2023屆新高考生物備考復(fù)習(xí)：生物技術(shù)實(shí)踐

2023屆新高考生物備考復(fù)習(xí)

《生物技術(shù)實(shí)踐》

專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

課題1果酒和果醋的制作

1.酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌;醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌,代謝類型是異養(yǎng)需氧型。

2.制作原理

類型微生物原理

①有氧條件下，進(jìn)行有氧呼吸,大量繁殖，反應(yīng)式為：C6H?+602-6C02+6H20

果酒酵母菌

②無氧條件下，進(jìn)行酒精發(fā)酵,反應(yīng)式為：CeHB酶2c2Hs0H+2c

①當(dāng)氧氣和糖源都很充足時(shí),可將糖分解為醋酸②當(dāng)氧氣充足，缺少糖源時(shí),

果醋醋酸菌醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?再將乙醛轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜帷?/p>

反應(yīng)式為：CzHQH+Oz-CH3copH+HzO

3.制作流程與條件控制

’實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵f醋酸發(fā)酵

-J果酒制作：18?25℃、10?12d,先通氣，后密封

條件控制《

［的工在叫果醋制作：30?3537?8d、全程通氣

4.在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母囪。在發(fā)酵過程中,隨著酒精

濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中,酵母菌可以生

長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。

5.酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重珞酸鉀來檢驗(yàn)。在酸性條件下,重銘酸鉀與酒精反應(yīng)呈

現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵也2mL,再滴入物質(zhì)的量濃度為3moi/L的典3滴，振蕩混勻，最后滴加

常溫下飽和的重銘酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色。

6.實(shí)驗(yàn)裝置圖分析

(1)甲、乙、丙的作用分別是通入空氣(氧氣)、排氣、取樣。

(2)圖中發(fā)酵瓶中葡萄汁的量是否恰當(dāng)？為什么？不恰當(dāng)，因?yàn)槠咸阎?/p>

量不能超過發(fā)酵瓶體積的2/3,而且不能將排氣口淹沒。

(3)醋酸菌進(jìn)行醋酸發(fā)酵時(shí)，無論是利用糖源還是酒精，甲都需要打開，

原因是：醋酸菌是需氧菌，在生活過程中始終需要氧氣，如果氧氣中斷則會(huì)

引起醋酸菌的死亡。

(4)果酒擱置時(shí)間過久會(huì)有酸味，原因是：醋酸菌在缺乏糖源時(shí)，可以將

酒精轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸。

7.果酒和果醋制作的注意事項(xiàng)

(D材料的選擇與處理：選擇新鮮的葡萄,榨汁前先將葡萄沖洗，再除去枝梗,以防葡萄汁流失及污染。

沖洗以洗去灰塵為目的，且不要太干凈，以防洗去野生型酵母菌。

(2)防止發(fā)酵液被污染：①榨汁機(jī)要清洗干凈并晾干。

②發(fā)酵瓶要洗凈并用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒,或用洗潔精洗滌“

③裝入葡萄汁后要封閉充氣口。

(3)控制好發(fā)酹的條件：

①葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留約1/3空間,目的是先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，耗盡。2后再進(jìn)

行酒精發(fā)酵；防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO?造成發(fā)酵液溢出,

②嚴(yán)格控制溫度：18?25℃利于酵母菌的繁殖和酒精發(fā)酵；30?35c利于醋酸菌的繁殖和醋酸發(fā)酵。

③充氣：酒精發(fā)酵為無氧發(fā)酵，需封閉充氣口；醋酸發(fā)酵為有氧發(fā)酵，需適時(shí)通過充氣口充氣。

課題2腐乳的制作

1.多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲

狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。營腐生生活。

2.原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解

為甘油和脂肪酸。

3.實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉f加鹽腌制f加鹵湯裝瓶一密封腌制

4.影響腐乳品質(zhì)的因素有：鹽和酒的含量、香辛料、溫度等。

(1)鹽：食鹽的作用：①抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì)②析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程

