藥物分析第十一章抗生素類藥物的分析詳解演示文稿

藥物分析第十一章抗生素類藥物的分析詳解演示文稿當(dāng)前1頁，總共31頁。（優(yōu)選）藥物分析第十一章抗生素類藥物的分析當(dāng)前2頁，總共31頁。3.來源：生物合成（發(fā)酵）化學(xué)合成或半合成4.抗生素的特點(diǎn)：

化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵過程不易控制易受污染當(dāng)前3頁，總共31頁。5.抗生素質(zhì)量分析采用生物學(xué)法與物理化學(xué)法鑒別：理化方法、微生物法檢查：水分、pH值、異常毒性、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等含量/效價測定：

微生物法：與臨床療效吻合,靈敏度高；但操作復(fù)雜費(fèi)時

理化方法：準(zhǔn)確度與專屬性較高,且操作簡便；但與臨床療效有偏差當(dāng)前4頁，總共31頁。二、β–內(nèi)酰胺類包括青霉素類和頭孢菌素類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)：青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核*****當(dāng)前5頁，總共31頁。2.主要理化性質(zhì)：1）酸性（羧基）：pKa2.5-2.8酸性較強(qiáng)與堿金屬成鹽后水溶性好2）UV（共軛）：青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結(jié)構(gòu)當(dāng)前6頁，總共31頁。3）旋光性：有多個手性碳4）穩(wěn)定性（內(nèi)酰胺）：干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定青霉素降解、失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ當(dāng)前7頁，總共31頁。3.鑒別1）羥肟酸鐵反應(yīng)：β–內(nèi)酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應(yīng)α-氨基藍(lán)紫色3）雙縮脲反應(yīng)β–內(nèi)酰胺類紫色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應(yīng)當(dāng)前8頁，總共31頁。頭孢利定的NMR鑒別法(JP14)取本品50mg溶于0.5ml重水中，測定NMR光譜時，應(yīng)顯示δ3.8附近δ6.9～7.5δ7.9～9.0

單峰信號多重峰信號多重峰信號

2：3：5強(qiáng)度比當(dāng)前9頁，總共31頁。頭孢氨芐鑒別的TLC條件ChP(2000)5mg/ml2μl

硅膠G

0.1mol/L枸櫞酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)；0.1%茚三酮溶液顯色USP(24)25mg/ml5μl

硅膠

醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc(48:18:14:14)；短波長UV光檢出BP(1999)0.4%(W/V)1μl

硅烷化硅膠HF25415.4%NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)；254nm檢出當(dāng)前10頁，總共31頁。4.特殊雜質(zhì)檢查聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等頭孢他啶中聚合物測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用葡聚糖凝膠G-10（40～120m）為填充劑，玻璃柱內(nèi)徑1.3～1.5cm，床體積50～60ml；流動相A為含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉2.19g和磷酸二氫鈉0.54g，加水1000ml使溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0），流動相B為0.01%十二烷基硫酸鈉溶液；流速為每分鐘1ml；檢測波長為254nm。以流動相A為流動相，用1mg/ml藍(lán)色葡聚糖2000溶液進(jìn)樣200l進(jìn)行測定，理論板數(shù)應(yīng)不低于900，拖尾因子在0.75～1.5，對照品溶液以流動相B為流動相，重復(fù)進(jìn)樣200l，峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于5.0%當(dāng)前11頁，總共31頁。對照品溶液的制備：取頭孢他啶對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml中含頭孢他啶100g的溶液，搖勻測定法取本品適量，精密稱定，加水制成每1ml中約含頭孢他啶20mg的溶液，立即進(jìn)樣200l，以流動相A為流動相進(jìn)行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200l注入液相色譜儀，以流動相B為流動相，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得過0.3%當(dāng)前12頁，總共31頁。頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：測定頭孢呋辛酯的HPLC系統(tǒng)為ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:?38）為流動相，流速1ml/min；檢測波長278nm。要求頭孢呋辛酯A，B異構(gòu)體之間，頭孢呋辛酯A異構(gòu)體與頭孢呋辛酯△2-異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)大于1.5；理論板數(shù)按頭孢呋辛酯A異構(gòu)體峰計算，應(yīng)不低于1500當(dāng)前13頁，總共31頁。異構(gòu)體取本品適量，配制成每1ml中約含0.25mg的甲醇-流動相(11)的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。B異構(gòu)體峰的相對保留時間約為0.85，A異構(gòu)體峰的相對保留時間為1.0。供試品色譜圖中A異構(gòu)體峰的面積與A、B異構(gòu)體峰的面積和之比應(yīng)為0.48～0.55。

