復(fù)習(xí)生物制藥章

復(fù)習(xí)生物制藥章第1頁/共73頁1、1928年弗萊明發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)青霉素的菌種是（）。2、Florey從爛西瓜中分離出來的產(chǎn)青霉素的菌種是（）。3、青霉素是含有（）結(jié)構(gòu)的抗生素，青霉素的母核是（）。4、人乙型肝炎免疫球蛋白適用于（）、（）和（）。第2頁/共73頁1、點(diǎn)青霉2、產(chǎn)黃青霉3、β-內(nèi)酰胺環(huán)，6-APA。4、乙型肝炎表面抗原（HbsAg）陽性的母親及所生的嬰兒。2.意外感染的人群。3.與乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒攜帶者密切接觸者。

第3頁/共73頁OKT3為抗人類外周Ｔ淋巴細(xì)胞單克隆抗體；OKT3為高純度的Ｔ淋巴細(xì)胞抗體。其抗原取自人類Ｔ淋巴細(xì)胞的Ｔ3抗原，與小鼠脾臟產(chǎn)生抗體的細(xì)胞在體外與小鼠骨髓瘤細(xì)胞相融合，由篩選出的雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體。第4頁/共73頁在體內(nèi)OKT3可與大部分外周血T細(xì)胞和機(jī)體組織中T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，而不與其他血液成分或組織發(fā)生反應(yīng)。OKT3通過作用于T細(xì)胞表面的T3（CD3+）抗原識別結(jié)構(gòu)，不僅能清除CD3+細(xì)胞，阻斷T細(xì)胞識別抗原的功能，還能阻斷已產(chǎn)生的殺傷性T細(xì)胞的功能和細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，是目前公認(rèn)的一種能較好逆轉(zhuǎn)移植腎急性排斥反應(yīng)(AR)的免疫抑制劑。第5頁/共73頁泰欣生的抗腫瘤作用機(jī)理：EGFR在多種實(shí)體瘤中過度表達(dá)，如頭頸癌、肺癌、結(jié)直腸癌中，都存在EGFR過度表達(dá)現(xiàn)象。EGFR的過度表達(dá)與腫瘤的高侵襲力、高轉(zhuǎn)移性及不良預(yù)后高度相關(guān)。泰欣生能夠競爭性結(jié)合EGFR，阻斷由EGFR與其介導(dǎo)的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)分化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成、增強(qiáng)放化療療效。泰欣生，是全球第一個以表皮生長因子受體（EGFR）為靶點(diǎn)的單抗藥物，中國第一個治療惡性腫瘤的人源化單克隆抗體。第6頁/共73頁重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液：擁有多項(xiàng)自主知識產(chǎn)權(quán)，被《科技日報》評為2005年度中國十大科技新聞之一的項(xiàng)目--世界首創(chuàng)重組血管內(nèi)皮抑素注射液（商品名:恩度,Endostar）的研制，近日在煙臺麥得津生物工程股份有限公司通過國家GMP生產(chǎn)驗(yàn)證。這標(biāo)志著中國在抗血管生成類腫瘤藥物的創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)化方面已經(jīng)走在了世界最前沿。40年前，美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院JudahFolkman教授提出了著名的“餓死腫瘤療法”理論，即通過阻斷腫瘤新生血管生成切斷腫瘤營養(yǎng)供給，達(dá)到抑制和治療腫瘤的目的。第7頁/共73頁CEP：歐洲藥典適應(yīng)性認(rèn)證證書（CertificateofEuropeanPharmacopoeia）第8頁/共73頁第二章復(fù)習(xí)第9頁/共73頁1、在制藥工業(yè)中為什么要制備無熱原質(zhì)水？熱原質(zhì)的定義熱原質(zhì)的理化性質(zhì)熱原反應(yīng)引起熱原反應(yīng)的因素如何制無熱原質(zhì)水無熱原質(zhì)水的保存方式第10頁/共73頁熱原質(zhì)（pyrogen）

熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖，大多是革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的。注入人或動物體內(nèi)能引起發(fā)熱反應(yīng)，故名熱原質(zhì)。理化性質(zhì)：①耐熱性：熱原在60℃加熱1h不受影響，100℃也不會發(fā)生熱解。但熱原的耐熱性有一定的限度，如120℃加熱4h能破壞98%，在180℃～200℃干熱2h以上或250℃加熱30min可徹底破壞。②濾過性：熱原體積小，能通過除菌濾器而進(jìn)入濾液中。第11頁/共73頁③水溶性及不揮發(fā)性：熱原本身不揮發(fā)，但可隨水氣霧滴夾帶入蒸餾水中，故制備注射用水的重蒸餾水器有隔沫裝置。④其他：熱原能被強(qiáng)酸強(qiáng)堿所破壞，也能被氧化劑如KMnO4或H2O2或超聲波所破壞，能被活性炭、石棉或吸附劑所吸附。熱原在溶液中帶有一定的電荷，因而可被某些離子交換樹脂吸附。第12頁/共73頁熱原反應(yīng)pyrogenreaction

臨床上在進(jìn)行靜脈滴注大量輸液時，由于藥液中含有熱原，病人在0.5～1h內(nèi)出現(xiàn)冷顫、高熱、出汗、昏暈、嘔吐等癥狀，高熱時體溫可達(dá)40℃，嚴(yán)重者甚至可休克，這種現(xiàn)象稱為熱原反應(yīng)。引起熱原反應(yīng)的主要原因是注射液或輸液器中污染的熱原所引起的。

第13頁/共73頁發(fā)熱激活物（pyrogenicactivator）：能激活產(chǎn)內(nèi)生致熱原細(xì)胞，使其產(chǎn)生和釋放內(nèi)生致熱原的物質(zhì)。包括外致熱原（exogenouspyrogen)如內(nèi)毒素（LPS）和某些體內(nèi)產(chǎn)物。另外，LPS中的類脂A為親脂性基團(tuán)，能與血管壁細(xì)胞膜結(jié)合，改變血管通透性，使血壓下降導(dǎo)致休克。熱原的致熱反應(yīng)可被水楊酸類解熱劑所對抗。第14頁/共73頁無熱原質(zhì)水的制備藥液、水等被細(xì)菌污染后，即使高壓滅菌或經(jīng)濾過除菌仍可有熱原質(zhì)存在，輸注機(jī)體后可引起嚴(yán)重發(fā)熱反應(yīng)。生物制品或注射液制成后除去熱原質(zhì)比較困難，所以，必須使用無熱原質(zhì)水制備。第15頁/共73頁中國藥典（2000年版）規(guī)定“本品（注射用水）為純化水經(jīng)蒸餾所得的水”。第16頁/共73頁注射用水的制備、貯存和分配應(yīng)能防止微生物的滋生和污染。貯罐和輸送管道所用材料應(yīng)無毒、耐腐蝕。管道的設(shè)計和安裝應(yīng)避免死角、盲管。貯罐和管道要規(guī)定清洗、滅菌周期。注射用水貯罐的通氣口應(yīng)安裝不脫落纖維的疏水性除菌濾器。注射用水的貯存可采用80℃以上保溫、70℃以上保溫循環(huán)或4℃以下存放。第17頁/共73頁蒸餾蒸餾不同于其它形式的水純化，因?yàn)樗畯牟粷嵉乃刑崛〕鰜恚?jīng)過了相變，從液態(tài)至汽態(tài)又回到液態(tài)，污漬沸點(diǎn)高于水（100°C）將留在鍋爐內(nèi)，冷凝后，只有水及沸點(diǎn)低的殘渣留下來。