中不易酥爛。鹽的濃度過高，影響腐乳口味；濃度過低，不足以抑制微生物生長(zhǎng)，導(dǎo)致腐乳腐敗變質(zhì)。裝瓶

時(shí)要分層加鹽，隨層數(shù)的增加而增加鹽量，在瓶口表面鋪鹽厚些，以防止雜菌從瓶口進(jìn)入。

(2)酒：鹵湯中酒的含量控制在毀左右。酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系。酒

精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用越大,使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過低，不足以抑制微生物生長(zhǎng)，導(dǎo)致

豆腐腐敗,難以成塊。

(3)香辛料：既可調(diào)制腐乳的風(fēng)味,又具有防腐殺菌的作用。

(4)含水量：以巡為宜，若過高則影響毛霉的有氧呼吸,且腐乳不易成形；若過低，則不利于毛霉的

代謝和生長(zhǎng)。

(5)發(fā)酵溫度：前期的發(fā)酵溫度控制在15?18℃,利于毛霉的生長(zhǎng)。

5.傳統(tǒng)腐乳制作與現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)的區(qū)別

(1)條件：傳統(tǒng)腐乳制作不需要滅菌,現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)必須在嚴(yán)格無菌條件卜進(jìn)行;

(2)菌種來源：傳統(tǒng)腐乳制作，菌種來自空氣中的毛霉抱子;現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)，菌種是經(jīng)過篩選的優(yōu)良毛

霉菌種,并且直接接種在豆腐上。

6.防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊

地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。③封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰,防止瓶口被

污染。

疑難解答

(1)利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí)，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？

豆腐生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。

(2)為什么要撒許多鹽，將長(zhǎng)毛的豆腐腌起來？

鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。

(3)吃腐乳時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有害嗎？

它的作用是什么？

“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲(匍匐菌絲)，對(duì)人體無害。它能形成腐乳的“體”，使腐

乳成形。

課題3制作泡菜

1.制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳

酶

酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。在無氧條件下,將糖分解為乳酸.反應(yīng)式為：CJL2O6>2CsH603+能量

2.含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。

3.亞硝酸鹽為白色粉末,易溶于水,在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。

4.膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康，國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg,醬腌菜中不超過20mg/kg,

嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在亞］

適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。硝/\

5.在泡菜的腌制過程中，要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。酸\

溫度過高、食鹽用量過低、腌制時(shí)間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，鹽/\

含

量

發(fā)酵時(shí)間(d)

亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始降低,故在10天之后食用最好。

6.測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法是比色法,原理是在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)

后，與NT-蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料,與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較,估算泡菜中亞

硝酸鹽含量。

7.測(cè)定亞硝酸鹽含量的操作：配制溶液n制備備標(biāo)準(zhǔn)顯色n制備備樣品處理n比色

主要試劑的作用：

亞硝酸鈉：制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液氯化鎘、氯化鋼：亞硝酸鹽的提取劑

氫氧化鋁：作吸附劑，使泡菜液脫色澄清

8.泡菜制作的注意事項(xiàng)

(1)材料的選擇及用量：

①蔬菜應(yīng)新鮮,若放置時(shí)間過長(zhǎng)，蔬菜中的硝酸鹽易鹽被還原成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽含量較高。

②清水和鹽的質(zhì)量比為4：1,鹽水要煮沸后冷卻。煮沸有兩大作用，一是除去水中的氧氣，二是殺滅

鹽水中的其他細(xì)菌。

(2)防止雜菌污染：每次取樣用具要洗凈，要迅速封口。

(3)氧氣需求：

①泡菜壇要選擇透氣性差的容器，以創(chuàng)造無氧環(huán)境,有利于乳酸菌發(fā)酵，防止蔬菜腐爛。

②泡菜壇壇蓋邊沿的水槽內(nèi)注滿水,以保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境,并注意在發(fā)酵過程中經(jīng)常

補(bǔ)水。

(4)控制適宜的溫度：以18?20℃為宜,溫度偏高有害菌活動(dòng)能力強(qiáng)，溫度偏低不利于乳酸發(fā)酵。

專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1.培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)

