MS質(zhì)譜的應(yīng)用及解析8課件

LC/MS/MS定量分析的一般步驟準(zhǔn)備工作做好樣品前處理，萃取，濃縮，分離，純化。有條件的可先在HPLC上摸好LC條件，能夠基本分離更好，緩沖體系符合MS要求。溶劑包括水的純度，最好色譜純以上。新的色譜柱可能要先沖洗很長時(shí)間才能干凈，某些樣品非常容易吸附在進(jìn)樣閥和管路中，用溶劑清洗。質(zhì)譜儀必須校準(zhǔn)，預(yù)熱時(shí)間要足夠長，氣流的穩(wěn)定也很重要，液氮?dú)忾y開度要注意，達(dá)到穩(wěn)定程度。3/14/20231MS條件優(yōu)化

先定性后定量首先，確定離子化方式：ESIorAPCI，POSorNEG用10-100ppm的純樣，Q1SCAN查看存在那些離子，要能夠看到待測的母離子，應(yīng)明顯比周圍的噪聲離子高，通過改變DP，觀察離子的增減，若為POS方式，看M+1，M+18，M+23等等，初步判斷分子離子，如看不到則可能是濃度太低或離子化方式不合適，或選擇的溶劑體系不合適。3/14/20232母離子選M+H，或M-H最好，但有時(shí)只有M+NH4，M+Na等，這樣CAD能量需要可能高些，選擇〔M+H〕+，還是+NH4，Na等，要由化合物決定，加合離子若穩(wěn)定則可用，不穩(wěn)定則可能需要換流動(dòng)相，但+H通常好些，所需碰撞能量低，靈敏度高。如含CL可選擇2個(gè)母離子峰。SIM與MRM，單級Q只能SIM，MRM可看成2個(gè)SIM，選擇性更好。再根據(jù)上一步確定的較純的母離子進(jìn)行PRODUCTSCAN，確保所有碎片離子都來自待測化合物，而不是溶液中的雜質(zhì)，找出較強(qiáng)的碎片離子信息，還可改變CE，從中選定MRM一對或更多離子對，為最后LC/MS/MS聯(lián)用做準(zhǔn)備。

3/14/20233先用注射泵優(yōu)化COMPOUND項(xiàng)下面的參數(shù)，如DP，CE，CAD等，再接通LC用FIA優(yōu)化其他參數(shù)如溫度，氣流和IS電壓及離子源位置，或接一個(gè)三通，樣品仍由注射泵進(jìn)入離子源，同時(shí)LC保持需要的流量，然后進(jìn)行MRM測定。CURTAINGAS在不降低靈敏度情況下盡量大些，溫度在達(dá)到靈敏度時(shí)不用太高，氣流也不用太大，這樣可以提高信噪比，保持信號穩(wěn)定。分辨率的選擇：當(dāng)樣品較純，Q3可選LOW，提高靈敏度，若選LOW后本底噪聲太大則意義不大。3/14/20235LC條件優(yōu)化：色譜柱長度可根據(jù)分離的要求而定，定性可長些，定量在能有效排除干擾情況下盡量短，提高效率；內(nèi)徑最好選細(xì)徑柱如2mm，1mm，IS可不分流，4.6mm柱用1ml流量時(shí)如不分流靈敏度還不是最佳，不如流量低時(shí)更好。流速高，峰形好。不同牌號色譜柱，效果很可能不同。PH的影響：正離子方式PH要低些，負(fù)離子方式PH要高些，除對離子化有影響外，還影響LC的峰形，以至定量誤差。流動(dòng)項(xiàng)加乙酸銨可適合大部分測定的要求。3/14/20236LC/MS/MS與LC/UV比較：通常/MS/MS因選擇性好，靈敏度高，定量跟準(zhǔn)確，但質(zhì)量范圍很寬全掃描時(shí)不一定靈敏度高。LC梯度的設(shè)定，目的是快速分離，峰形好，縮短時(shí)間，提高效率，選短柱亦是如此。溶解稀釋被測物最好用流動(dòng)相，或盡量接近的體系，否則可能峰形不好，變寬，出怪峰等使定量不準(zhǔn)。3/14/20237前處理方法的優(yōu)化LC，MS都優(yōu)化還不行，改提取方法。離子抑制-改變前處理方法或LC條件。內(nèi)標(biāo)用法，藥代動(dòng)力學(xué)時(shí)多采用內(nèi)標(biāo)，選擇原則：內(nèi)標(biāo)物與待測物的化學(xué)性質(zhì)有區(qū)別時(shí)，要注意干擾基質(zhì)對他們的離子化影響的不同，盡量選同系物。還可利用同位素標(biāo)記。衍生化-穩(wěn)定，信號強(qiáng)，例如硝基呋喃類，衍生化后容易測量。優(yōu)化質(zhì)譜儀器，調(diào)整LC參數(shù)，選擇進(jìn)樣方法等所有的工作都是為了使儀器的靈敏度最高，選擇性最好，使得被分析物能夠被準(zhǔn)確無誤的測定。3/14/20239數(shù)據(jù)處理

最低檢出限，信噪比2：1，定量限10：1。同一物質(zhì)幾對離子的比例應(yīng)相對恒定，誤差不超過15%；峰面積比峰高更準(zhǔn)確。當(dāng)濃度低，信號弱，自動(dòng)積分不準(zhǔn)時(shí)可對峰面積手動(dòng)積分。平滑次數(shù)與峰寬因子，保留時(shí)間。曲線過零點(diǎn)可用4個(gè)點(diǎn)，不過，則要用5個(gè)點(diǎn)。線性范圍太寬無益。幾種算法的意義，1