.26mmol/L(200mg/dl),膽固醇>6.21mmol/L(240mg/dl),兒童膽固醇>4.14mmol/L(160mg/dl)LDL:與動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病呈正相關(guān)HDL:與動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病呈負(fù)相關(guān)VLDL:與動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病呈正相關(guān)第二十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三271.按表型分類(lèi)
主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進(jìn)行分型。該分類(lèi)法不包括病因?qū)W,故稱(chēng)表型分類(lèi)。
分型:第二十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三28(罕見(jiàn))(罕見(jiàn))(常見(jiàn))(常見(jiàn))(極常見(jiàn))(罕見(jiàn))CM帶明顯β脂蛋白明顯增高前β及β脂蛋白均增高前β及β脂蛋白帶融合,寬而濃染的“寬β帶”前β脂蛋白明顯增高CM帶明顯,前β脂蛋白增高或透明CM殘粒及VLDL殘粒(IDL)第二十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三292.按是否繼發(fā)于全身性疾病分類(lèi)繼發(fā)性高脂血癥:原發(fā)性:繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常,如糖尿病、腎病綜合征、腎功能衰竭、甲狀腺功能減退癥、肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖癥、飲酒等。此外,某些藥物如β-受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血脂異常。在排除繼發(fā)性高脂血癥后,可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高脂血癥由先天性基因缺陷所致第二十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三303.高脂血癥的基因分型法表10-5家族性高脂血癥的臨床特征常用名基因缺陷臨床特征表型分類(lèi)家族性高膽固醇血癥LLDL受體缺陷以膽固醇升高為主,可伴輕度甘油三酯升高,LDL明顯增加,可有肌腱黃色瘤,多有冠心病和高脂血癥家族史。ⅡaⅡb家族性ApoB100缺陷癥
ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血癥不清楚膽固醇和甘油三酯均升高,VLDL和LDL都增加,無(wú)黃色瘤,家族成員中有不同型高脂蛋白血癥,有冠心病家族史。Ⅱb家族性異常β脂蛋白血癥ApoE異常膽固醇和甘油三酯均升高,乳糜微粒和VLDL殘粒以及IDL明顯增加,可有掌皺黃色瘤,多為ApoE2(2/2)表型。Ⅲ家族性高甘油三酯血癥不清楚以甘油三酯升高為主,可有輕度膽固醇升高,VLDL明顯增加。Ⅳ第三十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三31(二)低脂蛋白血癥
一般將血清TC<3.3mmol/L,或TG<0.45mmol/L,或LDL-C<2.1mmol/L者,稱(chēng)為低脂蛋白血癥。脂質(zhì)如TC和TG同時(shí)降低或脂蛋白如HDL、LDL和VLDL同時(shí)降低多見(jiàn)。定義:原因:因某種原因使脂蛋白合成減少,另外分解代謝旺盛也可導(dǎo)致。分類(lèi):原發(fā)性和繼發(fā)性第三十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三32第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定TC測(cè)定TG測(cè)定HDL-C測(cè)定LDL-C測(cè)定Lp(a)測(cè)定ApoAI測(cè)定ApoB測(cè)定脂蛋白電泳分析其他測(cè)定:
有關(guān)的蛋白質(zhì)、酶和受體測(cè)定血清或血漿外觀(血清/漿靜置試驗(yàn))血清脂質(zhì)和脂蛋白檢測(cè)的分析程序及項(xiàng)目選擇第三十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三33血脂測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化:血脂分析前變異來(lái)源于:①生物因素,如年齡、性別、種族等因素的個(gè)體差異。②生活方式,包括飲食習(xí)慣、吸煙、運(yùn)動(dòng)及應(yīng)激等。③臨床方面包括疾病或藥物引起的脂代謝改變。④血標(biāo)本采集與處理方面準(zhǔn)確測(cè)定應(yīng)從分析前的準(zhǔn)備開(kāi)始,包括受試者的準(zhǔn)備,標(biāo)本采集,合格的試劑、校準(zhǔn)物的選用,檢測(cè)方法選擇。方法學(xué)上應(yīng)該采用美國(guó)疾病控制中心(CDC)或中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦的操作方法。第三十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三34抽血前應(yīng)有兩周時(shí)間保持平常的生活習(xí)慣,近期內(nèi)體重穩(wěn)定,無(wú)急性病、外傷、手術(shù)等意外情況,24小時(shí)內(nèi)不飲酒,禁食12-14小時(shí),早上空腹、安靜狀態(tài)下采血。
注意事項(xiàng):(1)檢驗(yàn)前,應(yīng)根據(jù)藥物的特性,盡可能停止用藥數(shù)天或數(shù)周。(2)妊娠前、后期各項(xiàng)血脂都會(huì)增高,產(chǎn)后、終止哺乳3個(gè)月后,才能反映其基本血脂水平。(3)血脂水平有季節(jié)性變動(dòng),對(duì)于體檢者建議應(yīng)在每年同一季節(jié)檢查。(4)結(jié)合生理和臨床情況,綜合、動(dòng)態(tài)分析檢驗(yàn)結(jié)果。1.受檢者的準(zhǔn)備標(biāo)本采集與處理第三十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三352.靜脈采血3.抗凝劑4.標(biāo)本處理除非是臥床的患者,一般在采血時(shí)取坐位。止血帶的使用不可超過(guò)1min,穿刺成功后應(yīng)立即松開(kāi)止血帶,然后抽血。我國(guó)多用血清作血脂分析。如果用血漿,多主張用EDTA·2Na抗凝標(biāo)本應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室,室溫下放置30-45min后離心,分離血清。第三十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三36血清或血漿外觀(血清/漿靜置試驗(yàn))第三十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三37TC、TG均正常(正常人)TC↑↑,TG正常(IIa型)TC↑↑,TG↑(IIb型)TCN/↑,TG↑↑(I型)TC↑↑,TG↑↑(III型/V型)TC↑↑,TG↑↑(IIb型/III型)TCN/
