17-孫-cobas分子診斷平臺介紹1118 - 副本

自動化檢測助力分子診斷

－實現精準醫(yī)療

上海市第十人民醫(yī)院

孫奮勇ThispresentationwassponsoredbyRoche全球體外診斷（IVD）銷售額排列Source:Industryanalystreport,Rocheanalysis,companyreports,excludesLifeSciencesandInsulinPumps羅氏分子診斷

全球排名第一Source:Industryanalystreport,Rocheanalysis,companyreports(2014)羅氏分子診斷

產品細分cobasAmpliPrepcobasTaqMancobasz480cobas4800Virology（病毒學）檢測：HIV,HCV,HBV,平臺：cobasAmpliPrep/cobasTaqMansystemoncology（腫瘤學）Women’shealth（婦女健康）檢測：HPV,CT/NG平臺：cobas4800system檢測：BRAF,KRAS,EGFR平臺：cobasz480cobasHPV檢測產品介紹

cobasCT/NG檢測產品介紹CAP/CTM肝炎病毒核酸檢測產品介紹cobasoncology檢測產品介紹上樣＋裝載試劑及耗材樣本制備擴增＋檢測結果計算＋報告Automationcobas4800HPV&CT/NG檢測cobas4800系統(tǒng)－

cobas4800HPV檢測1次檢測可在4個通道內分別報告HPV16型，HPV18型，其他12種高?；旌闲图皟荣|控β-globin的結果

2015ASCCP/SGO全球最具影響力的宮頸癌篩查指南當前唯一推薦的HPV檢測初篩方法精準篩查，風險分層ATHENA臨床研究驗證cobas4800系統(tǒng)

cobas4800HPV檢測自動化，高通量只檢測與宮頸癌相關的14種高危型HPV病毒，并對其中的16型、18型進行準確分型操作簡便，無需人工干預一次檢測94個標本（4.9小時），一天可檢測282個標本

cobasHPV擁有經過臨床驗證的cut-off值

HPV檢測的目的是發(fā)現目前有高級別病變或未來有發(fā)展為高級別病變風險的人群，而不是檢測HPV病毒本身——必須要有經過臨床驗證的Cut-off值SnijdersPJFetal.JPathol,200310,000,0001,000,000100,00010,0005,0001,00010010經臨床驗證的HPV檢測方法未經驗證的HPV檢測方法HPV檢測需要根據基于人群大規(guī)模的臨床數據，尋找合適的切點值（cutoff值）高級別病變的可能性增加無臨床相關性感染的可能性增加病毒拷貝數cobasHPV應用價值

HPV檢測的分析敏感性和臨床敏感性cobasHPV應用價值

美國FDA公布的HPV檢測試劑指引臨床閾值的選擇適當臨床cutoff值的選擇，應該是在基于臨床樣本的預試驗研究中，通過調整基于受試者操作曲線（ROC）靈敏度和特異性達到相當水平來實現。參考譯文：cobasHPV檢測是全自動熒光PCR（聚合酶鏈式反應）HPV檢測方法，2011年4月被FDA批準，開發(fā)該產品的目的是為了最大化臨床效用。其陽性結果閾值（cutoff）的確定，是基于高級別宮頸病變（CIN2+）的檢測能力，而不是為了檢測最小數量的病毒拷貝。cobas4800HPV檢測的臨床閾值的設定RaoA,et.JClinMicrobiol.2013May;51(5):1478-84.doi:10.1128/JCM.03386-12.Epub2013Feb27.參考譯文：為了得到理想的臨床敏感度，cobasHPV臨床閾值的確定，是先通過最初的臨床驗證研究（第一期）挑選合適的臨床閾值；然后在接下來的臨床驗證研究（第二期）中進行有效性確認。在第一期研究中，參與ATHENA臨床驗證的大約29000名婦女進行了篩查…….cobas4800HPV檢測的臨床閾值的設定RaoA,et.JClinMicrobiol.2013May;51(5):1478-84.doi:10.1128/JCM.03386-12.Epub2013Feb27.cobasHPV檢測臨床cutoff設定的過程

