第四章污染物生物效應(yīng)檢測(cè)詳解演示文稿

第四章污染物生物效應(yīng)檢測(cè)詳解演示文稿當(dāng)前1頁(yè)，總共98頁(yè)。優(yōu)選第四章污染物生物效應(yīng)檢測(cè)當(dāng)前2頁(yè)，總共98頁(yè)。污染物毒性生物測(cè)試優(yōu)點(diǎn)：1)生物測(cè)試不需特殊儀器、方法簡(jiǎn)單。2)可提供污染物的生物毒性，而常規(guī)的物理和化學(xué)檢測(cè)只能測(cè)定污染物的濃度。3）可測(cè)定污染物之間的相互作用,以及它們對(duì)生物體的綜合效應(yīng),而常規(guī)的物理和化學(xué)檢測(cè)則做不到。4）還可了解環(huán)境因素對(duì)污染物毒性的影響。如水體pH、溶氧量、氧化還原電位、水體中有機(jī)和元機(jī)配位體對(duì)污染物毒性的影響等 。

3當(dāng)前3頁(yè)，總共98頁(yè)。生物測(cè)試意義：1）研究多種污染物聯(lián)合作用的生物效應(yīng)。2）監(jiān)測(cè)環(huán)境質(zhì)量的變化。3）制訂環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4）對(duì)制訂排污標(biāo)準(zhǔn)，以及對(duì)污染物生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)有重要意義。4當(dāng)前4頁(yè)，總共98頁(yè)。但注意：（1）污染物結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、毒作用機(jī)理不同，同一種生物對(duì)不同污染物的反應(yīng)不同。（2）不同生物解毒機(jī)制、及能力不同，因而不同生物對(duì)相同污染物有不同的反應(yīng)。（3）不同發(fā)育階段的生物對(duì)同種污染物的反應(yīng)也不同。（4）受污染毒害的經(jīng)驗(yàn)也會(huì)影響生物對(duì)有毒污染物的反應(yīng)。

5當(dāng)前5頁(yè)，總共98頁(yè)。（一）生物測(cè)試方式根據(jù)不同的研究要求和目的，可進(jìn)行不同的測(cè)試。測(cè)試方法多樣，有按時(shí)間分的、有按試驗(yàn)溶液和氣體給予方式分的。1、短期生物測(cè)試（Shorttermbioassays）指被測(cè)試的生物在短時(shí)間內(nèi)暴露于高濃度的污染物下，測(cè)定污染物對(duì)生物有機(jī)體的影響。例：急性毒性試驗(yàn)，以快速估價(jià)污染物的毒性。6當(dāng)前6頁(yè)，總共98頁(yè)。1)測(cè)試目的：（1）快速估計(jì)污染物的毒性；（2）評(píng)價(jià)幾種毒物的相對(duì)毒性；（3）評(píng)價(jià)不同生物對(duì)不同條件如溫度、pH的相對(duì)敏感性等。主要用于測(cè)定半致死濃度(LC50)、或半抑制濃度(IC50)或半效應(yīng)濃度(EC50)。

2)時(shí)間設(shè)定：一般小于1周，如一般水蚤類<2d，藻類<3d，魚類<4d。7當(dāng)前7頁(yè)，總共98頁(yè)。3)測(cè)試特點(diǎn)（1）暴露時(shí)間短；僅幾天。（2）污染物濃度高；（3）一般采用靜止式給予有毒溶液或氣體。但對(duì)于下列情況，應(yīng)用流動(dòng)式給藥：1）不穩(wěn)定且易揮發(fā)的污染物（濃度會(huì)漸低)；2）BOD較高的污水(低O2)；3）代謝速率快的受試生物（產(chǎn)生高的代謝產(chǎn)物如CO2和NH3會(huì)影響受試生物的代謝。

8當(dāng)前8頁(yè)，總共98頁(yè)。2、長(zhǎng)期生物測(cè)試（Longtermbioassays）在低濃度下，受試生物長(zhǎng)期被暴露于污染物下的測(cè)試，又稱全部生活史生物測(cè)試，常見(jiàn)有慢性毒性試驗(yàn)。

1）測(cè)定目的測(cè)定在長(zhǎng)期污染下，不造成有害效應(yīng)的毒物最大濃度，或最大允許毒物濃度（MATC）。測(cè)定包括毒物對(duì)生物生長(zhǎng)、生殖、產(chǎn)卵、孵卵、幼體成活等的影響。9當(dāng)前9頁(yè)，總共98頁(yè)。2）時(shí)間確定

（1）對(duì)動(dòng)物而言，需要從一個(gè)卵期到下一個(gè)卵期或更長(zhǎng)的連續(xù)測(cè)定；（2）對(duì)于更小的生物如浮游生物，要持續(xù)好幾代測(cè)試；（3）但對(duì)生活史特別長(zhǎng)的動(dòng)物，人們則選擇在整個(gè)生活史中最敏感的幾個(gè)階段測(cè)試。如在魚的發(fā)育早期測(cè)定，這種測(cè)定又稱部分生活史生物測(cè)試。10當(dāng)前10頁(yè)，總共98頁(yè)。3)長(zhǎng)期生物測(cè)試要求(1)只能采用流動(dòng)式染毒性。(2)室內(nèi)試驗(yàn)條件，如水溫、pH、硬度等必需和自然季節(jié)變化相符。(3)受試生物的生長(zhǎng)、發(fā)育規(guī)律符合季節(jié)變化。

11當(dāng)前11頁(yè)，總共98頁(yè)。3、中期生物測(cè)試（Intermediatetermbioassays）（1）目的:

介于短期和長(zhǎng)期之間的一類生物測(cè)試。如亞慢性毒性試驗(yàn)。對(duì)毒物的毒作用、靶器官和最大無(wú)作用劑量或中毒閾值作出估計(jì)。（2）測(cè)試時(shí)間：8天之內(nèi)算是短期，8-90天之間中期。（3）毒物給予方式：無(wú)論毒物是溶液還是氣體，給予方式一般采用流動(dòng)式，少數(shù)可采用靜止式。12當(dāng)前12頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）受試生物的選擇1）對(duì)毒物敏感性：SO2的敏感植物：紫苜蓿、大麥、棉花、小麥、三葉草、甜菜、萵苣、大豆、向日葵。O3敏感植物：煙草、番茄、矮牽牛、菠菜、土豆、燕麥、丁香、秋海棠、女貞、梓樹(shù)。2）具生態(tài)學(xué)價(jià)值或經(jīng)濟(jì)價(jià)值。3）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)易培養(yǎng)和繁殖。4）具清楚的生物學(xué)背景資料如生活史、生長(zhǎng)、發(fā)育特點(diǎn)等；5）足夠的數(shù)量。6）對(duì)毒物的反應(yīng)的易測(cè)性。此外，個(gè)體大小、生活史長(zhǎng)短，以及以前受污染情況也需考慮。13當(dāng)前13頁(yè)，總共98頁(yè)。二、生物測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)化（一）影響生物測(cè)試的因素

1、受試生物：受試生物的種類、生長(zhǎng)年齡（生活階段、尺寸大小、脫皮階段）、發(fā)育階段、食物供應(yīng)程度等均影響生物對(duì)毒物的敏感性。

2、試驗(yàn)條件：如試驗(yàn)水質(zhì)的溫度和含鹽量、水流速度和溶解氧、水域的酸堿度、受試生物的總量，不僅影響生物對(duì)毒物的反應(yīng)，而且影響作用于生物的毒物濃度、性質(zhì)和形態(tài)。3、實(shí)驗(yàn)操作：實(shí)驗(yàn)結(jié)果還受人員操作水平、儀器設(shè)備的精度、測(cè)定方法的影響。14當(dāng)前14頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試的優(yōu)點(diǎn)1）增加數(shù)據(jù)的精確度，利于數(shù)據(jù)的比較。2）測(cè)試可以被其它實(shí)驗(yàn)室重復(fù)。3）篩選不同實(shí)驗(yàn)室一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4）可為環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)的建立提供可靠的數(shù)據(jù)，如飲用水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。15當(dāng)前15頁(yè)，總共98頁(yè)。（三）標(biāo)準(zhǔn)化的生物測(cè)試方法有《水質(zhì)物質(zhì)對(duì)蚤類急性毒性測(cè)定方法《B/T13266-91)》、《水質(zhì)物質(zhì)對(duì)淡水魚（斑馬魚）急性毒性測(cè)定方法(GB/T13267-91)》等。

主要對(duì)1）毒物的分析方法、環(huán)境條件的測(cè)定方法，2）儀器設(shè)備,3）生物大小、生物量，4）水的溶解氧和pH,5）統(tǒng)計(jì)方法作出了國(guó)家規(guī)定。但對(duì)那些易分解、非常見(jiàn)和混合污染物的測(cè)定還很難進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定。16當(dāng)前16頁(yè)，總共98頁(yè)。

第二節(jié)生物毒性試驗(yàn)一、生物毒性（一）生物毒性的基本概念1、毒物（Toxicant）和毒性（1）毒物：在一定條件下，以較小劑量給予有機(jī)體時(shí)，與生物相互作用后而引起功能或器質(zhì)性損傷的化學(xué)物質(zhì)稱毒物。或劑量雖微，但積累到一定量時(shí)，就能干擾或破壞機(jī)體的正常生理功能，而引起暫時(shí)或持久性病變，甚至危及生命的化合物，稱毒物。17當(dāng)前17頁(yè)，總共98頁(yè)。

（2）毒性(Toxicity):指毒物產(chǎn)生有害作用的能力。與下列因素有關(guān)：1）進(jìn)入機(jī)體的劑量。體內(nèi)潛在性有毒物質(zhì)存在并不意味發(fā)生中毒，通常只有達(dá)中毒劑量時(shí)，才可引起中毒。2）進(jìn)入機(jī)體的方式（如經(jīng)口、皮膚或呼吸）。3）接觸時(shí)間及頻率。時(shí)間越長(zhǎng)、頻率越高，越引起中毒。

18當(dāng)前18頁(yè)，總共98頁(yè)。

2、中毒（toxication）受到毒物作用，引起生物有機(jī)體功能和器質(zhì)性損傷后，所出現(xiàn)的疾病狀態(tài)稱中毒。如有機(jī)磷中毒后出現(xiàn)的震顫、出汗、瞳孔縮小等。中毒是在各種毒物作用下，在局部或全身的綜合表現(xiàn)。（1）毒效應(yīng)或毒性作用化學(xué)物引起生物有機(jī)體的損傷的總稱為毒性作用或毒效應(yīng)?？捎孟嚓P(guān)生理生化指標(biāo)表示。如有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶活性的抑制；苯抑制造血功能而引起貧血。19當(dāng)前19頁(yè)，總共98頁(yè)。

（2）毒物反應(yīng)（reaction）

指接觸化學(xué)物質(zhì)后，表現(xiàn)某種效應(yīng)的個(gè)體在一個(gè)群體中所占的比例。（3）毒物危險(xiǎn)性和危害性

1）毒物危險(xiǎn)性指某一化學(xué)物質(zhì)在正常生產(chǎn)、使用過(guò)程中，能引起有機(jī)體發(fā)生中毒的可能性，稱毒物危險(xiǎn)性，是毒物對(duì)個(gè)人或群體的毒性效應(yīng)和產(chǎn)生疾病甚至死亡的定量估計(jì)。20當(dāng)前20頁(yè)，總共98頁(yè)。

2）毒物危害性：指有毒物質(zhì)與有機(jī)體接觸和使用過(guò)程中，有引起中毒的可能性，稱毒物危害性，用來(lái)定性表示毒物對(duì)人群健康引起的有害作用。物質(zhì)危害性的大小一般與物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)的能力和數(shù)量有關(guān)，揮發(fā)性小，易溶于水或血液中，并能迅速達(dá)到中毒濃度的物質(zhì)的危害性大。

21當(dāng)前21頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）毒性參數(shù)1、常用毒性參數(shù)

