生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

〔一〕 糖類的顏色反響一、試驗(yàn)?zāi)康?、了解糖類某些顏色反響的原理。二、顏色反響〔一〕α-萘酚反響1〔硫酸、鹽酸〕作用下，脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后萘酚生成紫紅色物質(zhì)。由于糠醛及糠醛衍生物對(duì)此反響均呈陽(yáng)性，故此反響不是糖類的特異反響。2、器材3、試劑1500mL.稱取α5g，95％酒精100mL，貯于棕色瓶?jī)?nèi)。用前配制。1％100mL1％100mL1％100mL1％100mL濃硫酸500mL4、試驗(yàn)操作1mL521mL，漸漸立起試管，切勿搖動(dòng)。觀看記錄各管顏色?！捕?、原理陽(yáng)性反響。2、器材3、試劑mL，0.05g30mL1000mL。1％100mL1％100mL1％100mL4、試驗(yàn)操作35mL觀看記錄各管顏色。(二)糖類的復(fù)原作用一、試驗(yàn)?zāi)康?、理解并把握糖類的復(fù)原性質(zhì)；2、學(xué)習(xí)常用的鑒定糖類復(fù)原性的方法。。二、試驗(yàn)原理復(fù)原糖是指含有自由醛基〔如葡萄糖〕或酮基〔假設(shè)糖〕的單糖和某些二糖〔如乳糖和麥芽糖Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金定性和定量測(cè)定。三、器材四、試劑1甲液氫氧化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1g/mL的溶液。乙液硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2100mL100mL五試驗(yàn)操作思考題1、斐林氏、本尼迪克特試法檢驗(yàn)糖的原理是什么2、試比較斐林氏、本尼迪克特試法的方法。一、試驗(yàn)?zāi)康亩⒃囼?yàn)原理620nm10-100ug內(nèi)其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30ug這一方法比較適宜。三、儀器、試劑和材料.儀器分光光度計(jì)電子頂載天平三角瓶：50m1X1大試管：9支試管架，試管夾漏斗，漏斗架容量瓶：50m1X2刻度吸管：1m1X3，2m1X1，5mlX1水浴鍋.試劑葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：l00ug/ml濃硫酸蒽酮試劑:蒽酮溶于100ml濃HSO中當(dāng)日配制使用。2 4.材料〔或者其它材料〕。四、操作步驟.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作7管號(hào)1234567葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液〔ml〕0蒸餾水〔ml〕1〔ug102030406080起浸于沸水浴中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重煮沸起，準(zhǔn)確煮沸l(wèi)0min10min620nm葡萄糖含量〔ug).植物樣品中可溶性糖的提取將小麥分蘗節(jié)剪碎至2mm以下，準(zhǔn)確稱取1g,放入50m150m1定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1勻測(cè)定。.測(cè)定吸取lml已稀釋的提取液于大試管中，參加蒽酮試劑，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)620nm〔ug(ug)×稀釋倍數(shù)五、結(jié)果處理六、留意事項(xiàng)該顯色反響格外靈敏，溶液中切勿混入紙屑及塵埃。HSO 要用高純度的。2 4七、思考題蒽酮比色測(cè)定糖的原理是什么用水提取的糖類有哪些制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)留意哪些事項(xiàng)分光光度計(jì)的原理是什么使用時(shí)需要留意哪些

?學(xué)習(xí)和把握粗脂肪提取的原理和測(cè)定方法。重等。30-60稱為粗脂肪。60〔脂蛋白量測(cè)定法。.儀器鑷子試劑和材料四、試驗(yàn)步驟樣品的預(yù)備801管內(nèi)，用少量溶劑洗滌研缽，將溶劑倒入提取管中抽提連接提取器各局部，不能漏氣〔不能用凡士林或真空脂。提取完全。3.稱量計(jì)算粗脂肪%=脂肪重÷樣品重×100%思考題1、索式提取法提取的為什么是粗脂肪2、做好本試驗(yàn)應(yīng)留意哪些事項(xiàng)3、本試驗(yàn)裝置磨口處為什么不能涂抹凡士林或真空脂一、試驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)微量凱氏定氮法的原理2、把握微量凱氏定氮法的操作技術(shù)，包括標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨含量的測(cè)定，未知樣品的消化、蒸餾、滴定及其含氮量的計(jì)算等。二、試驗(yàn)原理〔的含氮量。自然的含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫二元素被氧化成二氧化碳但是，這個(gè)反響進(jìn)展得比較緩慢，通常需要參加硫酸鉀或硫酸鈉以提高反響的沸點(diǎn)，并參加硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反響的進(jìn)展。相當(dāng)于待測(cè)物中氨的當(dāng)量數(shù)〕計(jì)算出待測(cè)物中的氮量。滴定時(shí)用甲烯藍(lán)和甲基紅混合指示劑，其指示范圍為，將NHHBO的藍(lán)色滴