通過29,000人設定閾值;在18,000人中再次驗證;

共計7,720例活檢

通道1(12HRHPVGT)通道2(GT16)通道3(GT18)未調整的敏感性未調整的特異性36.036.036.082.4%71.3%36.036.036.582.4%71.2%36.036.536.083.7%71.1%42.042.042.090.4%51.4%40.0

40.5

40.0

90.4%158.4%11在整體人群中2016年ACOG實踐公告推薦

沿用2012年ASCCP的分型規(guī)定只需針對HPV16/18基因分型對≥30歲女性，細胞學（-）HPV（+）的婦女進行HPV16/18基因分型檢測2016ACOGPracticeBulletinNo.157CFDA頒布

HPV核酸檢測及基因分型試劑技術審查指導原則（2015.11）HPV檢測試劑應只針對高危型HPV型別鑒于HPV病毒載量與宮頸癌風險尚無明確相關性，且樣本采集方法不利于量值溯源，建議HPV檢測試劑的定位為定性檢測，不建議進行定量或半定量檢測的試劑注冊HPV檢測試劑，需提供能夠獲得理想臨床敏感性和特異性的陽性判斷值（cutoff)確定資料申報一線初篩臨床用途的，需提供相關臨床驗證，否則不得單獨使用進行宮頸癌篩查cobasHPV檢測產品介紹

cobasCT/NG檢測產品介紹CAP/CTM肝炎病毒核酸檢測產品介紹cobasoncology檢測產品介紹我國重點防控的性病HIV梅毒淋病沙眼衣原體感染生殖器皰疹病毒感染乳頭瘤病毒感染……ChinaMegaProject,2010.SexTransmDis2006;33:296-301世界衛(wèi)生組織估計2008年的性病疾病負擔為：10040萬生殖道沙眼衣原體感染，3640萬淋病，3640萬梅毒我國的流行病學調查表明：生殖道沙眼衣原體感染成為不同女性人群最常見的性病淋病在高危人群中有高感染率全球不同性病患病估計數我國不同人群不同性病患病率

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?2013RocheCT/NG盆腔炎不孕不育異位妊娠慢性疼痛附睪炎輸卵管炎CT/NG感染引起相關疾病尿道炎結膜炎http://在女性中，約80－90％的CT感染和50％的NG感染是無癥狀的NAAT成為CT/NG臨床診斷和流行病學調查的重要檢測手段在國家性病指南中首選NAATs方法用于有CT/NG檢測在國家CT篩查規(guī)劃中規(guī)定使用NAATs方法cobasx480instrumentcobasz480analyzer可用于有癥狀和無癥狀人群的臨床診斷和篩查全自動檢測平臺適合多種樣本類型：尿液

宮頸拭子陰道拭子液基樣本cobas?4800CT/NG檢測應用體外核酸擴增技術定性檢測沙眼衣原體Chlamydiatrachomatis(CT)和淋球菌Neisseriagonorrhoeae(NG)唯一獲批的具有FDA及CFDA認證的CT/NG檢測試劑cobas4800系統(tǒng)

cobas4800CT/NG檢測試劑質量保證確?？煽拷Y果AmpErase酶減少擴增子污染導致的假陽性

優(yōu)化運算法則確保結果可靠性雙區(qū)域擴增減少突變導致的假陰性內質控減少潛在的假陰性++唯一同時獲得CFDA和FDA認證的CT/NG檢測試劑SampleTypeCTNGNSens%Spec%NSens%Spec%宮頸內膜拭子431691.6%99.8%431695.6%100.0%女性尿液431692.3%99.8%431698.5%99.9%陰道拭子216594.6%99.7%216497.0%100.0%PreservCyt(Pre-ThinPrep)423692.8%99.6%423997.1%99.9%PreservCyt(Post-ThinPrep)420289.7%99.7%420395.7%100.0%男性尿液76897.6%99.5%768100.0%99.7%*statusdefinedbyconcordanceof2/3results.VanDerPol,B.ExpertRev.Mol.Diagn.13(2),131-140,2013.各種樣本類型檢測結果均有穩(wěn)定表現