（1）致死劑量或致死濃度(LD，lethaldoseorLC，lethalconcentration)①絕對(duì)致死劑量或濃度（LD100，AbsolutelethaldoseorLC100，Absolutelethalconcentration）指一群動(dòng)物全部死亡的最低劑量或濃度。②半致死劑量或濃度（LD50，MedianlethaldoseorLC50，Medianlethalconcentration）指能引起一群動(dòng)物死亡50%的最低劑量或濃度。22當(dāng)前22頁(yè)，總共98頁(yè)。③最小致死劑量或濃度（MLD，Minimumlethaldose，MLC，Minimumlethalconcentration）：能使一群動(dòng)物僅個(gè)別死亡的最高劑量或濃度。(2)最大耐受劑量和最大無(wú)作用劑量①最大耐受劑量或濃度（MTD0，MaximumtolerancedoseorMTC0，Maximumtoleranceconcentration）能使一群動(dòng)物雖然發(fā)生嚴(yán)重中毒，但全部存活無(wú)一死亡的最高劑量或濃度。23當(dāng)前23頁(yè)，總共98頁(yè)。

②最大無(wú)作用劑量（Maximumnoeffectdose）污染物對(duì)生物產(chǎn)生效應(yīng)隨污染物濃度或劑量的降低而減弱，當(dāng)外來(lái)化學(xué)物劑量減到一定量時(shí)，生物學(xué)變化已達(dá)到0，不能觀察到任何損害作用的最高劑量稱最大無(wú)作用劑量。其是制訂人體每日容許攝入量、最高容許濃度和評(píng)定污染物毒性作用的主要依據(jù)。24當(dāng)前24頁(yè)，總共98頁(yè)。③最小有作用劑量（Minimaleffectlevel）指能使有機(jī)體發(fā)生某種異常變化所需的最小劑量。其一般大于最大無(wú)作用劑量，因此又稱中毒閾劑量。④半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50,Medianeffectconcentration)指能引起50%受試生物的某種效應(yīng)變化的濃度。⑤半數(shù)抑制濃度(IC50,Medianinhibitionconcentration)指能引起受試生物的某種效應(yīng)50%抑制的濃度。25當(dāng)前25頁(yè)，總共98頁(yè)。（3）毒作用帶（Toxiceffectzone）：是恒量污染物危險(xiǎn)性大小的一個(gè)指標(biāo)。

①急性毒性作用帶：為半致死量與急性毒性最小有作用劑量的比值。此值愈大，污染物危險(xiǎn)性愈小，反之危險(xiǎn)性愈大。26當(dāng)前26頁(yè)，總共98頁(yè)。

②慢性毒性作用帶：是恒量毒物急、慢性毒性的一個(gè)指標(biāo)，急性毒性最小有作用劑量與慢性毒性最小有作用劑量之比。比值愈小，表明引起急性中毒的危險(xiǎn)性相對(duì)較大。反之，引起慢性毒性中毒的可能性愈大。27當(dāng)前27頁(yè)，總共98頁(yè)。2、毒物單位與分級(jí)

（1）毒物單位（濃度）：毒物在空氣中的濃度以mg/m3或mg/L表示；哺乳動(dòng)物以mg/Kg或ml/kg體重表示；水環(huán)境中的毒物以mg/L或μg/L表示。

（2）毒物分級(jí)：毒物毒性的大小與半數(shù)致死量成反比，但不同化合物之間毒性差別很大，可達(dá)百萬(wàn)甚至幾千萬(wàn)倍。為了加強(qiáng)毒物在生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用和貯存方面的管理；便于制訂和比較環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；在發(fā)生意外時(shí),采取相應(yīng)的保護(hù)措施，必須對(duì)毒物進(jìn)行分級(jí)。

28當(dāng)前28頁(yè)，總共98頁(yè)。1）我國(guó)工業(yè)毒物急性毒性分級(jí)

29當(dāng)前29頁(yè)，總共98頁(yè)。2）我國(guó)農(nóng)藥急性毒性分級(jí)

30當(dāng)前30頁(yè)，總共98頁(yè)。

3）水生生物評(píng)價(jià)體系

31當(dāng)前31頁(yè)，總共98頁(yè)。二、毒性試驗(yàn)（一）急性毒性試驗(yàn)指研究化學(xué)物質(zhì)大劑量一次染毒或者說(shuō)24h內(nèi)多次染毒，動(dòng)物所引起的毒性試驗(yàn)。目的：為了在短期內(nèi)了解某物質(zhì)的毒性大小，需做急性毒性試驗(yàn)(Acutetoxicitytest)。有哺乳動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)、水生生物急性毒性試驗(yàn)和蚯蚓急性毒性試驗(yàn)。32當(dāng)前32頁(yè)，總共98頁(yè)。1、哺乳動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)：（1）實(shí)驗(yàn)材料：小鼠和大鼠，若進(jìn)行毒物皮試實(shí)驗(yàn)，還可用家兔和豚鼠。（2）確定動(dòng)物全活和全致死量查閱文獻(xiàn)中與受試物的類似物的LD50(LC50)，一般以3倍之差配制三個(gè)劑量組進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)（1/3LD50，LD50,3LD50），每組3只動(dòng)物，求出全致死量和全活劑量。33當(dāng)前33頁(yè)，總共98頁(yè)。34當(dāng)前34頁(yè)，總共98頁(yè)。（3）在預(yù)試驗(yàn)的全活量和全致死量之間，以各組間距1.2~1.5的“等比級(jí)數(shù)”，計(jì)設(shè)5~6個(gè)劑量組，進(jìn)行染毒。觀察2周內(nèi)的死亡情況。（4）病理解剖檢查：剖檢死亡或?yàn)l死動(dòng)物及部分存活的動(dòng)物，計(jì)算LD50或LC50。（5）依急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)LD50或LC50，評(píng)定毒物的毒性，LD50值愈小，毒性愈大。35當(dāng)前35頁(yè)，總共98頁(yè)。2、水生生物急性毒性試驗(yàn)根據(jù)試驗(yàn)對(duì)象，可分為魚類、水蚤類和藻類毒性試驗(yàn)。