↑,TG↑↑(IV型)TG↑↑CM↑↑VLDL↑↑CM及VLDL↑↑血清(漿)靜置試驗(yàn)將患者空腹12h后采集靜脈血分離出血清置4℃冰箱中過(guò)夜,然后觀察其分層現(xiàn)象及清澈度。第三十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三38第三十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三39第三十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三40TC測(cè)定TG測(cè)定HDL-C測(cè)定LDL-C測(cè)定第四十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三41血清(漿)總膽固醇(TC)測(cè)定化學(xué)法酶法
血清中TC包括CE和FC,其中CE占70%,F(xiàn)C占30%。第四十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三42(一)化學(xué)測(cè)定法(直接法和間接法)1.膽固醇與醋酐–硫酸試劑產(chǎn)生藍(lán)綠色L–B反應(yīng):
Liberman發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色,Burchard用此反應(yīng)測(cè)定膽固醇稱(chēng)為L(zhǎng)-B反應(yīng)。(條件要求嚴(yán)格、試劑腐蝕性強(qiáng)、對(duì)FC與CE的顯色強(qiáng)度不一致、呈色不穩(wěn)定
)
Abell法(ALBK法):公認(rèn)的參考方法皂化(KOH乙醇溶液水解CE成為FC)、抽提(正己烷或石油醚提取FC)、顯色(L-B反應(yīng))。2.膽固醇與高鐵–硫酸試劑產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色Zak反應(yīng):
Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等與膽固醇作用生成紫紅色化合物來(lái)測(cè)定膽固醇,稱(chēng)為Zak反應(yīng)。(比L-B反應(yīng)的靈敏度高,呈色穩(wěn)定不需要皂化,反應(yīng)特異性差)3.膽固醇與鄰苯二甲醛–硫酸試劑生成穩(wěn)定的紫紅色
第四十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三43CEH-COD-PAP法原理:CE+H2OFC+FFAFC+O2△4-膽甾烯酮+H2O2H2O2+4-AAP+苯酚醌亞胺+H2O
試劑:膽固醇酶測(cè)定法的試劑中,除了上述三種酶、酚和4-氨基安替比林外,還有維持pH恒定的緩沖液、膽酸鈉、表面活性劑以及穩(wěn)定劑等。膽酸鈉是為了提高膽固醇酯酶的活性,表面活性劑的作用是促進(jìn)膽固醇從脂蛋白中釋放出來(lái)500nm(二)酶測(cè)定法(常規(guī)方法)第四十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三44評(píng)價(jià):優(yōu)點(diǎn):特異性好,精密度和靈敏度都能很好地滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求,操作簡(jiǎn)便,試劑無(wú)腐蝕性,手工和自動(dòng)分析皆可,終點(diǎn)法與速率法皆可。
缺點(diǎn):①某些膽固醇酯酶對(duì)膽固醇酯的水解不完全,不能用純膽固醇結(jié)晶以有機(jī)溶劑配制的溶液作為T(mén)C分析的校準(zhǔn)液,而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn)。②表面活性劑,如吐溫-40可以干擾膽固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇6000可使結(jié)果提高1%~2%;③本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷,易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素C和谷胱甘肽等的干擾。第四十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三45血清總膽固醇合適范圍:≤5.20mmol/L(200mg/dl),邊緣升高:5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl),升高:≥5.72mmol/L(220mg/dl)。參考范圍:第四十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三46
TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外,不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo),對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言,TC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子,與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)。臨床意義:高TC血癥:原發(fā)和繼發(fā)
(了解)
低TC血癥:原發(fā)和繼發(fā)
(了解)
第四十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三47TC測(cè)定TG測(cè)定HDL-C測(cè)定LDL-C測(cè)定第四十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三48血清(漿)甘油三酯(TG)測(cè)定化學(xué)法酶法第四十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三49基本操作:(一)化學(xué)測(cè)定法1、抽提:用有機(jī)溶劑抽提標(biāo)本中的TG,并去除磷脂等干擾物質(zhì)2、皂化:用堿(KOH
