菌落總數(shù)測(cè)定

菌落總數(shù)的測(cè)定1.菌落總數(shù)定義，測(cè)定原理2.實(shí)驗(yàn)具體操作步驟3.出報(bào)告4.思考？定義菌落總數(shù)是反映食品的新鮮程度，食品是否變質(zhì)和食品生產(chǎn)的衛(wèi)生狀況等的重要指標(biāo)。菌落總數(shù)的定義：食品檢樣在經(jīng)過處理，在一定條件下（時(shí)間、溫度等）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。菌落總數(shù)測(cè)定原理平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定的細(xì)菌總數(shù)只是檢樣中部分活菌數(shù)，測(cè)定結(jié)果比檢樣中實(shí)際存在的活菌數(shù)值要小，這主要是由于培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)狀況和培養(yǎng)條件不能滿足某些細(xì)菌的要求，致使這些細(xì)菌不能正常的生長(zhǎng)繁殖。首先，不同的細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求不同，而平板菌落計(jì)數(shù)法常選用的是一種培養(yǎng)基，其不可能滿足檢樣中所有細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)需求；其次，不同的細(xì)菌對(duì)環(huán)境條件的要求不同，在平板菌落計(jì)數(shù)法中常選擇中溫（36℃±1℃）培養(yǎng)，于是嗜熱細(xì)菌和嗜冷細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖就要受到影響。但由于平板菌落計(jì)數(shù)法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可較早的報(bào)告結(jié)果，測(cè)得的結(jié)果是食品中包含消化道傳染病病原菌和食物中毒病原菌在內(nèi)的活菌數(shù)，能真實(shí)地反映食品的微生物污染程度，所以目前食品安全質(zhì)量檢驗(yàn)中常用此法。菌落總數(shù)測(cè)定原理實(shí)驗(yàn)操作：材料與儀器培養(yǎng)基與試劑平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、無菌生理鹽水等儀器與用具水浴鍋、吸管、三角瓶、滅菌培養(yǎng)皿、試管等步驟檢樣25g（ml）樣品+225ml稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋選擇2~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取1ml分別加入無菌培養(yǎng)皿中每皿中加入15ml~20ml平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻培養(yǎng)計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù)和菌落總數(shù)報(bào)告菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。菌落數(shù)大于等于100CFU時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可以用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/ml為單位報(bào)告。思考？TTC?細(xì)菌生物氧化有三種方法，即加氧、脫氫和脫電子，相反即還原。當(dāng)乳加入嗜熱鏈球菌后，如乳中無抗生素，嗜熱鏈球菌就生長(zhǎng)繁殖，在新陳代謝過程中進(jìn)行生物氧化，其中脫出的氫可以加在乳中的氧化型TTC結(jié)合而成為還原型TTC，氧化型TTC無色，還原型TTC紅色，所以可使乳變成紅色。若乳中存在抗生素，嗜熱鏈球菌就不能生長(zhǎng)繁殖，沒有氫釋放，TTC也不被還原，仍為無色。

平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定菌落總數(shù)的原理是什么？該法測(cè)得的結(jié)果是樣品中的實(shí)際菌數(shù)嗎？為什么？由于待測(cè)樣品往往不能完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來自樣品中的2～3個(gè)或更多個(gè)細(xì)胞，因此平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果往往偏低。

另外，在環(huán)境因素的作用下，每一個(gè)細(xì)菌的生活能力各不相同，會(huì)影響其在該條件下形成菌落的能力；又如，吸附于微小顆粒上的2個(gè)以上菌體或粘連在一起的菌團(tuán)可能共同形成一個(gè)菌落。這些都使形成的菌落數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)際的活菌數(shù)。為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板？溫度過低，培養(yǎng)基易凝，過高容易燙死細(xì)菌。當(dāng)平板長(zhǎng)出的菌落不是均勻分散生長(zhǎng)而是集中生長(zhǎng)在一起，你覺得問題出現(xiàn)在哪里？答：倒平板法：是否搖勻。稀釋涂布平板法：在稀釋涂布時(shí)，未能均勻涂布。平板劃線法：劃線太重，接種針的原菌種未能分散開來。用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長(zhǎng)出的菌落有何不同？為什么培養(yǎng)時(shí)間（48h）后觀察結(jié)果？涂布法：（培養(yǎng)基時(shí)固態(tài)的)適用于好氧微生物的菌落觀察。涂布法使用較多，但有時(shí)不均勻,菌落一般在表面。倒平板法：（培養(yǎng)基一般溫度較高，是液態(tài)的）適用于厭氧，兼性厭氧的微生物，稀釋倒平板法操作相對(duì)麻煩，不適合好氧和對(duì)熱敏感的細(xì)菌培養(yǎng)。培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間(48h)后，菌落特征才明顯。平板菌落計(jì)數(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)有哪些？平板菌落計(jì)數(shù)法最大的缺點(diǎn)是速度慢,需要平板上長(zhǎng)出菌落一段時(shí)間后才能計(jì)數(shù).但是由于平板菌落計(jì)數(shù)法通常做梯度稀釋,所以計(jì)數(shù)的線性范圍大.由于是菌懸液涂布,所以比較均勻,能較好的反應(yīng)菌落的疏密程度.重復(fù)性,平行性很好,是經(jīng)典的計(jì)數(shù)方法.平板計(jì)數(shù)法