的藍(lán)紫色即為終點(diǎn)。

42 33 3本法適用范圍毫克氮。相對(duì)誤差應(yīng)小于2%。三、材料、試劑與器具〔一〕材料人的血清或豬的血清〔二〕試劑1、濃硫酸〔化學(xué)純〕2、30%氫氧化鈉〔分析純〕溶液3、%NaCl4、硫酸鉀—硫酸銅混合物：硫酸鉀與硫酸銅〔CuSO5HO〕3：1〔W/W〕4 2的配比混合研磨成粉末。5、2%硼酸6、混合指示劑的配制：50200窄且靈敏。2本指示劑的變色范圍為紫紅色 灰色 綠色HCl〔1〕標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨溶液〔毫克氮/毫升〕〔三、器具1、?凱氏燒瓶2、?消化架3、?吸量管〔12〕4、?量筒〔10〕5、?凱氏定氮蒸餾裝置6、?微量滴定管〔35〕7、?錐形瓶〔50-100〕8、?容量瓶〔50〕四、操作步驟〔一〕樣品的處理血清樣品：取人血〔或豬血%NaCl認(rèn)真混勻備用。100〔干重中所含氮的克數(shù)〕來(lái)表示〔%。因此在定氮前，應(yīng)將固體樣品中的水份除掉。一般樣品枯燥的溫105℃，100℃以下烘干。105℃41〔二〕消化2502〔4200。留意，用吸量管直接將溶液〔或用試管參加固體樣品〕加至燒瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶頸上，向22毫升水作空白比照。在每個(gè)燒瓶?jī)?nèi)參加硫酸鉀—硫酸銅混合物約0.2克，濃硫酸3毫升，小瓷片內(nèi)的電爐上消化。在消化開頭時(shí)，應(yīng)掌握火力，不要使液體沖到瓶頸。待瓶?jī)?nèi)水汽蒸完，硫酸開頭分解并放出SO白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，連續(xù)消化，直至消化液呈透亮綠色2為止。消化完畢，待燒瓶?jī)?nèi)容物冷卻后，加蒸餾水10毫升〔留意慢加，邊加邊搖50一并倒入容量瓶，最終定容至刻度搖勻，做上記號(hào)備用?！踩痴麴s1、儀器的洗滌：儀器應(yīng)先經(jīng)一般洗滌，再經(jīng)水蒸氣洗滌。開放自來(lái)水龍頭，使水E進(jìn)入G，從K管流出〔水不宜開得過(guò)大以免水從G管溢出。開放P，使水進(jìn)入A室，漏斗D中加蒸餾水約10毫升入B室。用拇指3將管口按緊，同時(shí)開放P，則B室中的水先從Y型管口沖出，隨后A室中水經(jīng)K1〔可用PH〕AM3 1M，BYABFE4F、G、KBNaOH,二者反響產(chǎn)生氨，BM2、滴定標(biāo)準(zhǔn)樣品先用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨溶液試驗(yàn)2~3次。蒸餾器洗凈后，開放水龍頭P，使水進(jìn)入3AA10〔內(nèi)加有混合指示劑。用外表皿掩蓋備用。1DM使管口恰好接觸硼酸溶液，用量筒從漏斗D參加30%氫氧化鈉8毫升，隨馬上P4夾緊，并往漏斗參加少量蒸餾水封閉。〔應(yīng)用擋風(fēng)板將燈圍攏，維持火力恒定，沸騰不行高于Y管口以免A室溶液從Y管倒吸，待第一滴蒸餾液從冷凝柱F頂端滴下時(shí)起，連續(xù)52〕11操作步驟進(jìn)展蒸餾。4、滴定：蒸餾完畢，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定錐瓶?jī)?nèi)溶液至淡紫色或灰色，記錄所用鹽酸的量?！菜摹秤?jì)算一些。首先需向樣品中參加三氯乙酸，使其最終濃度為5%，然后測(cè)定未加三氯乙酸的樣品及參加三氯乙酸后的樣品的上清液中的含氮量，從而計(jì)算出蛋白氮，再進(jìn)一步算出蛋白質(zhì)的含量。蛋白氮=總氮—非蛋白氮蛋白質(zhì)含量〔克/%〕=蛋白氮×五、留意事項(xiàng)1、凱氏法的優(yōu)點(diǎn)是適用范圍廣，可用于動(dòng)植物的各種組織，器官及食品等，含有大量堿性氨基酸的蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果偏高。2、一般試驗(yàn)室中的空氣中常含有少量的氨，會(huì)影響結(jié)果，所以操作應(yīng)在單獨(dú)干凈的房間中進(jìn)展，并盡可能快地對(duì)硼酸吸取液進(jìn)展滴定。七、思考題1、正式測(cè)定未知樣品前為什么必需測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨的含氮量及空白2、寫出以下各步的化學(xué)反響式：①蛋白質(zhì)消化②氨的蒸餾③氨的滴定試驗(yàn)五氨基酸分別鑒定——紙層析法一、試驗(yàn)?zāi)康亩?、試?yàn)原理開放后其一物質(zhì)在紙層析譜上的位置常用比移值Rf