蒸餾法對原水中不發(fā)揮性的有機(jī)物、無機(jī)物，包括懸浮物、膠體、細(xì)菌、病毒、熱原等雜質(zhì)有很好的去除作用。第18頁/共73頁水生細(xì)菌對熱比較敏感，一般不會在高于60℃的條件下繁殖，且循環(huán)水對管道內(nèi)壁保持有較大的沖刷力，高流速的水可以將系統(tǒng)中的微生物或細(xì)小的固體顆粒帶走，以提高循環(huán)系統(tǒng)控制微生物污染的能力。因此，在貯存方式中，以70℃以上保溫循環(huán)較為常用。由于水在系統(tǒng)中循環(huán)時，溫度會有所改變，為了使系統(tǒng)溫度始終保持在70℃以上，在系統(tǒng)中設(shè)置熱交換器是很必要的。水在循環(huán)時流速應(yīng)高于2米/秒，即保持湍液循環(huán)狀態(tài)。第19頁/共73頁發(fā)熱發(fā)熱激活物外致熱原體內(nèi)產(chǎn)物外毒素內(nèi)毒素真菌等Ag-Ag復(fù)合物類固醇致炎物產(chǎn)內(nèi)生致熱原細(xì)胞內(nèi)生致熱原激活產(chǎn)生釋放第20頁/共73頁2、N-乙酰半胱氨酸的作用機(jī)理N-乙酰半胱氨酸為粘液溶解劑，其分子中所含的巰基(-SH)能使痰液中糖蛋白多肽鏈中的二硫鍵(-S-S)斷裂從而降低痰液粘度，促進(jìn)痰液排出，用于濃稠痰粘液過多的呼吸系統(tǒng)疾?。杭毙灾夤苎住⒙灾夤苎准毙园l(fā)作、支氣管擴(kuò)張癥。第21頁/共73頁3、5-氟尿嘧啶的作用機(jī)理5-氟尿嘧啶如果投與動物，可和尿嘧啶同樣地被吸收而阻礙細(xì)胞的增殖。作用機(jī)理：5-FU在體內(nèi)必須轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的核苷酸才能發(fā)揮其抑制腫瘤的作用。本藥在體內(nèi)先轉(zhuǎn)變成５-氟-２-脫氧尿嘧啶核苷酸，抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，抑制DNA的生物合成，這是其抗腫瘤的主要機(jī)理；此外，還能滲入RNA，阻止尿嘧啶滲入RNA而抑制RNA的合成。

臨床用于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、惡性葡萄胎、頭頸部鱗癌、皮膚癌、肝癌、膀胱癌等。第22頁/共73頁蛋白質(zhì)水解法：酸水解、堿水解和酶水解。鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是L-型氨基酸，缺點(diǎn)是Trp全部被破壞，Ser等部分被破壞。堿水解法易產(chǎn)生消旋作用。酶水解法不夠完全。第23頁/共73頁觸珠蛋白也稱結(jié)合珠蛋白(haptoglobin;Hp)結(jié)合珠蛋白是一種血漿糖蛋白，能與紅細(xì)胞外血紅蛋白(Hb)結(jié)合形成緊密的非共價復(fù)合物Hb-Hp。人體每天降解的Hb約有10%釋入血循環(huán)中，成為紅細(xì)胞外游離的Hb，Hb與Hp結(jié)合成Hb-Hp復(fù)合物后分子量可達(dá)155,000，不能透過腎小球，從而防止游離血紅蛋白從腎臟丟失，避免Hb所含鐵的丟失，保證鐵再用于合成代謝。HpHbMW155,000第24頁/共73頁溶血性貧血患者血漿結(jié)合珠蛋白濃度下降。這是由于溶血時大量的Hb釋出，Hp與游離Hb結(jié)合成復(fù)合物而被肝細(xì)胞攝取、清除。第25頁/共73頁

血紅素結(jié)合蛋白（hemopexin,Hpx）和游離血紅素有特異結(jié)合能力。它可配合結(jié)合珠蛋白對血紅蛋白進(jìn)行處理。當(dāng)廣泛溶血時，血漿結(jié)合珠蛋白耗竭，循環(huán)中游離的血紅蛋白可降解為珠蛋白和血紅素兩部分。血紅素不溶于水，可與Hpx結(jié)合成復(fù)合物而運(yùn)輸?shù)礁?，分子中的鐵可被機(jī)體重新利用，卟啉環(huán)降解為膽紅素而由膽管排出。Hb珠蛋白+血紅素Hpx血紅素Hpx第26頁/共73頁Hpx并不能與血紅蛋白結(jié)合，僅可與血紅素可逆地結(jié)合，而在血循環(huán)中反復(fù)利用，這是機(jī)體有效地保存鐵的又一種方式，而避免血紅蛋白和血紅素從腎排出體外。第27頁/共73頁鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(transferrin;Tf)

鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的生理功能是將鐵運(yùn)送到需要鐵的組織與細(xì)胞。每天血紅蛋白分解代謝，釋出25mg左右的鐵。游離鐵有毒性，它與Tf結(jié)合后不僅毒性降低而且還將鐵運(yùn)送到需鐵部位。第28頁/共73頁銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin;Cp)也是由肝臟合成的一種糖蛋白。每分子Cp可牢固地結(jié)合6個銅離子，并因攜銅而呈藍(lán)色。Cp除作為銅的載體外，還具有氧化酶的活性，可將Fe2+氧化為Fe3+，利于鐵摻入鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，促進(jìn)鐵的運(yùn)輸。