40020600302010時間(min)峰高(mAU)65432113.95411.9192.401當(dāng)前14頁，總共31頁。有關(guān)物質(zhì)取本品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml中約含0.2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加流動相制成每1ml中約含6g的溶液，作為對照溶液。取對照溶液20l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%，再取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍，供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對照溶液主峰的面積當(dāng)前15頁，總共31頁。5.含量測定1）碘量法（ChP2000）原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應(yīng)，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余當(dāng)前16頁，總共31頁。反應(yīng)分兩步進(jìn)行：水解反應(yīng)(按化學(xué)計算量進(jìn)行)氧化-還原反應(yīng)(無定量關(guān)系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定)當(dāng)前17頁，總共31頁?？瞻自囼?yàn)因樣品中雜質(zhì)會消耗碘，故應(yīng)作空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)與經(jīng)典空白試驗(yàn)不同：加入樣品，不加堿，其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都加當(dāng)前18頁，總共31頁。試驗(yàn)條件：（I2氧化）弱酸性（pH4.5）堿↑I2→IO3-+I-酸↑某些藥物與碘生成復(fù)鹽沉淀溫度（24～26℃）溫度＞38℃時未水解的供試品亦消耗碘反應(yīng)時間：（20分鐘）20分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小當(dāng)前19頁，總共31頁。特點(diǎn)靈敏度高：樣品:碘=1:8反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高含量1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應(yīng)時間、滴定速度相同含量％＝×

×

對照品％

V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣當(dāng)前20頁，總共31頁。2）電位配位滴定法（汞量法）

原理：青霉素不與汞鹽反應(yīng)，其堿性降解產(chǎn)物可與Hg2+絡(luò)和Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+

方法說明：a空白試驗(yàn)與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb與碘量法相比，汞量法不需對照試驗(yàn)當(dāng)前21頁，總共31頁。3）酸堿滴定法4）硫醇汞鹽法

青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽5）羥肟酸比色法

β–內(nèi)酰胺類紅色6）HPLC法：應(yīng)用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）NH2OHH+Fe3+當(dāng)前22頁，總共31頁。阿莫西林克拉維酸鉀片色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉7.8g，加水900ml溶解，用磷酸或10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.4±0.1，加水稀釋至1000ml)-甲醇(95:5)為流動相；流速為0.7ml/min；檢測波長為220nm。阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應(yīng)大于3.5

測定法取本品10片，置1000ml量瓶中，加水適量，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對照品與克拉維酸對照品各適量，加水溶解，制成每1ml中含阿莫西林0.5mg和克拉維酸0.25mg的混合溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積分別計算供試品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。當(dāng)前23頁，總共31頁。三、氨基糖苷類1.化學(xué)結(jié)構(gòu)鏈霉素都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷分子結(jié)構(gòu)中都含有多羥基均為堿性抗生素當(dāng)前24頁，總共31頁。2.性質(zhì)1）堿性（氨基）：臨床應(yīng)用其硫酸鹽2）溶解度（氨基、羥基）：水溶性3）旋光性（糖）：多個手性碳4）穩(wěn)定性（苷）：強(qiáng)酸、堿條件均可水解當(dāng)前25頁，總共31頁。3.鑒別1）茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類,α-氨基酸性質(zhì)

鏈霉素+

水和茚三酮藍(lán)紫色2）N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應(yīng)：鏈霉素N-甲基葡萄糖胺

紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-當(dāng)前26頁，總共31頁。3）麥芽酚（Maltol)反應(yīng)(鏈霉糖特有）鏈霉素麥芽酚紫紅色OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBr或α-萘酚

OH-水解4）坂口（Sakaguchi）反應(yīng)：(鏈霉胍特有）

鏈霉素鏈霉胍橙紅5）硫酸鹽反應(yīng)當(dāng)前27頁，總共31頁。4.檢查1）鏈霉素中鏈霉素B的檢查

來源：發(fā)酵中產(chǎn)生

BP：薄層色譜法（雜質(zhì)對照品法）當(dāng)前28頁，總共31頁。2）慶大霉素C組分測定（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)）色譜柱：ODS流動相：H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時調(diào)節(jié)甲醇的含量檢測波長：330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）要求：N