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?2013Rochecobas

CT/NG檢測給臨床帶來意義

特點獲益兼顧拭子及尿液樣本檢測1尿液檢測為孕早期診斷提供方便2非侵入是檢測減輕了孕婦的心理負擔，減少取樣帶來的風險3降低了醫(yī)生的工作量4無創(chuàng)式取樣，減少男性患者取樣痛苦，保護了患者隱私檢測結果高準確性1提高了醫(yī)院的診療水平，2避免了診斷錯誤帶來的醫(yī)療糾紛一次取樣，兩個結果1減少了醫(yī)生的工作量2避免多次取樣導致的誤差2.5個小時出結果為醫(yī)生快速診斷提供依據，方便醫(yī)生及時治療，減輕病人痛苦cobasHPV檢測產品介紹

cobasCT/NG檢測產品介紹CAP/CTM肝炎病毒核酸檢測產品介紹cobasoncology檢測產品介紹HIV-使用雙區(qū)域檢測-準確定量艾滋病人血液中的病毒載量羅氏分子診斷產品

CAPCTM檢測平臺HCV-雙探針檢測-準確定量HCVRNA，幫助臨床醫(yī)生預測遠期療效并制定個體化療程HBV-更靈敏的檢測試劑-準確定量HBVDNA，幫助臨床醫(yī)生監(jiān)測病毒應答并預測遠期療效第一個真正意義上全自動化的實時熒光定量PCR病毒載量平臺,具有樣品進--結果出(sample-in,result-out)

的特點DesignedtoeliminatecontaminationthroughoutitsentireoperationCOBAS?AmpliPrep/COBAS?TaqMan

病毒載量系統(tǒng)

專業(yè)化、簡單化、標準化“精”于核酸提?。?/p>

COBAS?AmpliPrep?磁珠法核酸分離技術，提高靈敏度28DNA或者RNA1.裂解2.結合病毒或細胞3.洗滌4.洗脫37°C孵育室溫80°C孵育Cobas?AmpliPrep?全自動核酸提取純化系統(tǒng)：提高分析靈敏度交叉污染風險降至最低技術原理：通過超順磁性顆粒與核酸分子特異性識別和高效結合，在外加磁場作用下，把血液等樣本中的核酸分離出來。潘世揚主編.臨床分子診斷學.人民衛(wèi)生出版社.2013年第1版.P94酚氯仿法旋轉離心柱法玻璃粉吸附法二氧化硅吸附法磁珠法傳統(tǒng)方法Cobas?AmpliPrep?全自動核酸提取純化煮沸法“準”于內標定量質控29潘世揚主編.臨床分子診斷學.人民衛(wèi)生出版社.2013年第1版.P313國家食品藥品監(jiān)督管理局YY/T1182-2010LoleKS,etal.JVirolMethods.2006;135(1):83-90.羅氏內標定量：在每份檢測樣本中加入已知濃度的HBV/HCV定量標準品（HBV/HCVQS)進行定量檢測避免假陰性結果出現得到每份樣品的精確定量結果檢測結果可溯源從提取步驟開始添加內標，可有效監(jiān)控核酸提取處理、PCR擴增檢測全過程HBV/HCVQS與目的DNA/RNA具有相同的丟失率，可對提取及擴增過程中的抑制作用進行補償根據WHO

