放散試驗專題知識專家講座

放散試驗原理紅細(xì)胞上抗原與血清中抗體在適合條件下發(fā)生凝集或致敏，這種結(jié)合是可逆。如改變一些物理條件，抗體又可從結(jié)合細(xì)胞上放散，再以對應(yīng)紅細(xì)胞判定放散液內(nèi)抗體種類并測定其強(qiáng)度，用以判定原來紅細(xì)胞上抗原型別。這種方法慣用于ABO亞型判定、全凝集或多凝集紅細(xì)胞定型、類B判定以及新生兒溶血病診療等放散試驗專題知識專家講座第1頁放散試驗專題知識專家講座第2頁放散試驗專題知識專家講座第3頁放散試驗方法放散試驗方法很多，ABO血型IgM抗體以熱放散法為慣用。Rh血型IgG抗體以乙醚放散法為慣用。放散試驗專題知識專家講座第4頁加熱放散法試劑操作注意事項放散試驗專題知識專家講座第5頁放散試驗專題知識專家講座第6頁加熱放散法試劑抗A和抗B分型血清。2%A型和B型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。受檢紅細(xì)胞。放散試驗專題知識專家講座第7頁加熱放散法操作1.將受檢紅細(xì)胞以大量生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后，將鹽水除盡，取壓實紅細(xì)胞l份，分別與2份抗A和抗B分型血清混合。置4℃lh，每隔10min將試管振搖1次，使充分混合。放散試驗專題知識專家講座第8頁加熱放散法操作2.離心去除上清液，以4℃冷鹽水洗滌紅細(xì)胞3-4次，傾去洗滌液，留取壓實紅細(xì)胞，加1/2容積生理鹽水(如放散液不立刻進(jìn)行檢驗，應(yīng)以AB型血清代理生理鹽水)，置56℃水浴中10min,每隔15s振搖l次，使吸附在紅細(xì)胞上抗體充分放散。放散試驗專題知識專家講座第9頁加熱放散法操作3.立刻以3000r/min離心，離心時套管內(nèi)放溫水，使溫度盡可能保持在56℃，分離得上清液即為放散液。4.將放散液用2%A型和B型試劑紅細(xì)胞判定抗體，即可檢出受檢紅細(xì)胞血型。放散試驗專題知識專家講座第10頁加熱放散法操作如試驗?zāi)繕?biāo)判定A亞型，則可用已知A亞型紅細(xì)胞同時作放散試驗，按放散液抗體強(qiáng)度A1﹤A2﹤A3﹤Ax﹤Am，判定受檢紅細(xì)胞亞型型別，B亞型放散液判定方法相同。放散試驗專題知識專家講座第11頁加熱放散法注意事項1.為了使放散液內(nèi)含有最多抗體，吸收血清量應(yīng)加大。2.放散時，應(yīng)嚴(yán)格注意溫度和時間。溫度過高紅細(xì)胞易溶解;溫度過低，抗體從紅細(xì)胞上放散不完全。3.直接抗人球蛋白試驗陽性紅細(xì)胞，如新生兒溶血病患兒或本身免疫性溶血性貧血患者，經(jīng)洗滌后即可作抗體放散試驗。4.放散液中抗體易變性，故應(yīng)立刻進(jìn)行判定。若需保留，應(yīng)將抗體放散于選定AB型血清或牛白蛋白液中。放散試驗專題知識專家講座第12頁放散試驗專題知識專家講座第13頁乙醚放散法試劑操作特點放散試驗專題知識專家講座第14頁乙醚放散法試劑受檢者血清對應(yīng)抗原紅細(xì)胞(抗凝血)乙醚（分析試劑）AB血清放散試驗專題知識專家講座第15頁乙醚放散法操作取含有對應(yīng)抗抗原抗凝血，離心后吸去血漿，加大量生理鹽水，洗滌1次，離心，取壓實紅細(xì)胞備用。取受檢者血清5ml，加壓實紅細(xì)胞1ml，混勻后放在適當(dāng)溫度中1小時，在此期間要搖勻1-2次。離心。離心后取出，將上清液吸出另放1管，判定上清液中抗體。放散試驗專題知識專家講座第16頁乙醚放散法操作將紅細(xì)胞用鹽水洗滌3次，離心壓實紅細(xì)胞。取1體積壓實紅細(xì)胞，加1體積AB型血清或生理鹽水和2體積乙醚，顛倒搖勻10min，然后以3000r/min離心5min.離心后即分成3層，最上層是乙醚，中層是細(xì)胞基質(zhì)，下層是含有抗體放散液，其色深紅。放散試驗專題知識專家講座第17頁放散試驗專題知識專家講座第18頁乙醚放散法操作用清潔吸管吸出放散液，若有混濁，可再離心1次。將放散液放置37℃水浴中30min，除盡乙醚，然后判定抗體。放散試驗專題知識專家講座第19頁乙醚放散法特點本試驗適合用于判定Rh抗體。最大優(yōu)點