（1）實(shí)驗(yàn)用魚：選擇有區(qū)域代表性、便于實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)、對(duì)物質(zhì)敏感的魚苗，如青、草、鰱及鳙四大淡水魚。體長(zhǎng)一般小于7cm為宜。有時(shí)還可用體長(zhǎng)小于3cm的金魚。（2）實(shí)驗(yàn)條件：采用玻璃缸或白搪瓷桶。盛水量以每條2~3L水為宜，pH6.7~8.5，冷水溫度12~18℃，溫水溫度20~28℃，水溫變化±2℃，水中溶解氧不能低于4mg/L，可用清潔河水、湖水或放置3天的自來(lái)水。36當(dāng)前36頁(yè)，總共98頁(yè)。37當(dāng)前37頁(yè)，總共98頁(yè)。（3）LC50測(cè)定1）確定魚全活和全致死量：方法同哺乳動(dòng)物，也從文獻(xiàn)中查閱與受試物的類似物的LD50(LC50)，做預(yù)試驗(yàn)，確定全致死量和全活劑量。2）以此濃度范圍，按“等對(duì)數(shù)間距”確定5~7個(gè)濃度組。每組10~20尾魚，染毒48~96h。染毒剛開(kāi)始8h內(nèi)經(jīng)常觀察，以后作24、48、72和96小時(shí)定期觀察，記錄中毒反應(yīng)和死亡時(shí)間。（實(shí)驗(yàn)期間注意保持水體溶解氧、pH、水溫的穩(wěn)定，并立即取出死魚）。3）根據(jù)24、48和96h各組魚的死亡數(shù)，計(jì)算LC50。38當(dāng)前38頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）亞慢性毒性試驗(yàn)（Subchronictoxicitytest）人類接觸的環(huán)境污染物水平通常低于急性中毒劑量或濃度，為了得到更接近實(shí)際情況的毒作用資料，需進(jìn)行亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)。在較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)（約動(dòng)物生命周期的1/30~1/20），使動(dòng)物每日或反復(fù)多次染毒所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。目的是為對(duì)毒物的毒作用機(jī)理、靶器官和最大無(wú)作用劑量或中毒閾值作出估計(jì)。

39當(dāng)前39頁(yè)，總共98頁(yè)。1、動(dòng)物選擇（1）一般選用對(duì)毒物敏感的動(dòng)物種和品系，且應(yīng)與慢性毒性作用試驗(yàn)中預(yù)計(jì)使用的動(dòng)物相同。（2）要求選擇兩種試驗(yàn)動(dòng)物，嚙齒類和非嚙齒類各一種，嚙齒動(dòng)物常用鼠和兔，非嚙齒常用狗和貓。這樣可更全面了解受試物的毒草效應(yīng)。40當(dāng)前40頁(yè)，總共98頁(yè)。（3）動(dòng)物大小、只數(shù)和雌雄選用健康、年幼的動(dòng)物。小鼠約14~17g，大鼠50~80g，家兔和貓?bào)w重約1~2kg，狗體重為5~8Kg。各動(dòng)物體重不應(yīng)超過(guò)組平均體重的±20%。大鼠各組不少于20只，兔、貓和狗較大動(dòng)物不少于4~6只。雌雄各半。

41當(dāng)前41頁(yè)，總共98頁(yè)。2、染毒劑量和實(shí)驗(yàn)期限（1）染毒劑量:一般用LD50或LC50的1/80~1/50作為亞慢性試驗(yàn)劑量，也設(shè)三個(gè)劑量組。1）高劑量組：能引起明顯的中毒反應(yīng)，但又不引起很多動(dòng)物死亡為高劑量組。2）低劑量組：不引起任何中毒反應(yīng)為低劑量組。3）中間劑量組：介于二者之間。（2）實(shí)驗(yàn)期限:試驗(yàn)期限隨目的和要求或動(dòng)物大小而異。大鼠可90天，較大動(dòng)物可4~6月。42當(dāng)前42頁(yè)，總共98頁(yè)。3、染毒途徑

主要經(jīng)胃腸道、呼吸道和皮膚接觸。注意：染毒途徑應(yīng)與預(yù)期進(jìn)行的慢性毒性作用試驗(yàn)相一致。4、指標(biāo)觀察與檢查：3個(gè)（1）綜合指標(biāo)觀察：1）觀察動(dòng)物的一般活動(dòng)、癥狀和死亡情況。2）每周稱重一次，記錄飼料或飲水量，計(jì)算生長(zhǎng)率（各組每周攝入食量與體重增加量之比）。3）各臟器鮮重與單位體重的比重（臟器系數(shù)）。43當(dāng)前43頁(yè)，總共98頁(yè)。（2）血液及生化檢查：主要指血清、肝和腎功能檢驗(yàn)。常規(guī)項(xiàng)目包括血紅蛋白、紅、白細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)、谷草轉(zhuǎn)氨酶、血清尿素氮等。（3）病理組織學(xué)檢查：尸檢死亡和瀕死的動(dòng)物，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的被處死的動(dòng)物。主要對(duì)肝、腎、睪丸等器官進(jìn)行檢查。必要時(shí)還需進(jìn)行組織化學(xué)和電鏡檢查。44當(dāng)前44頁(yè)，總共98頁(yè)。5、試驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)受試物的主要毒作用、靶器官和最大無(wú)作用劑量及中毒閾劑量作出初步估價(jià)，并為進(jìn)一步開(kāi)展慢性毒性試驗(yàn)提供依據(jù)。

45當(dāng)前45頁(yè)，總共98頁(yè)。（三）慢性毒性試驗(yàn)(哺乳動(dòng)物)（Chronictoxicitytest）以低劑量外來(lái)化合物，長(zhǎng)期與試驗(yàn)動(dòng)物接觸，觀察其對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)的試驗(yàn)。目的是確定最大無(wú)作用劑量，為制訂人體每日允許攝入量(ADI，Allowabledailyintake)和最高容許濃度(MAC，Maximumallowableconcentration)提供毒理學(xué)依據(jù)。有哺乳動(dòng)物、水生生物慢性毒性試驗(yàn)。

