細菌性疾病監(jiān)測標(biāo)本采集常見問題及技術(shù)要求

山東省2012-2015

年流腦健康

人群帶菌率調(diào)查結(jié)果1當(dāng)前1頁，總共22頁。合格樣本采集的前期工作明確采樣目的：通過實驗室檢測手段，對不明原因的病人或者人群進行確診和溯源。以達到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早隔離的目的。采前需知：樣本種類？采集時間？信息？采集方法？樣本量？保存？送樣？做好準(zhǔn)備工作：落實參加人員（培訓(xùn)）、樣本采集所需器材物品、防護措施、樣本的運送方式及工具。認真落實并實施：職責(zé)劃分與落實、溝通協(xié)調(diào)（省市間、市縣間、流調(diào)人員與檢驗人員間），結(jié)果反饋。

2當(dāng)前2頁，總共22頁。樣本采集的要求

及時性？病源樣本、腦脊液樣本、血清樣本合理性？雙份血（病例的急性期與恢復(fù)期血清；免疫成功率血清）信息的清晰與完整性？歸屬關(guān)系，采樣日期，檢測樣本編號與樣本來源者一致性問題采樣部位的準(zhǔn)確性？樣本量足夠？腦脊液、血清密閉性：防治泄漏避免污染：廢棄物的處理3當(dāng)前3頁，總共22頁。采前準(zhǔn)備（一）人員的培訓(xùn)：人員相對固定（尤其是實驗室人員）；采樣器材的準(zhǔn)備；采樣基本信息登記表；個人防護措施：隔離衣、口罩、手套、鞋套等樣品的運輸和保存措施；4當(dāng)前4頁，總共22頁。采前準(zhǔn)備（二）鼻咽拭子：平板、無菌咽拭子、壓舌板；血樣本：平板（增菌液）、一次性注射器、采血管、止血帶、無菌棉簽；腦脊液：平板、無菌保存管；信息記錄：油性筆、簽字筆、采樣單；樣品保存措施：冰排、冷藏箱、熱水袋等（視樣本種類選擇）；其他：試管架、剪刀、酒精/碘酒、膠布、酒精燈、防護用品、垃圾袋等。5當(dāng)前5頁，總共22頁。樣本的采集樣本的采集樣本的處理常見問題及要求6當(dāng)前6頁，總共22頁。流腦CSF樣本

如果為疑似腦膜炎病例,腦脊液是分離和鑒別病原菌的最佳樣本。采集過程應(yīng)無菌操作，至少1～3mL?？捎?.1～0.5mL直接接種巧克力或雙抗巧克力平板，其余應(yīng)立即送至微生物學(xué)實驗室進行樣本處理與保存。適宜檢測的樣本為腦脊液（CSF）、血液、皮膚黏膜瘀點或瘀斑組織液及鼻咽拭子。7當(dāng)前7頁，總共22頁。流腦血液樣本無菌操作抽取發(fā)熱患者全血5～10mL，取0.1～0.5ml直接接種巧克力或雙抗巧克力平板，1mL用來作血清學(xué)檢測，其余采集后應(yīng)立即注入30ml增菌用的葡萄糖肉湯增菌液內(nèi)?；颊邞?yīng)采集發(fā)病早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL，檢測血清中特異性抗體滴度。。瘀點或瘀斑選取患者皮膚上的新鮮瘀點或瘀斑，生理鹽水消毒后用針頭挑破，擠出組織液，用消毒的玻片直接蘸取組織液涂片，革蘭氏染色鏡檢。也可用無菌棉簽沾取組織液接種含雙抗的葡萄糖肉湯管中，送至微生物學(xué)實驗室進行檢測。8當(dāng)前8頁，總共22頁。流腦鼻咽拭子樣本的采集：對病人密切接觸者和健康人群進行帶菌檢驗時采集鼻咽拭子。

采樣時令受檢者張開口，用無菌棉拭子探入口腔內(nèi)懸雍垂后面的鼻咽部位，涂抹該部位粘膜分泌物，直接接種雙抗巧克力平板，也可將咽拭子放入液體雙抗增菌管內(nèi)，一送至微生物學(xué)實驗室進行檢測。

注：鼻咽拭子相比口咽拭子可以產(chǎn)生較高的陽性結(jié)果，因此咽拭子采集部位很重要9當(dāng)前9頁，總共22頁。咽拭子采集10當(dāng)前10頁，總共22頁。流腦注意事項