第29頁/共73頁α1-抗胰蛋白酶是血中抗蛋白酶成份，α1-抗胰蛋白酶（簡稱α1-AT）缺乏引起的一種先天性代謝病，通過常染色體遺傳。臨床特點(diǎn)為新生兒肝炎，嬰幼兒和成人的肝硬化、肝癌和肺氣腫等。正常人體內(nèi)常存在外源性和內(nèi)源性蛋白酶，如細(xì)菌毒素和白細(xì)胞崩解出的蛋白酶對肝臟及其他臟器有破壞作用，α1-AT可拮抗這些酶類，以維持組織細(xì)胞的完整性。第30頁/共73頁α1-AT缺乏時，這些酶均可侵蝕肝細(xì)胞，尤其是新生兒腸腔消化吸收功能不完善，大分子物質(zhì)進(jìn)入血液更多，α1-AT缺乏的嬰兒肝臟更易受損害。此外，α1-AT還具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、影響抗原-抗體免疫復(fù)合物清除、補(bǔ)體激活以及炎癥反應(yīng)的作用，并可抑制血小板的凝聚和纖溶的發(fā)生。α1-AT缺乏時上述機(jī)體平衡的機(jī)制失調(diào)，導(dǎo)致組織損傷。第31頁/共73頁抗腫瘤的酶L-門冬酰胺酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、組氨酸酶、酪氨酸氧化酶等。L-門冬酰胺酶：臨床上主要用于白血病的治療。

L-門冬酰胺酶門冬酰胺門冬氨酸+氨門冬酰胺是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)及增殖生長所必需的氨基酸。正常細(xì)胞有自身合成門冬酰胺的功能，而急性白血病等腫瘤細(xì)胞則無此功能，因而當(dāng)用本品使門冬酰胺急劇缺失時，腫瘤細(xì)胞因既不能從血中取得足夠門冬酰胺，亦不能自身合成，使其蛋白質(zhì)合成受障礙，增殖受抑制，細(xì)胞大量破壞而不能生長、存活。

適用于治療急性淋巴細(xì)胞性白血病(簡稱急淋)、急性粒細(xì)胞性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、何杰金病及非何杰金病淋巴瘤、黑色素瘤等。第32頁/共73頁透明質(zhì)酸（Haluronicacid、HA）又名玻璃酸，透明質(zhì)酸是一種酸性粘多糖，美國Meyer等首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水、電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等。尤為重要的是，透明質(zhì)酸具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì)，被稱為理想的天然保濕因子（Naturalmoisturizingfactor，NMF）例如：2％的純透明質(zhì)酸水溶液能牢固地保持98％水分。第33頁/共73頁硫酸軟骨素硫酸軟骨素是從動物組織中提取制備的酸性粘多糖類物質(zhì)，分子中帶有大量的負(fù)電荷，具有調(diào)脂、抗炎及弱的抗凝血、抗血栓生物活性，對維持細(xì)胞環(huán)境的相對穩(wěn)定性和正常功能具有重要作用。硫酸軟骨素對角膜膠原纖維具有保護(hù)作用，能促進(jìn)基質(zhì)中纖維的增長，增強(qiáng)通透性，改善血液循環(huán)，加速新陳代謝，促進(jìn)滲透液的吸收及炎癥的消除；其聚陰離子具有強(qiáng)的保水性，能改善眼角膜組織的水分代謝，對角膜有較強(qiáng)的親和力，能在角膜表面形成一層透氣保水膜，促進(jìn)角膜創(chuàng)傷的愈合及改善眼部干燥癥狀。第34頁/共73頁第三章復(fù)習(xí)第35頁/共73頁干擾素（interferon）。（干擾素）是最早發(fā)現(xiàn)、研究最多、第一個被克隆、第一個用于臨床治療疾病的細(xì)胞因子。干擾素在生物中普遍存在，是一組多功能細(xì)胞因子，在正常個體的脾臟、肝臟、腎臟、外周血淋巴細(xì)胞和骨髓中都可以檢出，又可以被多種因素誘發(fā)分泌，如各種病毒、雙鏈RNA、細(xì)胞內(nèi)繁殖的微生物、細(xì)菌產(chǎn)物、多聚體等，其中以（病毒）和（雙鏈RNA）的誘導(dǎo)最為有效。第36頁/共73頁3.1.1.2干擾素的分類1）根據(jù)對酸和熱的耐受性可將天然干擾素分為兩種類型：Ⅰ型和Ⅱ型。（Ⅰ型）干擾素可以耐受pH2處理或60℃1h的加熱，而（Ⅱ型）干擾素則被這種處理滅活。2）根據(jù)干擾素蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)構(gòu)、抗原性和細(xì)胞來源，可將其分為：IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-ω、IFN-τ。