46當(dāng)前46頁(yè)，總共98頁(yè)。1、試驗(yàn)動(dòng)物和分組1）試驗(yàn)動(dòng)物的年齡應(yīng)低于亞慢性試驗(yàn)。一般選用斷奶動(dòng)物，如出生后3周的小鼠，體重約10~12g，出生后3~4周的大鼠，體重50~70g。2）試驗(yàn)動(dòng)物雌雄各半。其它與亞慢性試驗(yàn)相同。47當(dāng)前47頁(yè)，總共98頁(yè)。2、染毒劑量和實(shí)驗(yàn)期限根據(jù)亞慢性試驗(yàn)，取其最低中毒劑量的1/10、1/20和1/50或LD50的1/100~1/20中取3~4個(gè)劑量作為慢性試驗(yàn)劑量。（1）高劑量組：能引起明顯的中毒反應(yīng)為高劑量組。（2）低劑量組：不引起中毒反應(yīng)為低劑量組。（3）中間劑量組：介于二者之間。試驗(yàn)期限：一般1~12月，若是致癌實(shí)驗(yàn)則需18~24月。48當(dāng)前48頁(yè)，總共98頁(yè)。3、染毒途徑

經(jīng)胃腸道、呼吸道和皮膚接觸同亞慢性試驗(yàn)4、觀察指標(biāo)基本同亞慢性試驗(yàn)，此外：（1）在試驗(yàn)的第1個(gè)月，每周稱體重一次，在4~6個(gè)月期間，每2周稱體重一次，以后每4周稱體重一次。（2）每2月進(jìn)行一次血液及其它生長(zhǎng)指標(biāo)(生長(zhǎng)率、臟器系數(shù))測(cè)定。（3）對(duì)病理檢查作半定量評(píng)定，即隨染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，器官形態(tài)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生變化，需根據(jù)病變程度加以分級(jí)評(píng)分。

49當(dāng)前49頁(yè)，總共98頁(yè)。50當(dāng)前50頁(yè)，總共98頁(yè)。5、試驗(yàn)評(píng)價(jià):評(píng)價(jià)受試物在低劑量長(zhǎng)時(shí)間接觸有機(jī)體時(shí)所引起的毒性作用。有2個(gè)方面：1）依據(jù)敏感觀察指標(biāo)，出現(xiàn)異常的最小閾劑量，找出該受試物的慢性毒作用的最大無(wú)作用劑量，為受試物能否可被應(yīng)用或?yàn)橹朴喥湓诃h(huán)境中的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，提供依據(jù)。2）通過(guò)對(duì)動(dòng)物的一般觀察及其對(duì)各臟器的病理學(xué)檢查，對(duì)受試物的致癌性評(píng)定提供依據(jù)。51當(dāng)前51頁(yè)，總共98頁(yè)。（四）蓄積毒性試驗(yàn)1、低于中毒閾劑量的外來(lái)化合物，反復(fù)多次地與機(jī)體持續(xù)接觸，經(jīng)一定時(shí)間后使機(jī)體出現(xiàn)明顯的中毒表現(xiàn)，即為蓄積毒性作用(Cumulativetoxicityaction)。

（1）物質(zhì)蓄積：環(huán)境污染物不斷進(jìn)入有機(jī)體，若吸收量大于排出量，使其在體內(nèi)的量逐漸積累增多。

（2）功能蓄積：不斷進(jìn)入有機(jī)體的污染物反復(fù)作用于機(jī)體，引起機(jī)體一定結(jié)構(gòu)或功能的變化，并逐漸累積加重，最后導(dǎo)致出現(xiàn)損害作用。52當(dāng)前52頁(yè)，總共98頁(yè)。2、試驗(yàn)方法（1）蓄積系數(shù)法（CumulativeCoefficientmethod）

蓄積系數(shù)（CumulativeCoefficient）：指多次給受試物后，引起50%受試動(dòng)物出現(xiàn)某種毒效應(yīng)的總劑量()，與一次給受試物后引起50%受試動(dòng)物出現(xiàn)同一毒效應(yīng)的劑量（）的比值。比值愈大，說(shuō)明引起50%動(dòng)物出現(xiàn)某種毒效應(yīng)的使用劑量較大，藥物代謝作用強(qiáng)，而蓄積作用較小，反之，表示蓄積作用愈強(qiáng)。53當(dāng)前53頁(yè)，總共98頁(yè)。

54當(dāng)前54頁(yè)，總共98頁(yè)。有兩種實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定K1）固定劑量每天連續(xù)染毒法對(duì)受試動(dòng)物以1/10~1/20LD50的固定劑量，每天進(jìn)行染毒一次，觀察記錄動(dòng)物死亡情況。當(dāng)染毒累計(jì)達(dá)5個(gè)LD50以上時(shí)，若受試動(dòng)物死亡數(shù)未超過(guò)半數(shù)，此時(shí)的蓄積系數(shù)已大于5，表明該受試動(dòng)物的蓄積作用不明顯。

55當(dāng)前55頁(yè)，總共98頁(yè)。2）劑量定期遞增染毒法取一組受試動(dòng)物，每天染毒一次，以4天為一期，開(kāi)始的第一期每天染毒劑量為1/10LD50,隨后染毒劑量每隔4天按1.5倍遞增一次。

56當(dāng)前56頁(yè)，總共98頁(yè)。每天記錄動(dòng)物的死亡情況，若連續(xù)染毒已達(dá)20天，此時(shí),每天的染毒劑量0.5LD50(=1.54×LD50/10)，累計(jì)總劑量達(dá)[(1+1.5+1.52+1.53+1.54)×4×LD50/10]=5.30LD50。如果受試動(dòng)物死亡未達(dá)到50%,則表示該受試物的蓄積作用不明顯，試驗(yàn)可停止。如果受試動(dòng)物出現(xiàn)死亡達(dá)50%，就可算出染毒系數(shù)K。57當(dāng)前57頁(yè)，總共98頁(yè)。（2）20天蓄積試驗(yàn)法按的LD50的1/20、1/10、1/5、1/2和0隨機(jī)分成5組，每天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行染毒，連續(xù)20天，各組總劑量分別為0、1、2、4、10LD50。觀察停藥7天內(nèi)的死亡情況。1）如1/2LD50組有死亡，且各劑量組呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，則受試動(dòng)物有較強(qiáng)的蓄積作用。2）若1/20LD50組有死亡，且各劑量組呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，則為中等蓄積作用。3）若1/20LD50組無(wú)死亡，且各劑量組無(wú)劑量-反應(yīng)關(guān)系，則為無(wú)明顯蓄積作用。