腦膜炎奈瑟菌對溫度較為敏感，溫度過高或過低均可導(dǎo)致菌株死亡。采集樣本后，應(yīng)盡量做到旁床接種，若無可能則應(yīng)在最短時間內(nèi)送至實驗室進行接種培養(yǎng)。

接種過的培養(yǎng)基可在室溫（20℃～25℃）放置4～6小時，運送溫度不低于18℃不高于37℃。切記不能低溫運送。用于進行血清抗體及分子生物學(xué)檢測的CSF和血液樣本應(yīng)冷藏條件下送檢。

11當(dāng)前11頁，總共22頁。百日咳

適宜檢測的樣本為腦脊液（CSF）、鼻咽拭子

鼻咽抽吸物、血液。咳碟法

用咳碟法采集樣品時，應(yīng)在病人咳嗽時，將包－姜(Bordet－Gengou）或炭瓊脂培養(yǎng)基平板打開放在病人口前10cm處，使病人對準(zhǔn)平板表面咳嗽數(shù)次，直接收集病人咳出的飛沫。然后蓋好平皿蓋送檢。平板暴露時間以15s為宜。12當(dāng)前12頁，總共22頁。百日咳鼻咽拭子及其保存液：聚丙烯纖維頭的塑料拭子

由于百日咳多發(fā)于兒童，所以采樣時，病兒的頭部斜依于母親的胸懷，母親以雙手固定病兒的頭部，醫(yī)師以右手執(zhí)棉拭子，左手按病人的頭頂部，使頂端稍向下彎的棉拭子自前鼻孔進入，沿下鼻道的底部向緩緩深入，由于鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待棉拭子頂端到達鼻咽腔后壁時，將棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后輕輕旋轉(zhuǎn)一周，緩緩取出棉拭子接種平板后放入保存液中。13當(dāng)前13頁，總共22頁。

百日咳×14當(dāng)前14頁，總共22頁。培養(yǎng)平板底部貼標(biāo)簽，現(xiàn)場劃線法接種至碳瓊脂培養(yǎng)基上，接種后鼻拭子放回帶有轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基的拭子管中。注意：將接觸鼻咽后壁的拭子頂端劃線，而非拭子頭側(cè)面劃線。百日咳24小時內(nèi)，≥20℃運輸鼻咽拭子本登記表5%CO2,37℃培養(yǎng)7-14天Genebox接種后的鼻拭子隨同培養(yǎng)基平板冷藏運送至實驗室，-20℃以下低溫凍存待送檢。15當(dāng)前15頁，總共22頁。百日咳病人血清樣本

無菌操作抽取患者早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL放入無菌血清管中，旋緊蓋子，做好標(biāo)記，盡快送檢。檢測血清中特異性抗體滴度。

16當(dāng)前16頁，總共22頁。

百日咳－樣本采集的最佳時期（周）1717當(dāng)前17頁，總共22頁。白

喉

適宜檢測的樣本為血液、咽拭子、假膜。病人咽拭子樣本：用無菌長柄棉拭子從疑似患者咽喉假膜邊緣蘸取樣本或同時采取鼻咽拭子接種血平板或亞蹄酸鉀血平板送檢。帶菌者或疑似病人咽拭子樣本：由于未見到假膜，故應(yīng)采集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物接種亞蹄酸鉀血平板送檢。病人血清樣本：無菌操作抽取患者早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL放入無菌血清管中，旋緊蓋子，做好標(biāo)記，盡快送檢待檢。18當(dāng)前18頁，總共22頁。19當(dāng)前19頁，總共22頁。白喉注意事項：在鼻咽拭子樣本采集前12小時內(nèi)，患者口腔不可用防腐劑（如漱口劑等）或用其涂抹病灶局部，采樣時應(yīng)避免觸及口腔粘膜與唾液。由于白喉桿菌在棉拭子上生存時間不長，易于死亡，故樣本采集后需立即接種。不能立即接種，應(yīng)將樣本侵于無菌生理鹽水或15％甘油生理鹽水中保存，盡快送檢。

20當(dāng)前20頁，總共22頁。樣本的保存與運送（一）疑似菌株

保存：將分離出的疑似菌株菌落保存在無菌牛奶凍存管中，旋緊蓋子并用封口膜封口，貼好標(biāo)簽，-20℃以下保存，并盡快送檢。

運送：將填寫完整的采樣單及菌株初篩實驗記錄，與冷凍條件下的菌種保存管一起送檢。在未落實菌株送檢成功信息前，應(yīng)保存菌株，以防菌株遺失。21當(dāng)前21頁，