IFN-α由（白細(xì)胞）產(chǎn)生，IFN-β由（成纖維細(xì)胞）產(chǎn)生，但它們的生物學(xué)活性相近，作用于相同的細(xì)胞受體。而IFN-γ主要由（T淋巴細(xì)胞）和（NK細(xì)胞）產(chǎn)生，屬于Ⅱ型干擾素。第37頁/共73頁中國人在受病毒攻擊后白細(xì)胞所產(chǎn)生的多種IFN-α中，以α1b型為主。rhIFN-α1b是我國藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市的第一個基因工程藥物。第38頁/共73頁2)IFN-βIFN-β與IFN-α基因的同源性高達(dá)80%，IFN-β是由成纖維細(xì)胞受病毒或干擾素誘導(dǎo)劑產(chǎn)生的一種具有生物學(xué)活性的糖蛋白。誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生的因素與誘導(dǎo)IFN-α相同。IFN-β本身還可以誘生多種細(xì)胞因子，如誘生IL-1，而IL-1反過來又可以誘生IFN-α、IFN-β、IL-1~6、GM-CSF、TNF-β等細(xì)胞因子，因此IFN-β在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。第39頁/共73頁3.1.1.4干擾素的生物學(xué)活性1)抗病毒活性2)抑制細(xì)胞增殖活性和抗腫瘤活性3)免疫調(diào)節(jié)活性第40頁/共73頁1)抗病毒活性IFN是機(jī)體抗病毒感染的第一道防線，在免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前使細(xì)胞形成抗病毒狀態(tài)，抑制病毒增殖，防止病毒擴(kuò)散。第41頁/共73頁2)抑制細(xì)胞增殖活性和抗腫瘤活性無論是對轉(zhuǎn)化細(xì)胞還是正常細(xì)胞的生長，IFN均具有抑制作用。調(diào)節(jié)癌基因的表達(dá)是IFN抗腫瘤活性的一個重要機(jī)制。正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程在一定程度上受癌基因的調(diào)控，IFN能夠抑制一些前癌基因的表達(dá)，從而選擇性地減少癌基因的表達(dá)，阻止或減慢正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程。第42頁/共73頁3)免疫調(diào)節(jié)活性IFN對整個機(jī)體的免疫功能包括免疫監(jiān)視、免疫防御、免疫穩(wěn)定等均有不同程度的調(diào)節(jié)作用。第43頁/共73頁3.1.2白細(xì)胞介素類白細(xì)胞介素（interleukin,IL）是一類免疫調(diào)節(jié)因子。這個名稱是1979年在第二屆國際淋巴因子研討會提出的，意指由各種白細(xì)胞產(chǎn)生的，介導(dǎo)細(xì)胞之間相互作用的細(xì)胞因子。它們主要由激活的淋巴細(xì)胞分泌，作為免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子信使發(fā)揮作用。第44頁/共73頁3.1.2.1白細(xì)胞介素的種類、結(jié)構(gòu)與特性1）人IL-2人IL-2主要由激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白，又稱T細(xì)胞生長因子。Cys125易形成二硫鍵錯配，形成二聚體，降低甚至失去IL-2的生物學(xué)活性。將Cys125突變?yōu)榻z氨酸或丙氨酸后，可改善其活性和穩(wěn)定性。這種突變體也已批準(zhǔn)上市。第45頁/共73頁3.1.3集落刺激生長因子3.1.3.1集落刺激生長因子的種類、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)1966年Bradey等人在進(jìn)行造血細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)時，發(fā)現(xiàn)一類蛋白質(zhì)可刺激造血細(xì)胞集落形成，從而發(fā)現(xiàn)一組特異性的造血生長因子。用集落培養(yǎng)方法發(fā)現(xiàn)的造血細(xì)胞生長因子稱為集落刺激因子（colonystimulatingfactor,CSFs）CSFs不是單一成分，不同的CSF刺激生成由不同的細(xì)胞系組成的細(xì)胞集落。第46頁/共73頁嚴(yán)格講，CSF主要是GM-CSF、G-CSF、M-CSF和Multi-CSF（或IL-3）4種。GM-CSF：granulocyte-macrophageCSF，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子G-CSF：granulocyteCSF，粒細(xì)胞集落刺激因子M-CSF：macrophageCSF，巨噬細(xì)胞集落刺激因子Multi-CSF（或IL-3）：多能集落刺激因子第47頁/共73頁維持細(xì)胞存活（細(xì)胞膜完整）；刺激造血細(xì)胞增殖；引導(dǎo)造血細(xì)胞分化定型；刺激終末細(xì)胞的功能活性。CSFs對效應(yīng)細(xì)胞具有4種作用：第48頁/共73頁3.1.4紅細(xì)胞生成素紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）,又稱促紅細(xì)胞生成素或紅細(xì)胞生產(chǎn)刺激因子（erythropoieticstimulatingfactor,ESF），是調(diào)節(jié)紅系祖細(xì)胞、紅細(xì)胞生成的主要激素。1971年研究人員從貧血羊血漿中純化出羊EPO。1977年Miyake從再生障礙性貧血病人的尿液中分離獲得人EPO純品，但含量甚微。第49頁/共73頁在人類胎兒和新生兒時期，肝臟是產(chǎn)生EPO的主要器官。成年期，EPO主要產(chǎn)生于腎臟，但肝臟仍保留產(chǎn)生EPO的能力。一些腫瘤細(xì)胞也能產(chǎn)生EPO。