58當(dāng)前58頁(yè)，總共98頁(yè)。（3）受試物生物半減期測(cè)定法

生物半減期（T1/2）：指一種外來(lái)化合物在體內(nèi)的量或濃度下降到原來(lái)濃度或量的一半所需的時(shí)間。T1/2越大，表明在體內(nèi)存留時(shí)間越長(zhǎng)，蓄積作用越大。測(cè)定方法：機(jī)體接觸污染物后，在間隔一定時(shí)間內(nèi)分別測(cè)定血液、尿液、器官組織中該物質(zhì)的濃度，然后求出T?。

（y1和y2分別是t1和t2時(shí)間測(cè)得該物質(zhì)的濃度）59當(dāng)前59頁(yè)，總共98頁(yè)。

第三節(jié)生物致突變、致畸和致癌效應(yīng)檢測(cè)一、生物致突變1、突變：生物體的遺傳物質(zhì)發(fā)生了基因結(jié)構(gòu)的改變稱為突變（mutation）?？煞譃榛蛲蛔兒腿旧w突變兩大類，此兩類突變本質(zhì)上無(wú)差異，只是染色體突變可憑光學(xué)顯微鏡觀察。

60當(dāng)前60頁(yè)，總共98頁(yè)。2、突變意義（1）農(nóng)業(yè)作物育種：在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，農(nóng)作物就是通過(guò)定向突變篩選獲得優(yōu)良品種。（2）從理論上講，突變可能會(huì)出現(xiàn)有益的后果，但由于概率極小，且無(wú)法鑒別和控制，所以，外來(lái)化學(xué)物對(duì)人類引起的致突變可能有很大的潛在危險(xiǎn)。所以，從毒理學(xué)角度，突變一般認(rèn)為是外來(lái)化合物毒性作用的表現(xiàn)。61當(dāng)前61頁(yè)，總共98頁(yè)。3、致突變?cè)囼?yàn)試驗(yàn)方法致突變?cè)囼?yàn)：可分基因點(diǎn)突變?cè)囼?yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)和DNA損傷試驗(yàn)等，可在活體或體外進(jìn)行。有（1）體外基因突變?cè)囼?yàn)，（2）細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)，（3）體內(nèi)基因突變?cè)囼?yàn)，（4）DNA損傷試驗(yàn)等。

62當(dāng)前62頁(yè)，總共98頁(yè)。（一）體外基因突變?cè)囼?yàn)（Invitromutationtest）

1、鼠傷寒沙門氏菌試驗(yàn)法（1）基本原理

將一種營(yíng)養(yǎng)缺陷型如不能合成組氨酸的鼠傷寒沙門氏菌和化學(xué)致突變物接觸，若此化合物是致突變性的，則可使此突變微生物發(fā)生回復(fù)突變，重新成為野生型，而能在不含或少含His的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。據(jù)此鑒定化合物的致突變作用。為使受試物在體外測(cè)試中獲得同活體類似的代謝活性，在培養(yǎng)基中常加入哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞的微粒體和受氫系統(tǒng)。63當(dāng)前63頁(yè)，總共98頁(yè)。（2）方法優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)單；快速，一般在48h內(nèi)可得出結(jié)論；費(fèi)用低；靈敏，檢測(cè)結(jié)果與動(dòng)物致癌性相符率達(dá)90%。缺點(diǎn)：1）微生物的遺傳信息含量低，僅為哺乳動(dòng)物的1/6。2）微生物DNA修復(fù)系統(tǒng)沒(méi)有哺乳動(dòng)物復(fù)雜而精巧。3）微生物無(wú)免疫功能。4）對(duì)于不在肝臟代謝轉(zhuǎn)化的化合物，如蘇鐵素，不能檢測(cè)其突變性。64當(dāng)前64頁(yè)，總共98頁(yè)。2、哺乳動(dòng)物體細(xì)胞株突變?cè)囼?yàn)基本原理：有些哺乳動(dòng)物突變細(xì)胞株系，當(dāng)與化學(xué)致突變物接觸后會(huì)發(fā)生回復(fù)突變，代謝發(fā)生改變，依此確定毒物的致突變性。常用細(xì)胞突變系：中國(guó)地鼠肺細(xì)胞V79、中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞株CHO和小鼠淋巴瘤L5178Y細(xì)胞株等。65當(dāng)前65頁(yè)，總共98頁(yè)。（1）肺細(xì)胞V79和卵巢細(xì)胞株CHO細(xì)胞突變株系由于嘌呤堿類似物如6-巰基嘌呤可抑制DNA的合成，正常細(xì)胞株系生長(zhǎng)會(huì)受到抑制。而V79和CHO細(xì)胞突變株系由于缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)，當(dāng)在培養(yǎng)基中加入某些嘌呤堿類似物如6-巰基嘌呤等時(shí)，它們?nèi)阅苌L(zhǎng)。當(dāng)V79和CHO細(xì)胞突變系與這些嘌呤堿類似物接觸后，會(huì)發(fā)生回復(fù)突變成正常株，生長(zhǎng)受到抑制，說(shuō)明發(fā)生了致突變。

66當(dāng)前66頁(yè)，總共98頁(yè)。

（2）小鼠淋巴瘤L5178Y細(xì)胞株

此細(xì)胞株系缺乏胸苷激酶(TK),如在培養(yǎng)基中加入細(xì)胞毒素5-溴脫氧尿苷，仍能生長(zhǎng)。但當(dāng)此種細(xì)胞系與致突變物接觸后會(huì)發(fā)生回復(fù)突變，又轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞，而恢復(fù)對(duì)此毒素的利用，而抑制其生長(zhǎng)。說(shuō)明發(fā)生了致突變。67當(dāng)前67頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)(CytogeneticsTest)1、染色體畸變?cè)囼?yàn)(Chromosomeaberrationtest)利用光學(xué)顯微鏡直接觀察生物體細(xì)胞在受致突變物作用后,染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的變化。