)水解(皂化
)TG生成甘油3、氧化:以過(guò)碘酸氧化甘油生成甲醛4、顯色:用顯色反應(yīng)對(duì)甲醛定量(變色酸、乙酰丙酮)VanHandel法(參考方法)氯仿抽提TG、硅酸吸附掉磷脂、KOH皂化、過(guò)碘酸氧化、變色酸顯紫紅色第四十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三50(二)酶測(cè)定法1、磷酸甘油氧化酶法(GPO-PAP法)常規(guī)方法原理:第五十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三51去除FG干擾可用下列方法:1、外空白法:同時(shí)用不含LPL的酶試劑測(cè)定FG作空白。2、內(nèi)空白法:又稱(chēng)兩步法或雙試劑法—將LPL和4-AAP組成試劑2,其余部分為試劑1。此兩步法目前為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦方法。特異性和準(zhǔn)確性好,主要缺點(diǎn)是測(cè)定結(jié)果包括血清中的游離甘油(FG)
特點(diǎn):第五十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三52
2.乳酸脫氫酶法原理:
TG+3H2OLPL
Glycerol+3RCOOHGlycerol+ATPGK+Mg2+G-3-P+ADPADP+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶丙酮酸+ATP丙酮酸+NADHLDHNAD++乳酸
由于反應(yīng)消耗NADH,故可利用NADH在340nm吸光度降低來(lái)測(cè)定甘油三脂的濃度。第五十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三53評(píng)價(jià):
本法結(jié)果準(zhǔn)確,但靈敏度較低,試劑也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等干擾物質(zhì),所以測(cè)定時(shí)除了要做試劑空白外,還要做標(biāo)本空白(外空白)第五十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三543.甘油氧化酶法第一步:
FG+O2
甘油氧化酶甘油醛+H2O2H2O2+EMAEPOD
無(wú)色物質(zhì)消除游離甘油的影響,3-5min后進(jìn)行第二步反應(yīng):TG+3H2O
LPL
Glycerol+3RCOOHFG+O2
甘油氧化酶甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAE
POD
有色化合物注:EMAE作用與酚相似,是還原劑,但靈敏度比酚高。原理:該法分兩步完成。第五十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三55
[參考值]血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高,體重超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。合適范圍:≤1.70mmol/L(150mg/dl),升高:>1.70mmol/L(150mg/dl)。第五十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三56[臨床意義]
原發(fā)性高TG血癥多有遺傳因素,包括家族性高TG血癥與家族性型高脂(蛋白)血癥等。繼發(fā)性高TG血癥見(jiàn)于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺機(jī)能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。
大量前瞻性的研究證實(shí),富含TG的脂蛋白是CHD的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子,TG增加表明患者存在代謝綜合癥,需進(jìn)行治療。甘油三酯降低比較少見(jiàn),甲狀腺功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能?chē)?yán)重?fù)p傷時(shí)可以見(jiàn)到甘油三酯降低
第五十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三57TC測(cè)定TG測(cè)定HDL-C測(cè)定LDL-C測(cè)定第五十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三58HDL-C測(cè)定常以測(cè)定HDL-C含量代表HDL水平。HDL分離(超速離心、沉淀、層析等)HDL-C測(cè)定(化學(xué)法、酶法)第五十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三59常規(guī)方法:1.磷鎢酸-鎂法2.HDL直接測(cè)定法(勻相法)參考方法:超速離心除去VLDL,然后用肝素-Mn沉淀LDL,上清液中的HDL-C用ALBK法測(cè)定。第五十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三60磷鎢酸-鎂法此法曾為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)的推薦方法,目前基層單位還在應(yīng)用,雖不能完全自動(dòng)化,但測(cè)定結(jié)果尚能滿足臨床要求。原理:第六十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三61HDL直接測(cè)定法(勻相法)HDL直接測(cè)定法大致分三類(lèi),分別是:聚乙二醇/抗體包裹法酶修飾法選擇性抑制法,又稱(chēng)掩蔽法,目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用最多。最近中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)血脂專(zhuān)題委員會(huì)推薦勻相法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定HDL–C的常規(guī)方法第六十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三62成人:男性1.16~1.42mmol/L(45~55mg/dl)女性1.29~1.55mmol/L(50~60mg/dl)理想范圍:≥1.04mmol/L(40mg/dl),