的物質(zhì)基礎(chǔ)。

(1)種類一液體培養(yǎng)基,固隹培養(yǎng)基(按物理性質(zhì)分)。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂(是從紅藻中

提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑)后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，

可以形成肉眼可見的菌落。

(2)成分一碳源、氮源、水、無機(jī)鹽。

培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)

基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性,培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pll調(diào)至中性或微堿性,培養(yǎng)厭

氧型微生物拈則需要提供無氧的條件

2.無菌技術(shù):獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。

消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽抱

和抱子)。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法(對(duì)于一些不耐高溫的液體)還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯

氣、石炭酸等)道蜜、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽抱和抱子“滅菌方法有灼燒滅菌、

干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。實(shí)驗(yàn)室常用器具的滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；

②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓

蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

3.制備固體培養(yǎng)基

(1)一般步驟：計(jì)算f稱量f溶化f滅菌f倒平板。

(2)倒平板操作的步驟：

①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。

②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。

③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10?20mL)

倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。

④等待平板冷卻凝固,大約需5?lOmin。然后，將平板倒過來放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。

【倒平板操作的討論】

1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手,就可以進(jìn)行倒平板了。

2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

提示：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

提示：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以避

免培養(yǎng)基中的水分過快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物

嗎？為什么？

提示：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。

4.純化大腸桿菌

(1)微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

(2)平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到

培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。

(3)稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將丕蠅程度的菌液分別涂布到瓊脂固體

培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。

(4)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能

在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。

【平板劃線操作的討論】

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)

嗎？為什么？

提示：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接

種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次

劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼

燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？

提示：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

提示：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)

目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。

【涂布平板操作的討論】

涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步

應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何

其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。

5.菌種的保存

(1)對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法:將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合

適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3?6個(gè)月，都要重新將菌種從舊

的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。

(2)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。

將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在一20'C的冷凍箱中保存。

6.確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法

將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1?2天，無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新

制備。

課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1.尿素：是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后,

才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣煞浮?/p>

2.篩選菌株

(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理

人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

(2)選擇性培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物

生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

(1)測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。

(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平

板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3?5個(gè)平板,選擇

菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)

或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。

4.設(shè)置對(duì)照

設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。對(duì)照實(shí)驗(yàn)

是指除了被測(cè)試的條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn),其作用是比照試驗(yàn)組,排除任何其他可能原因的干擾，

證明確實(shí)是所測(cè)試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。

確定選擇培養(yǎng)基是否篩選到目的菌？

實(shí)驗(yàn)組：用選擇培養(yǎng)基接種，培養(yǎng)后觀察菌落數(shù)

對(duì)照組：用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基接種，培養(yǎng)后觀察菌落數(shù)

5.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

篩選方法(原理)：以尿素作為唯一的氮源,在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅,pH升高，說

明細(xì)菌能分解尿素

流程為：土壤取樣f樣品的稀釋一微生物的培養(yǎng)與觀察f細(xì)菌的計(jì)數(shù)

(1)土壤取樣：從富含有機(jī)物、潮濕、pHg7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3?8cm的土壤

層取樣。

(2)樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常選用一定

稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，

一般選用IO"IO'IO,放線菌一般選用1()3I。，io,真菌一般選用IO?IO，1。

(3)微生物的培養(yǎng)與觀察

不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間“細(xì)菌30~37℃廣2天，放線菌25~28℃5~7

天，霉菌25~28℃3~4天。

每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果,這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足

而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間)，同種微生物

表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征：形狀、大小、隆起程度、顏色“

(4)計(jì)數(shù)：如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？

統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值。每克樣品中的

菌落數(shù)=(C/V)*M其中,C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的

體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)。

課題3分解纖維素的微生物的分離

1.纖維素與纖維素酶

(1)棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。

(2)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即3酶、Cx酶和葡萄糖甘酶，前兩種酶

使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生

長(zhǎng)提供營養(yǎng)。

2.纖維素分解菌的篩選

(1)篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。

(2)剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理

剛果紅是一種染料?，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖和

葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅

色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅一纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分