來(lái)表示?！矘悠吩趦上嘀g的安排系數(shù)不同而到達(dá)分別?？隙ǖ奈镔|(zhì)在兩相間有固定的安排系數(shù)，因而在恒定條件〔液劑、PH、溫度〕下，各物質(zhì)有固定的Rf

值，據(jù)此可達(dá)到分析鑒定的目的。6～7%以氫鍵形式與纖維素上劑作流淌相?！渤煞州^為簡(jiǎn)潔的樣品〕和雙向〔單向時(shí)斑點(diǎn)重疊分別不開，于是在其垂直方向用另一種溶劑系統(tǒng)展層。雙相層析譜可區(qū)分十幾種以上的樣品。層析濾紙要求：質(zhì)地均勻，平坦無(wú)折痕，厚薄適當(dāng)，溶劑能勻速開放。機(jī)械強(qiáng)度好，溶劑開放后能保持原狀，不易折到。有肯定純度而少雜質(zhì)，以免影響層析圖譜背景。，宜用快速濾紙；而氯仿、石油醚開放快，宜用慢速濾紙。層析溶劑要求：〔1〕被分別物質(zhì)在該溶劑系統(tǒng)中Rf

在～之間，各組分之Rf

值相差最好能大于，以免斑點(diǎn)重疊。〔2〕溶劑系統(tǒng)中任一組分與分別物之間不能起化學(xué)反響。分別物質(zhì)在溶劑系統(tǒng)中的安排較恒定，不隨溫度而變化，且易快速到達(dá)平衡，這樣所得斑點(diǎn)較圓整。以茚三酮為顯色劑，可獲得分別清楚的層析圖譜。1、試劑%〔W/V〕茚三酮溶丙酮液。溶劑系統(tǒng)：第一相：正丁醇∶88%甲酸∶水＝15∶3∶2〔V/V；其次相：正丁醇∶吡啶∶95%乙醇∶水＝5∶1∶1∶1〔V/V2、測(cè)試樣品標(biāo)準(zhǔn)氨基酸混合溶液：亮氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、天門50ml0.01M3、器材25×40c〔×215c〔×2；噴霧器；毛細(xì)管內(nèi)徑14×11cm；鉛筆，尺。四、操作方法1、點(diǎn)樣〔14×11cm1.2cm距紙邊1.2cm點(diǎn)處，點(diǎn)的直徑掌握在2mm樣斑點(diǎn)枯燥后，把濾紙卷成圓筒形，紙的兩邊以鉻絲相連，但不行重疊相碰。2、展層點(diǎn)樣一段接觸溶劑，以點(diǎn)樣處不浸入溶劑為準(zhǔn)。待溶劑自下而上均勻開放，約20.5cm劑。然后裁去未走過(guò)溶劑的濾紙邊緣，將濾紙轉(zhuǎn)90°，卷成如前圓筒狀，放入盛其次相溶劑的層析缸內(nèi)開放〔操作同上1出，以電吹風(fēng)吹盡溶劑使其枯燥。3、顯色65℃20鐘，即可看到紫紅色氨基酸斑點(diǎn)，將圖譜上的斑點(diǎn)用鉛筆圈出。五、留意事項(xiàng)烘箱加熱溫度不行過(guò)高，且不行有氨的干擾，否則圖譜背景會(huì)泛紅。六、思考題：1、什么叫紙層析法2RR值的主要因素是什么f f3、怎樣制備擴(kuò)展劑4、層析缸中平衡溶劑的作用是什么5、酸性與堿性溶劑系統(tǒng)對(duì)氨基酸極性基團(tuán)的解離各有何影響試驗(yàn)〔一〕蛋白質(zhì)的呈色反響一、試驗(yàn)?zāi)康牧私鈽?gòu)成蛋白質(zhì)的根本構(gòu)造單位及主要聯(lián)接方式。了解蛋白質(zhì)和某些氨基酸的呈色反響原理。二、呈色反響：1.原理：180其構(gòu)造與雙縮脲相像，也能發(fā)生此反響?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定性或定量測(cè)定。都是蛋白質(zhì)或多肽。2.試劑：尿素： 10克10%氫氧化鈉溶液 (3)1%硫酸銅溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：硬化時(shí)，停頓加熱，尿素放出氨，形成雙縮脲。冷后，加10％氫氧化鈉溶液1避開添加過(guò)量硫酸銅，否則，生成的藍(lán)色氫氧化銅能掩蓋粉紅色。10％21％2(二)茚三酮反響原理：α—氨基酸及一切蛋白質(zhì)都能和茚三酮反響生成藍(lán)紫色物質(zhì)。