降低:<0.91mmol/L(35mg/dl)【參考范圍】【臨床意義】
流行病學(xué)與臨床研究證明,HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān),HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危險(xiǎn)因素。HDL-C大于1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)”危險(xiǎn)因素。HDL-C下降還多見(jiàn)于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血癥往往伴以低HDL-C,肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降,適量飲酒、長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使HDL-C升高。第六十二頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三63TC測(cè)定TG測(cè)定HDL-C測(cè)定LDL-C測(cè)定第六十三頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三641.Friedewald公式法LDL-C=TC-HDL-C-TG/5(以mg/dl為單位時(shí)),或LDL-C=TC-HDL-C-TG/2.2(以mmol/L為單位時(shí))。2.聚乙烯硫酸鹽沉淀法本法并非對(duì)LDL-C作直接測(cè)定,而是用聚乙烯硫酸(PVS)選擇性沉淀血清中LDL,再以血清TC減去上清液(含HDL與VLDL)膽固醇即得LDL-C值。3.直接測(cè)定法:兩類(lèi)目前各類(lèi)方法測(cè)定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在內(nèi)LDL-C測(cè)定常以測(cè)定LDL-C含量代表LDL水平。第六十四頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三65
LDL-C合適范圍:≤3.12mmol/L(120mg/dl),邊緣升高:3.15~3.61mmol/L(121~139mg/dl)
升高:≥3.64mmol/L(140mg/dl)?!緟⒖贾怠俊九R床意義】
LDL-C增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類(lèi)危險(xiǎn)因素。由于TC水平同時(shí)也受HDL-C水平的影響,所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險(xiǎn)因素指標(biāo)。美國(guó)國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃成人治療專(zhuān)業(yè)組規(guī)定以LDL-C水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達(dá)到的治療目標(biāo)。第六十五頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三66Lp(a)測(cè)定ApoAI測(cè)定ApoB測(cè)定第六十六頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三67脂蛋白(a)測(cè)定脂蛋白(a)是由特異的載脂蛋白apo(a)與LDL的apoB-100以二硫鍵相連而成,因而脂質(zhì)組成與LDL相似。apo(a)決定Lp(a)的特異性,是Lp(a)的特異性抗原,apo(a)結(jié)構(gòu)與纖溶酶原(PNG)極為相似,二者有交叉反應(yīng)。apo(a)可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合PNG受體或纖維蛋白等大分子,LP(a)攜帶的膽固醇結(jié)合至血管損傷部位,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成,也阻礙血管內(nèi)凝血塊的溶解,它是動(dòng)脈粥樣硬化的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因子。第六十七頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三68Lp(a)測(cè)定有兩類(lèi)方法一是以免疫化學(xué)原理測(cè)定其所含Apo(a),結(jié)果以Lp(a)質(zhì)量表示,也有以Lp(a)顆粒數(shù)mmol/L表示的。另一類(lèi)方法測(cè)定其所含的膽固醇,結(jié)果以Lp(a)-C表示。目前大都用免疫學(xué)方法測(cè)定。第六十八頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三69正常人群的Lp(a)水平呈明顯的正偏態(tài)分布,大多在200mg/L以下,平均數(shù)在120~180mg/L,中位數(shù)約100mg/L。Lp(a)水平高于醫(yī)學(xué)決定水平(300mg/L),冠心病危險(xiǎn)性明顯增高。【參考值】【臨床意義】
血清Lp(a)水平是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,與動(dòng)脈粥樣硬化成正相關(guān)。
第六十九頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三70Lp(a)測(cè)定ApoAI測(cè)定ApoB測(cè)定第七十頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年,星期三71血清載脂蛋白測(cè)定免疫化學(xué)法:?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散(RID)電免疫分析(如火箭電泳法)放射免疫分析(RIA)酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)等早期目前:目前比較適合于臨床實(shí)驗(yàn)室的是免疫濁度法,包括免疫散射比濁法(INA)和免疫透射比濁法(ITA)。第七十一頁(yè),共八十頁(yè),編輯于2023年
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