解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

3.分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程

土壤取樣f選擇培養(yǎng)(此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)f梯度稀釋一將樣品

涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上一挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。

(1)土壤采集：選擇富含纖維素的環(huán)境。

(2)剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟：倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板

(3)剛果紅染色法種類：一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng),另一種是在倒平板時(shí)就

加入剛果紅。

(4)對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分

解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所

產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定。

疑難解答：

(1)為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？

由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種

土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。

(2)將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？

將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般

應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。

(3)為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？

在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營

養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。

專題四酶的研究與應(yīng)用

課題一果膠酶在果汁生產(chǎn)中的應(yīng)用

1.果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，不溶于水，在果汁加工中不僅會(huì)影響出汁率還會(huì)使果

汁渾濁。

2.果膠酶是一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶，果膠分解酶和果膠酯酶等。果膠酶能夠分解果膠,瓦解

植物的細(xì)胞壁及胞間層使榨取果汁變得更容易,也使得渾濁的果汁變得澄清。

3.影響酶活性的因素有：溫度、PH、激活劑和抑制劑等。果膠酶作用的最適溫度為45—

50℃、最適pH范圍為3.0—6.0。Fe3+、Ca2+、Zn2+等金屬離子對(duì)酷有抑制作。

4.植物、霉菌、酵母菌和細(xì)菌均能產(chǎn)生果膠酶，通常生產(chǎn)上采用曲霉、青霉等微生物來生產(chǎn)果膠酶。食

品工業(yè)生產(chǎn)中最常用的果膠酶是通過霉菌發(fā)酵產(chǎn)生。

［思考3］果汁與果膠酶在混合之前，分裝在不同試管中用同一恒溫處理的目的是什么？

保證果汁與果膠醐混合前后的溫度相同，避免因混合導(dǎo)致溫度變化而影響果膠酶活性。

［思考4］該實(shí)驗(yàn)中是否設(shè)置了對(duì)照？若設(shè)置，那么它是如何設(shè)置的？若沒有，則如何進(jìn)行設(shè)置？

已經(jīng)設(shè)置了對(duì)照。不同的溫度設(shè)置之間可以相互對(duì)照。

［思考5］怎樣排除PH和其他因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾？目的是什么？

控制PH值和其他因素相同，保證只有溫度一個(gè)變量對(duì)果膠酶的活性產(chǎn)生影響。

［思考6］教材中A、B兩個(gè)同學(xué)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)有何不同？

測(cè)定的因變量不同（A測(cè)定果汁產(chǎn)量，B測(cè)定果汁澄清度）。

拓展：

1.想一想，為什么能夠通過測(cè)定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低？

提示：果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反應(yīng)了果

膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就越大。

2.為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理？

提示：將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證底物和酶在混合時(shí)的溫度是相同的，避

免了果泥和果膠酶混合時(shí)影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問題。

課題二、探討加酶洗衣粉的洗劑效果

1.加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶,

其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。酶制劑的特點(diǎn)：能夠耐酸、耐堿、忍受表面

活性劑和較高的溫度，并且通過特殊的化學(xué)物質(zhì)將酶包裹，與洗衣粉其他成分隔離。

2.堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污跡從衣物上

脫落。脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶也能分別將大分子的脂肪、淀粉和纖維素水解為小分子物質(zhì)，使洗衣粉具

有更好的去污能力

3.加酶洗衣粉可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷無磷方向發(fā)展，減少對(duì)環(huán)境的污染。