機(jī)體缺氧和貧血能誘導(dǎo)產(chǎn)生EPO，鈷鹽、錳鹽和雄激素等也能誘導(dǎo)產(chǎn)生EPO。第50頁/共73頁3.1.5腫瘤壞死因子腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor,TNF）實(shí)際上，內(nèi)毒素的腫瘤壞死效應(yīng)是通過單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用而殺傷腫瘤的，其本身并無直接抗癌作用。第51頁/共73頁值得一提的是，TNF–β和TNF–α在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，都能誘導(dǎo)正常細(xì)胞和動物產(chǎn)生錳過氧化物歧化酶，保護(hù)正常細(xì)胞免受輻射或抗瘤藥物的損傷，同時增加腫瘤細(xì)胞對輻射的敏感性，這對腫瘤放射治療的效果及愈后有積極作用。第52頁/共73頁3.1.6表皮生長因子3.1.6.1表皮生長因子的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)表皮生長因子(epidermalgrowthfactor,EGF)首先是20世紀(jì)60年代從小鼠頜下腺中發(fā)現(xiàn)的一種活性多肽，它由53個aa組成，含3對二硫鍵，分子質(zhì)量約6ku。人表皮生長因子，因其可抑制胃酸的分泌，又稱抑胃素。第53頁/共73頁表皮生長因子的臨床應(yīng)用中國科學(xué)院上海生化所成功地利用分泌型大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)了EGF，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所利用酵母體系高效表達(dá)了hEGF，兩種體系表達(dá)的EGF均獲得了新藥證書（外用型）1）促進(jìn)外科手術(shù)傷口及創(chuàng)面愈合；2）促進(jìn)眼角膜創(chuàng)傷的愈合；3）對胃腸道潰瘍的治療作用；EGF的生物學(xué)作用廣泛，對外胚層和內(nèi)胚層來源的一些組織有促分裂和刺激合成的作用。EGF促進(jìn)細(xì)胞增殖分化，存在內(nèi)用安全性問題，故內(nèi)用rhEGF至今未獲批準(zhǔn)臨床應(yīng)用。第54頁/共73頁3.1.7干細(xì)胞因子干細(xì)胞因子（stemcellfactor,SCF）又稱為干細(xì)胞生長因子（SCGF），肥大細(xì)胞生長因子（mastcellgrowthfactor,MCGF），是1990年發(fā)現(xiàn)的一種重要的造血細(xì)胞因子。它在造血及維持肥大細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和精原細(xì)胞的存活、增殖和分化過程中起著重要作用。尤其是在干細(xì)胞移植、干細(xì)胞生物工程研究和應(yīng)用迅速的今天，SCF在這一領(lǐng)域?qū)⒄加衅渌?xì)胞因子不可替代的重要地位，越來越受到生物學(xué)家和臨床學(xué)家的重視。第55頁/共73頁血小板生成素（thrombopoetin,TPO），是血小板生成的主要生理調(diào)節(jié)因子，主要通過刺激巨核細(xì)胞分化、增殖及成熟來調(diào)節(jié)體內(nèi)血小板的生成，故又稱巨核細(xì)胞生長發(fā)育因子（Megakaryocytegrowthanddevelopmentfactor,MGDF）。3.1.8血小板生成素第56頁/共73頁糖基化與否并不影響IL-2的功能，故可以用大腸桿菌來生產(chǎn)重組人IL-2。大腸桿菌表達(dá)的無糖基化的rhGM-CSF比天然糖基化GM-CSF具有更高的生物學(xué)活性，更長的半衰期和更強(qiáng)的結(jié)合受體親和力。糖基化與否對SCF的活性沒有影響，這樣可以用大腸桿菌表達(dá)體系來大量表達(dá)生產(chǎn)重組人SCF。TNF-α，可用大腸桿菌原核表達(dá)。中國科學(xué)院上海生化所成功地利用分泌型大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)了EGF，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所利用酵母體系高效表達(dá)了hEGF，兩種體系表達(dá)的EGF均獲得了新藥證書（外用型）第57頁/共73頁糖基對EPO的生物學(xué)活性是到至關(guān)重要的，因此基因工程的EPO只能利用哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（CHO）生產(chǎn)天然的TPO是高度糖基化的，糖基化有助于提高TPO的活性，還可延長其半衰期，所以得用哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)。第58頁/共73頁3.2.1胰島素胰島素insulin是最早（Banting和Best，1921年）發(fā)現(xiàn)的一種具有激素作用的蛋白質(zhì)，也是最先（Abel，1926年）結(jié)晶、確定氨基酸殘基序列（Sanger等，1955年）、人工化學(xué)合成（Du等，1964年；龔岳亭等，1965年）以及采用基因工程技術(shù)批量生產(chǎn)并投放市場供應(yīng)臨床（1982年）的第一種蛋白質(zhì)。第59頁/共73頁3.2.1.2胰島素的生物功能及臨床應(yīng)用生物學(xué)功能胰島素具有非常廣泛的調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝等的生物學(xué)功能，是維持人體正常代謝和生存所必需的激素。胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，也是唯一同時促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。