(1)離體試驗(yàn)：常用中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞株CHO（缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶)和人類外周血（指進(jìn)入血液循環(huán)的血液，即平時(shí)所采血），檢測(cè)卵巢細(xì)胞株CHO和人類淋巴細(xì)胞的染色體變化。

(2)體內(nèi)試驗(yàn)：常檢查骨髓細(xì)胞、胸腺、脾、精原細(xì)胞的染色體的畸變。

68當(dāng)前68頁(yè)，總共98頁(yè)。CHO細(xì)胞系或人類淋巴細(xì)胞染色體畸變分析1）選用細(xì)胞培養(yǎng)液如DMEM、RPM或1640任一種，加入化學(xué)致突變物，在3℃下，培養(yǎng)CHO（缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶)細(xì)胞24h或人類淋巴細(xì)胞為72h。2）在收獲細(xì)胞前2h，向培養(yǎng)液中加入秋水仙堿，以終止細(xì)胞分裂，使細(xì)胞分裂同步于分裂中期。3）離心得到沉淀細(xì)胞，然后制片鏡檢有無(wú)染色體畸變。4）觀察染色體有無(wú)斷裂、缺失、易位、形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)等畸變，以及出現(xiàn)多處斷裂的百分率。69當(dāng)前69頁(yè)，總共98頁(yè)。70當(dāng)前70頁(yè)，總共98頁(yè)。染色體畸變結(jié)果評(píng)定

確定受試物能否引起染色體損傷或數(shù)目的改變，以及要確定有這些改變的細(xì)胞能否存活一個(gè)細(xì)胞周期以上。1）一些小缺失和相互易位的畸變，因其可能長(zhǎng)期存在而比大缺失有更大的危險(xiǎn)性。2）染色體斷裂、缺失、易位、形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)等是染色體開(kāi)放性斷裂的結(jié)果，但也可能是斷裂后修復(fù)的結(jié)果。3）有些化合物只作用于細(xì)胞分裂某一時(shí)期，故試驗(yàn)時(shí)要注意收獲時(shí)間。

71當(dāng)前71頁(yè)，總共98頁(yè)。2、微核試驗(yàn)（Micronucleustest）（1）微核形成

核膜受損：在受化學(xué)致突變作用下，若核膜受損，核物質(zhì)會(huì)向外突出延伸，形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則圓形或橢圓形小體，稱微核。

紡錘體受傷：由于紡錘體受傷或染色體的無(wú)著絲點(diǎn)斷裂，受傷染色體在分裂后期仍停留在細(xì)胞質(zhì)，而形成微核結(jié)構(gòu)。有動(dòng)物細(xì)胞微核率試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)微核試驗(yàn)和蠶豆根尖微核試驗(yàn)等。72當(dāng)前72頁(yè)，總共98頁(yè)。73當(dāng)前73頁(yè)，總共98頁(yè)。

（2）動(dòng)物細(xì)胞微核率試驗(yàn)

1）骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)以頸椎脫臼處死動(dòng)物，用小牛血清將骨髓細(xì)胞沖洗入離心管。離心，棄去上清液，留少量血清懸浮細(xì)胞后進(jìn)行涂片。甲醇固定、Giemsa染色（核染色）后進(jìn)行觀察。每只動(dòng)物要求觀察計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，求出出現(xiàn)微核細(xì)胞的頻率。74當(dāng)前74頁(yè)，總共98頁(yè)。2）外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)取人或動(dòng)物的外周血2~3滴(骨髓外血），于盛有1.5mlTris-NH4Cl緩沖液的離心管中，混勻后置于37℃下保溫5h，使紅細(xì)胞溶解。取5滴溶解液，混勻后離心，棄上清液，于沉淀物中再加5ml固定液，放置10min后離心，棄上清液，取沉淀物涂片，鏡檢。

75當(dāng)前75頁(yè)，總共98頁(yè)。二、致畸效應(yīng)（一）基本概念1、致畸作用（Teratogenesis）

胚胎的細(xì)胞分化和器官形成不正常，而造成組織器官上的缺陷，并出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的形態(tài)結(jié)構(gòu)異常稱畸形。致畸物通過(guò)母體作用于胚胎，引起胎兒畸形的現(xiàn)象稱致畸作用。目前已知1000多種環(huán)境因素可引起動(dòng)物及人的畸胎。60年代初，孕婦因服用“反應(yīng)?！倍鴮?dǎo)致近萬(wàn)名畸形兒。許多國(guó)家對(duì)一些藥物、農(nóng)藥、食品添加劑、防腐劑以及工業(yè)化學(xué)品規(guī)定應(yīng)經(jīng)過(guò)致畸試驗(yàn)。

76當(dāng)前76頁(yè)，總共98頁(yè)。77當(dāng)前77頁(yè)，總共98頁(yè)。2、致畸作用的毒理學(xué)特點(diǎn)(1)不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)致畸物有不同的敏感性，一般在胚胎形成早期，對(duì)致畸物最敏感。致畸物在接觸胚胎時(shí)，可因胚胎處于不同發(fā)育階段而引起不同的畸形。(2)不同種系的動(dòng)物，由于代謝和胎盤結(jié)構(gòu)的不同，對(duì)致畸物呈現(xiàn)不同的敏感性。（3）致畸作用劑量-反應(yīng)曲線很陡，最大無(wú)作用劑量與引起胚胎死亡最低劑量?jī)H相差2~3倍。

78當(dāng)前78頁(yè)，總共98頁(yè)。3、化學(xué)致畸作用機(jī)理(1)母體正常代謝過(guò)程受到破壞致畸物使母體正常代謝過(guò)程受到破壞，使子代細(xì)胞在生物合成過(guò)程中缺乏必需的物質(zhì)，而影響胚胎的正常發(fā)育。(2)生殖細(xì)胞分裂過(guò)程的障礙致畸物可干擾細(xì)胞的分裂過(guò)程,引起生殖細(xì)胞減數(shù)分裂或合子的細(xì)胞有絲分裂過(guò)程的障礙,導(dǎo)致細(xì)胞死亡,胚胎出現(xiàn)畸形。