4.影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料、大小及浸泡時(shí)間和洗

滌的時(shí)間等。

5.普通洗衣粉與加酶洗衣粉的比較

【補(bǔ)充】普通洗衣粉的化學(xué)成分有：表面活性劑、水軟化劑、堿劑、漂白粉等成分，有的洗衣粉中還含

有增白劑、香精和色素，以及填充劑等。

普通洗衣粉1加酶洗衣粉

相同點(diǎn)表面活性劑可以產(chǎn)生泡沫，可以將油脂分子分散開；水軟化劑可以分散污垢；等等。

不同點(diǎn)酶可以將大分子有機(jī)物分解為小分子有機(jī)物，小分子有機(jī)物易于溶于水，從而與纖維分開。

【思考1】含有蛋白酶的洗衣粉的洗劑效果好，可以用絲綢作為實(shí)驗(yàn)材料嗎？

解析：不能?因?yàn)榻z綢的主要成分是蛋白質(zhì)，它會(huì)被加酶洗衣粉中的蛋白酶分解，損壞衣物。

【思考2】你打算使用什么方法和標(biāo)準(zhǔn)判斷洗滌效果？

提示：可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如：已消失、顏色變淺、面積縮小等，最好能進(jìn)行定量的比較。

課題三酵母細(xì)胞的固定化

一、實(shí)驗(yàn)原理

1.使用固定化酶技術(shù)，將這種酶固定在一種顆粒狀的載體上，再將這些酶顆粒裝到一

個(gè)反應(yīng)柱內(nèi)，柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無法通過篩板的小孔，而

反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過程中，將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入，使葡萄

糖溶液流過反應(yīng)柱，與固定化葡萄糖異構(gòu)酶接觸，轉(zhuǎn)化成果糖，從反應(yīng)柱的下端流出。

反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。

2.固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù),

包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理

吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而醐分子很??；個(gè)大

的難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從包埋材料中漏出。

固定化酶優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，還可以被反復(fù)利用。

固定化細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：成本更低，操作更容易，可以催化一系列的化學(xué)反應(yīng)。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.細(xì)胞的活化稱取1g干酵母，放入50mL的小燒杯中，加人蒸儲(chǔ)水10mL,用玻璃棒攪拌，使酵

母細(xì)胞混合均勻，成糊狀，放置lh左右，使其活化。

【注】活化：讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)

2.配制物質(zhì)的量濃度為0.05mol/L的CaCk溶液稱取無水CaCL0.83g。放人200mL的燒杯中，加入

150mL的蒸儲(chǔ)水，使其充分溶解，待用。

3.配制海藻酸鈉溶液稱取0.7g海藻酸鈉，放入501nL小燒杯中。加人10mL水，用酒精燈加熱，邊加

熱邊攪拌，將海藻酸鈉調(diào)成糊狀，直至完全溶化，用蒸儲(chǔ)水定容至10mL。注意，加熱時(shí)要用小火，或者間

斷加熱，反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止。

4.海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加人已活化的醉母細(xì)胞，進(jìn)

行充分?jǐn)嚢?，使其混合均勻，再轉(zhuǎn)移至注射器中。

【注】冷卻至室溫的目的：防止殺死酵母菌

5.固定化酵母細(xì)胞

以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的CaCb溶液中，觀察液滴在CaCb溶液中形成凝

膠珠的情形。將這些凝膠珠在CaCh溶液中浸泡30min左右。

【注】CaCl2溶液的作用：使膠體聚沉

6.使用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵

a)將固定好的酵母細(xì)胞(凝膠珠)用蒸鐳水沖洗2-3次。

b)將150mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的葡萄糖溶液轉(zhuǎn)移到200mL的錐形瓶中，再加入固定好的

酵母細(xì)胞，置于25℃下發(fā)酵24h。

三、注意事項(xiàng)

1.配制海藻酸鈉溶液：小火、間斷加熱、定容，如果加熱太快，海藻酸鈉會(huì)發(fā)生焦糊。

2.海藻酸鈉溶液與酶母細(xì)胞混合：冷卻后再混合，注意混合均勻，不要進(jìn)入氣泡

3.制備固定化酵母細(xì)胞：高度適宜，并勻速滴入

4.剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaCL2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便Ca2+與Na+充分交換，形成的凝膠珠穩(wěn)定。

檢驗(yàn)?zāi)z珠是否形成，可用下列方法：用鏡子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果不容易破裂，沒

