全身用藥的毒性研究課件

第十七章全身用藥的毒性研究第一節(jié)新藥急性毒性試驗急性毒性試驗

毒性反應類型定性出現(xiàn)和消失時間可能的靶器官和死亡原因致死量定量最大給藥量半數(shù)致死量一、目的和意義

1、了解新藥急性毒性的強弱LD50ED50治療指數(shù)（LD50/ED50）

相對毒性

安全系數(shù)（LD5/ED95）

3、獲取新藥毒性反應信息

毒性反應癥狀、靶器官、致死原因等

一般情況毒性大小有明顯種屬差異特殊情況無明顯種屬差異對一期臨床的指導意義4、為新藥藥學研究提供參考

二、試驗方法（一）半數(shù)致死量（LD50)的測定試驗方法1、實驗動物選擇嚙齒類動物動物非嚙齒類動物動物性別、年齡、數(shù)量。

2、動物隨機分組

按性別、體重采用分層隨機法

3、劑量設計

預試驗得出0-100%的死亡劑量范圍內(nèi)，設計5-6個劑量組。各劑量組間距為1:0.65-0.85,高劑量70%死亡率以上，低劑量死亡率30%以下。

（二）最大給藥量試驗在受試藥物合理的最大容積和最大濃度條件下，單次給予試驗動物不產(chǎn)生死亡最大給藥量試驗。（三）最大耐受量試驗單次給藥引起動物出現(xiàn)明顯中毒反應而未發(fā)生死亡的劑量。一般使用20只動物，連續(xù)觀察7-14天。（四）固定劑量試驗試驗不以死亡為觀察終點，而以明顯的毒性體征為評價指標。據(jù)資料，用5、50、500和2000mg/kg4個國定劑量中的一個做初試劑量，單次給藥。給藥前禁食6-12小時，給藥后禁食3-4小時。（五）近似致死劑量試驗主要用于非嚙齒動物的誓言。常用Beagel犬或猴。1、估計可能的致死范圍。2、按50%遞增法，設計10-20個劑量的序列表。3、在劑量的序列表中找出可能致死劑量范圍。三、急性毒性試驗中常用LD50計算方法

1、Bliss法2、寇氏法3、改良寇氏法4、何爾恩法

第二節(jié)新藥長期毒性試驗長期毒性試驗對動物反復多次連續(xù)給藥的毒性試驗。長期毒性試驗的目的

1、反復多次給藥的情況下，實驗動物出現(xiàn)的毒性反應、量效關系、主要的靶器官、損害程度及其可逆性。2、獲得反復給藥情況下，實驗動物能耐收的劑量范圍及完全無毒性反應的安全范圍。一、一般原則1、動物的選擇及分組嚙齒類非嚙齒類溶劑對照組高劑量組給藥試驗組中劑量組低劑量組5、給藥容量應根據(jù)體重增長情況調(diào)整給藥量，按等量不同濃度法配制藥物。6、試驗周期臨床試驗用藥動物試驗用藥

＜5天2周

＜2周4周2-4周3個月1-3個月6個月

＞3個月嚙齒類6個月、非嚙齒類9個月一般給藥時間為臨床給藥試驗周期的3-4倍時間二、檢測項目（一）一般觀察外觀體征和行為活動，流涎等腺體分泌、糞便性狀與顏色、毛色、行為、給藥局部反應、食量及體重變化。對死亡動物應進行系統(tǒng)病理學檢查。（二）血液學指標紅細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)血紅蛋白血液學指標白細胞總數(shù)級分類血小板凝血時間（四）特殊檢查可能引起眼、耳毒性的藥物，應增加眼、耳毒性的檢查。有些藥物尚需研究對酸堿平衡、水鹽代謝的影響。（五）系統(tǒng)尸體解剖1、臟器系數(shù)

心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、子宮、腦等2、組織學檢查內(nèi)容為：腦、脊髓、視神經(jīng)、眼、垂體、心臟、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、子宮等。三、檢測指標的時間（一）檢查間隔（給藥期間的檢查間隔）四、資料整理要求1、首頁寫明試驗題目，試驗單位，課題負責人簽名、試驗參與人名單，職稱，試驗開始即結束時間，實驗原始資料保存地點，申請注冊單位等。2、第二頁試驗摘要

3、內(nèi)容試驗報告的內(nèi)容包括試驗方法、目的、供試品（品名、批號、生產(chǎn)單位、規(guī)格、包裝情況、性狀等等。），實驗動物情況（來源、數(shù)量、品系、雌雄、動物證、試驗環(huán)境溫濕度、飼料來源等），試驗方法，結果，結論，參考文獻等。4、要客觀的描述大體解剖及病理學檢查結果，提供病理照片的材料。一）血管刺激性試驗1、目的-觀察靜脈注射劑多次給予后對血管的刺激性情況。2、動物-家兔（每組至少3只動物）3、方法-分成兩組（陰性對照組、給藥組）分別對家兔耳緣靜脈注射給藥，連續(xù)5次，末次注射后24小時處死部分動物，肉眼觀察并對組織進行病理學檢查；余下的動物14天后進行同樣檢查。4、判定方法5、結果評價家兔耳緣靜脈血管二）體外溶血試驗1、目的-靜脈注射劑對紅細胞狀態(tài)的影響2、動物-家兔1只3、方法1）2%紅細胞懸液的制備2）受試物的制備-臨床使用濃度3）試驗方法體外溶血試驗加樣表試管號12345672%紅細胞2.52.52.52.52.52.52.5生理鹽水2.02.12.22.32.42.5蒸餾水2.5受試物0.50.40.30.20.14、判定方法-溶血、無溶血、紅細胞凝聚5、結果評價-3小時內(nèi)無溶血，可以注射使用三）過敏性試驗1、目的-觀察供試物對動物有無過敏反應2、動物-雄性豚鼠18只（三組-每組6只）3、方法溶劑組-生理鹽水或葡萄糖注射液1）分組陽性組-1%新鮮雞蛋清給藥組-受試物2）每組分別腹腔注射，隔日一次，共三次，首次注射第14日、21日每組取3只動物靜脈注射，觀察過敏反應。4、判定方法豚鼠過敏反應判定標準反應級數(shù)反應癥狀0無明顯反應1有輕微抓鼻、顫抖或豎毛2有幾次咳嗽、抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續(xù)咳嗽、伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡5、結果評價

反應級數(shù)2級（包括2級）為陽性四）熱原試驗1、目的-判定受試物是否有致熱作用2、動物-家兔3、方法3只家兔，側正常體溫，注射藥物，每小時測體溫一次，共3次。最高一次溫度減正常體溫。如三只家兔中有一只升溫超過0.6℃或三只家兔升溫總和超過1.4℃時;應另取5只家兔復試，方法通上。4、判定方法1）3只家兔升溫總和不超過1.4℃而且每只家兔升溫不超過0.6℃。2）5只家兔升溫總和不超過3.5℃而且升溫超過0.6℃的家兔不超過1只。5、結果評價二、局部用藥的全身毒性試驗主要討論皮膚用藥、眼科用藥、滴鼻劑、吸入劑及直腸、陰道制劑等引起的全身毒性試驗。見第十九章。小結第一節(jié)新藥急性毒性試驗一、目的和意義二、試驗方法

1、半數(shù)致死量的測定2、最大給藥量試驗3、最大耐受量試驗4、固定劑量試驗5、近似致死量試驗三、急性毒性試驗中常用的LD50計算方法第二節(jié)新藥長期毒性試驗一、一般原