79當(dāng)前79頁(yè)，總共98頁(yè)。(3)突變引起胚胎體細(xì)胞發(fā)育異常致畸物可使胚胎的體細(xì)胞發(fā)生突變,有時(shí)還可引起酶分子的氨基酸組成發(fā)生改變,而引起代謝功能的缺陷,胚胎致畸。(4)通過(guò)抑制或破壞重要代謝酶的活性起作用這些致畸物雖不影響生殖細(xì)胞減數(shù)分裂或細(xì)胞有絲分裂或誘發(fā)染色體突變，但可通過(guò)抑制或破壞對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)分化較為重要的酶的活性,如DNA聚合酶、核糖核苷酸還原酶等活性，而影響胚胎的正常發(fā)育。80當(dāng)前80頁(yè)，總共98頁(yè)。（二）試驗(yàn)方法致畸試驗(yàn)：是檢測(cè)某些環(huán)境污染物能否通過(guò)妊娠母體引起胚胎畸形的一種動(dòng)物試驗(yàn)法。1、動(dòng)物選擇要求：(1)選擇與人類代謝相似的動(dòng)物，并具與人類相似的胎盤結(jié)構(gòu)，如胎盤層數(shù)和厚度。(2)妊娠期短,利于觀察。(3)產(chǎn)仔多,以獲得足夠的標(biāo)本。(4)此外,還應(yīng)符合試驗(yàn)動(dòng)物的一般要求,如體型小、易馴服、繁殖以及價(jià)廉。一般選擇大鼠和小鼠和家兔。81當(dāng)前81頁(yè)，總共98頁(yè)。2、劑量設(shè)定(1)受試物劑量的大小，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)時(shí)給予受試物的次數(shù)及連續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短而定，若試驗(yàn)期間只給一次，此時(shí)劑量稍大，反之則小。（2）高劑量組，以不使母體產(chǎn)生明顯中毒而導(dǎo)致流產(chǎn)為限度。一般可以LD50的1/3~1/2為最高劑量組，LD50的1/30~1/100為低劑量組。（3）試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)：均以經(jīng)交配確定已受精的雌性動(dòng)物為計(jì)數(shù)對(duì)象，每組不少于15~20只，家兔7~8只。82當(dāng)前82頁(yè)，總共98頁(yè)。3、受試動(dòng)物的處理（1）動(dòng)物受孕：選擇一批性成熟，未交配過(guò)的雌鼠和雄鼠，以一雄一雌或二雌一雄比例，同籠過(guò)夜，次日清晨檢查雌鼠是否受孕。查到日為孕期0天，次日為第一天，孕期約1月。（2）藥物處理方法和時(shí)間：一般多采用灌胃方法，在胚胎敏感期給藥。若過(guò)早給予可影響受精卵著床，過(guò)遲則對(duì)發(fā)育成熟的胚胎往往不能顯示致畸作用。83當(dāng)前83頁(yè)，總共98頁(yè)。4、試驗(yàn)動(dòng)物的解剖（1）解剖時(shí)間：預(yù)計(jì)自然分娩前1~2天為宜，以防止胎仔自然分娩后被吃或被咬傷?？闪?/4的動(dòng)物待其自然分娩，并將胎仔喂養(yǎng)到斷奶，進(jìn)行仔細(xì)觀察和檢查。（2）解剖檢查1）胎仔外部檢查：如活胎數(shù)、早、晚期死胎數(shù)和吸收胎數(shù)；對(duì)活胎要檢查性別、體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)及全窩胎盤總重量等。84當(dāng)前84頁(yè)，總共98頁(yè)。2）胎仔的骨骼檢查先用75%~90%乙醇-1%KOH固定至肌肉透明;再用茜素紅染色2~5d，至骨骼染成桃或紫紅色;再經(jīng)透明處理后，檢查骨骼的形態(tài)、大小、數(shù)量有無(wú)異常及骨化程度。

3）胎仔內(nèi)臟檢查經(jīng)外觀檢查后的活胎仔，按隨機(jī)法，將胎仔數(shù)的1/2~1/3置于Bouin氏液中固定1~2周后，取內(nèi)臟和軟組織如腭裂、腎等，用徒手切片法制片，觀察結(jié)構(gòu)變化。P126，表3-11（外觀畸形）；表3-12（骨骼畸形）；表3-13（臟器畸形）。85當(dāng)前85頁(yè)，總共98頁(yè)。5、致畸作用的評(píng)價(jià)為科學(xué)的評(píng)價(jià)受試物有無(wú)致畸作用。應(yīng)注意：(1)試驗(yàn)結(jié)果中出現(xiàn)的畸形率高低,須從出現(xiàn)畸胎的孕仔率、胎仔發(fā)生畸形率、單項(xiàng)畸形率、總畸形率等多方面進(jìn)行統(tǒng)計(jì)綜合分析；比較試驗(yàn)組與對(duì)照組有無(wú)差異；有無(wú)劑量-反應(yīng)關(guān)系；而后才能作用評(píng)定。(2)同種動(dòng)物重復(fù)試驗(yàn)和多種動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果一致,才能得出一致的結(jié)論。

86當(dāng)前86頁(yè)，總共98頁(yè)。(3)生物在正常情況下也有變異，有時(shí)難以區(qū)分。但一般致畸率高、有特異性、且有劑量-效應(yīng)或反應(yīng)關(guān)系，應(yīng)作致畸論。(4)不同種系的動(dòng)物對(duì)同種致畸物的致畸作用可能有差異。當(dāng)在其它動(dòng)物上試驗(yàn)的結(jié)果，和從臨床觀察、流行病學(xué)調(diào)查等如果也獲得同樣的結(jié)果，才能下正確的結(jié)論。

87當(dāng)前87頁(yè)，總共98頁(yè)。三、致癌效應(yīng)（一）基本概念目前的中國(guó)癌癥診斷率