HBVDNA/HCVRNA核酸檢測技術實驗標準進行標化處理COBAS?TaqMan?HBV2.0使用3條引物，選擇Pre-core/Core區(qū)作為靶標1，2:對基因A-H型中均高度保守避免常見突變導致的漏檢YMDD*雙核心啟動子突變*Precore突變*已通過臨床驗證***1.YuY,etal.BiotechnolBioeng,2005;89:670-6792.HuntC.M.,etal.Hepatology2000;31:1037–1044.選擇合適的引物和探針是擴增成功和保證檢測能力的關鍵1COBAS?HBVDNA獨特引物和探針設計，

避免常見的基因突變導致的漏檢

靶標位于C區(qū)與PC區(qū)結合位，基因組的擴增區(qū)不受耐藥導致的突變影響COBAS?AmpliPrep?

/COBAS?TaqMan?系統(tǒng)：

精準檢測，更好滿足臨床需求COBASTaqmanHBVDNAV2.0COBASTaqmanHCVRNAV2.0COBASTaqman優(yōu)越性靈敏度20IU/mL15IU/mL精確定量檢測結果，更準確監(jiān)測療效線性范圍20-1.7x108

IU/mL15-1.0x108

IU/mL寬泛的線性范圍，覆蓋大部分臨床樣本，減少二次檢測定量方法內部定量標準品法內部定量標準品法避免PCR反應管間差異，確保定量準確自動化全自動全自動提高檢測重復性；避免污染，杜絕假陽性可溯源性WHO標準品WHO標準品確保結果準確，可溯源基因型涵蓋亞型:A-H加強pre-core突變檢測G1-6泛基因型覆蓋，減少漏檢311991–19992000–20032004–2008INTRON?A 1991

Interferonalfa-2bEPIVIR-HBV?

1998

LamivudineHEPSERA? 2002

AdefovirdipivoxilBARACLUDE? 2005

EntecavirPEGASYS? 2005

Peginterferonalfa-2aTYZEKA? 2006TelbivudineVIREAD?(HBV)

2008

Tenofovirhttp:///ct2/show/NCT01300234COBAS?HBVDNA參與全球HBV主要抗病毒藥物注冊試驗

現有主要抗病毒藥物的FDA注冊臨床試驗

均使用cobasHBVDNA檢測系統(tǒng)32HBVDNA檢測技術的更新換代cobasHPV檢測產品介紹

cobasCT/NG檢測產品介紹CAP/CTM肝炎病毒核酸檢測產品介紹cobasoncology檢測產品介紹腫瘤的個體化醫(yī)療（PHC,PersonalizedHealthCare）

Atailoredapproachtoimprovetreatmentoutcomes伴隨診斷靶向藥物目前美國FDA批準的伴隨診斷都應用于腫瘤治療

羅氏是唯一一家可同時提供藥品和診斷測試的公司U.S.FDA,CompanionDiagnosticDevices:InvitroandImagingToolscobas?EGFR檢測技術平臺

cobas4800全自動核酸提純及熒光PCR分析系統(tǒng)cobas

KRAS突變檢測-鑒別EGFR抑制劑治療無效的晚期結直腸癌患者

-檢測12，13，61密碼子cobas

EGFR突變檢測-幫助非小細胞肺癌患者選擇合適的治療

-檢測41種突變位點，FDA認證，NICE推薦cobas

BRAFV600

突變檢測-幫助晚期黑色素瘤患者選擇合適的治療-FDA認證，結果經過大型臨床試驗驗證HPV-檢測14種高危型HPV，并對HPV16/18基因分型-1次檢測可完成2次篩查，更好地進行風險分層管理-FDA/CE認證CT/NG-FDA認證-用于CT/NG的篩查和診斷，檢測標本類型包含分泌物、尿液cobasEGFR突變檢測的特點

全球突變覆蓋范圍最廣外顯子18Freq外顯子19Freq外顯子19Freq外顯子19Freq外顯子20Freq外顯子21FreqG719A62390.8%Del622317.8%Del123870.3%Del135500.1%T790M62402.8%L