有液體流出就表明成功地制成了凝膠珠，還可以用手將凝膠珠在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打，如果凝膠珠很容易彈起,

也表明制備的凝膠珠是成功的。

5.凝膠珠的顏色和形狀

如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少；如果形成

的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉的濃度偏高，制作失敗，需要再作嘗試。

專題五血紅蛋白的提取和分離

一、實(shí)驗(yàn)原理

蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千差萬別，由此提

取和分離各種蛋白質(zhì)。

1.凝膠色譜法(分配色譜法)：

(1)原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝

膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。

(2)凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。

(3)分離過程：

混合物上柱f洗脫一大分子流動(dòng)快、小分子流動(dòng)慢一收集大分子f收集小分子

【注】｝洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。

(4)作用：分離蛋白質(zhì)，測(cè)定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。

2.緩沖溶液

(1)原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成(如H￡0s—NaHCO：”NaH2P04/NazHPO”等)，調(diào)節(jié)酸和鹽的用

量，可配制不同pH的緩沖液。

（2）緩沖液作用：抵制外界酸、堿對(duì)溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。

3.凝膠電泳法：

（1）原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同,在電場(chǎng)中受到的作用力大小、方向、阻

力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。

（2）分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。

（3）分離過程：在一定pH下，使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電；加入帶負(fù)電荷多的SDS,形成

“蛋白質(zhì)一SDS復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.樣品處理

①紅細(xì)胞的洗滌

洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白,采集的血樣要及時(shí)采用低速短時(shí)間離心分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管

吸出上層透明的黃色血漿,將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯,再加入五倍體積的生理鹽水,緩慢攪拌

lOmin,低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒有黃色,表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。

②血紅蛋白的釋放

在蒸儲(chǔ)水和甲苯作用下,紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。

注：加入蒸儲(chǔ)水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜，有利于血紅蛋白

的釋放和分離。

2.粗分離

①分離血紅蛋白溶液

將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層,第2層為白色薄層

固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層,第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液,第4層是其他雜質(zhì)的暗紅

色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透

明液體。

②透析

取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中,將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的磷酸

緩沖液中,透析12h。透析可以去除樣品中分子量較小的雜質(zhì),或用于更換樣品的緩沖液。

3.純化

調(diào)節(jié)緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝

I膠面平齊，關(guān)閉出口。

加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動(dòng)加到色譜柱的頂端。加樣后，

I打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后，

I關(guān)閉出口。

調(diào)節(jié)緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度

I

洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫。

I

收集分裝蛋白質(zhì)：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集。

4.純度鑒定----SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）

三、注意事項(xiàng)

1.電泳技術(shù)

電泳技術(shù)就是在電場(chǎng)的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性

質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達(dá)到對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。

2.紅細(xì)胞的洗滌

如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)

使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。

3.如何檢測(cè)凝膠色譜柱的裝填是否成功

由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填

得均勻。

止匕外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色

譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。

4.為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？

如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從

這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果。

5.沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的？

不但節(jié)約時(shí)間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠內(nèi)的空氣。

6.G-75“G”代表凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸

水7.5g。

7.裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填緊密

8.加入檸檬酸鈉有何目的？為什么要低速、短時(shí)離心？為什么要緩慢攪拌？

防止血液凝固；防止白細(xì)胞沉淀；防止紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。

9.與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對(duì)進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的意義

哺乳動(dòng)物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀，沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器。其含有的血紅蛋白是有色蛋白，

因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀,

大大簡(jiǎn)仆T室哈操作

io.如何檢測(cè)血ic蛋白的分離是否成功

如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、

平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝

填有關(guān)。

專題六植物有效成分的提取

課題1植物芳香油的提取

1.天然香料的來源：植物、動(dòng)物

2.芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以苗類化合物及其衍生物為主。

3.芳香油的提取方法：蒸毛、壓榨、萃取等。

（1）水蒸氣蒸儲(chǔ)法：

原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。

方法：①水中蒸儲(chǔ)：原料放在沸水中加熱蒸儲(chǔ)。②水上蒸儲(chǔ)：原料隔放在沸水上加熱蒸儲(chǔ)。③水汽蒸鐳:

利用外來高溫水蒸氣加熱蒸館。

不足：有些原料不適宜于水中蒸儲(chǔ)，如柑橘、檸檬等易焦糊,有效成分容易水解。

（2）壓榨法：通過機(jī)械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來的一種簡(jiǎn)單操作。

（3）萃取法:

原理：芳香油易溶于有機(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。

方法：原料浸泡在溶劑中f得到浸泡液=有機(jī)溶劑揮發(fā)f芳香油。

不足：有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)。

4.提號(hào)玫鮮玫瑰花+清水=水蒸汽蒸鏘=油水混合物」^f分離油層實(shí)驗(yàn)

（1）玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)

穩(wěn)定，難溶于水,――.檎水3^玫瑰油

易溶于有機(jī)溶

劑，能隨水蒸氣一同蒸儲(chǔ)。

（2）方法：水蒸氣蒸儲(chǔ)法。

（3）實(shí)驗(yàn)流程：（熟記）

①采集玫瑰花：采集盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。

②加入NaCl的目的是增加鹽的密度，有利于玫瑰油與水的分層。

③加入無水Na2sol的目的是吸收精油中殘留的水分。

注意事項(xiàng)：蒸儲(chǔ)時(shí)間不能過短，溫度不能過高。

5.提取橘皮精油的實(shí)驗(yàn)：（熟記）

（1）提取出的橘皮精油，無色透明，主要成分為檸檬烯，主要分布在橘皮中。

（2）方法：一般用壓榨法。

（3）實(shí)驗(yàn)流程：（熟記）

干燥去水n石灰水浸泡n漂洗n壓榨n過濾（普通布袋過濾）n靜置

=再次過濾（濾紙過濾）n橘皮油

①石灰水浸泡：用石灰水浸泡橘皮10h以上。石灰水：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率。

②清水漂洗：浸泡好的橘皮用遮水徹底漂洗干凈，瀝干。

③粉碎和壓榨：將橘皮粉碎，加入小蘇打和硫酸鈉后,用壓榨機(jī)壓榨得到壓榨液。小蘇打、硫酸鈉：促

進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.25%和5%）。

④過濾壓榨液：用布袋過濾,除去固體物和殘?jiān)?。濾液離心進(jìn)一步除去質(zhì)量較小的殘留固體物。再用分

液漏斗或吸管分離出上層橘皮油。

⑤靜置處理：將橘皮油在5?10℃冰箱中靜置5?7d,分離出上層澄清橘皮油。目的：除去果蠟和水分。

⑥再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并，得到橘皮精油。

課題2胡蘿卜素的提取

1.胡蘿卜素性質(zhì)：橘黃色結(jié)晶,化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水,微溶于乙醇,易溶于石油酸等有機(jī)溶劑。依

據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目劃分為a、B、y三類。其中最主要的組成成分為8-胡蘿卜素。

2.作用：①治療夜盲癥、幼兒生長(zhǎng)發(fā)育不良、干皮癥等疾病；②常用于食品色素；③使癌變細(xì)胞恢復(fù)成正常

細(xì)胞。

3.提取B—胡蘿卜素的方法主要有三種：①從植物中提?。虎趶拇竺娣e養(yǎng)殖的巖藻中獲得；③利用微生物的

發(fā)酵生產(chǎn)。

4.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（1）方法：萃取法,石油酸最適宜作萃取劑。

（2）實(shí)驗(yàn)流程：（熟記）

原料n粉碎n干燥n萃取n過濾=濃縮n胡蘿卜素

①粉碎：使原料與有機(jī)溶劑充分接觸，增大溶解度。

②干燥：脫水溫度太高，干燥時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解。

③萃取

I、萃取劑的選擇

水溶性的：乙醇、丙酮。

水不溶性的：石油酸、乙酸乙酯、