第60頁/共73頁1）調(diào)節(jié)糖代謝：胰島素能夠降低血糖；2）調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝：胰島素通過增加肌肉等組織及細(xì)胞對氨基酸的提取，促進(jìn)核糖蛋白對mRNA的翻譯，加速蛋白質(zhì)的合成；胰島素還可降低蛋白水解酶的活性，抑制蛋白質(zhì)的分解代謝和氨基酸的氧化；第61頁/共73頁3）調(diào)節(jié)脂肪代謝：胰島素能促進(jìn)脂肪酸的合成和碳水化合物轉(zhuǎn)換為脂肪。通過降低細(xì)胞內(nèi)脂解酶的活性而抑制脂肪分解，使酮體生成減少，糾正酮癥酸中毒。4）其它功能：胰島素可促進(jìn)鉀離子和鎂離子穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；可促進(jìn)DNA、RNA及ATP的合成。第62頁/共73頁3.2.4心鈉素及利鈉多肽家族心鈉素（atrialnatriureticpeptide，ANP）人心鈉素是由28個氨基酸殘基組成的活性多肽，其分子中含2個半胱氨酸形成的二硫鍵，使ANP分子呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)。具有降壓及減少血容量作用，并在維持水電解質(zhì)平衡及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面扮演重要角色第63頁/共73頁3.3.1鏈激酶鏈激酶(streptokinase)是在1933年由Tillet和Garner首先在多株鏈球菌的培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)的，也是最先用于臨床治療的溶栓藥。最初的藥物是從β-溶血性鏈球菌的培養(yǎng)液中提取的，產(chǎn)量低、成本高，而且制品中殘存的溶血素對心肌和肝臟有一定的損害。以后改用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)的重組鏈激酶避免了該危害。第64頁/共73頁鏈激酶是一種非酶性單鏈蛋白，本身不能激活纖溶酶原，它的激活機(jī)制是間接的，即先要與纖溶酶原以1：1的比