該反響格外靈敏，1：1500000濃度的氨基酸水溶液即能給出反響，是一種常用的氨基酸定量測(cè)定方法。茚三酮反響分為兩步，第一步是氨基酸被氧化形成CO、NH和醛，水合茚2 3反響機(jī)理如下：pH顏色深淺不同，酸度過(guò)大時(shí)甚至不顯色。試劑：(1)蛋白質(zhì)溶液 100毫升卵清蛋白或穎雞蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)％甘氨酸溶液 80毫升(3)％茚三酮水溶液 50毫升(4)％茚三酮—乙醇溶液 20毫升操作方法：11—2藍(lán)。的茚三酮乙醇溶液在微火旁烘干顯色，觀看紫紅色斑點(diǎn)的消滅。1.原理：化合物在堿性溶液中進(jìn)一步形成深橙色的硝醌酸鈉。反響式如下：需參加少量濃硫酸才有黃色反響。2.試劑：(1)雞蛋清溶液 100毫升后用六層紗布過(guò)濾。(2)大豆提取液 100毫升(3)頭發(fā)指甲％苯酚溶液50毫升(6)濃硝酸 200毫升氫氧化鈉溶液3.操作方法：可略放置或用微火加熱。待各管消滅黃色后，于室溫下逐滴參加10％氫氧化鈉溶液至堿性，觀看顏色變化。1.原理：在濃硫酸存在下，色氨酸與乙醛酸反響生成紫色物質(zhì),反響機(jī)理尚不清楚，可能是一分子乙醛酸與兩分子色氨酸脫水縮合形成與靛藍(lán)相像的物質(zhì)。2.試劑：蛋白質(zhì)溶液 雞蛋清：水＝1：20(3)冰醋酸 200毫升(4)濃硫酸(分析純) 3.操作方法：3I靜置。觀看各管液面間紫色環(huán)的消滅。假設(shè)不明顯，可于水浴中微熱試驗(yàn)〔二〕蛋白質(zhì)的沉淀反響一、蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定：1.目的：了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。2.原理：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在以下平衡：pHpHpHpH溶液中參加酪蛋白后，沉淀消滅最多的緩沖液的pH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)。3.器材：(5)吸管。(6)試管。(8)乳缽。4.試劑：％酪蛋白醋酸鈉溶液 200毫升取0.46，將所得的蛋白質(zhì)懸波移入101/50℃水浴中，并留神地旋轉(zhuǎn)100內(nèi)，加水至刻度，塞緊玻塞，混勻。(4)當(dāng)量／升醋酸溶液505.操作方法：41時(shí)1、2、3、4管的pH、。觀看其混濁度。靜置10分鐘后，再觀看其pH1.目的：加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的生疏。(3)了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。原理：在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于外表生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水淀。(1)可逆的沉淀反響：利用此類反響。不行逆沉淀反響：反響都屬于此類。因此變性蛋白質(zhì)并不肯定部表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。試劉與材料：(1)蛋白質(zhì)溶液 500毫升卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液(穎雞蛋清：水＝1：9)(2)醋酸—醋酸鈉的緩沖溶液100毫升(3)3%硝酸銀溶液10毫升(5)95％乙醇 250毫升(6)飽和硫酸銨溶液250(7)硫酸銨結(jié)晶粉末1000(10)當(dāng)量/升碳酸鈉溶液100升醋酸溶液(12)甲基紅溶液20(13)2％氯化鋇溶液1504.操作方法：蛋