土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)1新人教版選修

土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)1新人教版選修第1頁(yè)/共18頁(yè)生物技術(shù)實(shí)踐普通高中課程標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)教科書生物選修1三組制作路路大波主持第2頁(yè)/共18頁(yè)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第3頁(yè)/共18頁(yè)課題2

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第4頁(yè)/共18頁(yè)課題背景

尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但是尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氮之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?。尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的。

1828年，德國(guó)化學(xué)家維勒成功地通過無(wú)機(jī)物的化學(xué)反映合成了尿素，揭開了歷史上人工合成有機(jī)物的新篇章。第5頁(yè)/共18頁(yè)尿素第6頁(yè)/共18頁(yè)研究思路

篩選菌株

PCR的自動(dòng)化需要耐高溫的DNA聚合酶，這種酶要能忍受93℃左右的高溫?？茖W(xué)家從水生耐熱細(xì)菌Taq中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶。為什么Taq細(xì)菌能從熱泉中被篩選出來(lái)呢？因?yàn)闊崛?0--80℃的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物，而使耐高溫的Taq細(xì)菌脫穎而出。第7頁(yè)/共18頁(yè)實(shí)驗(yàn)室微生物的篩選原理

應(yīng)用篩選Taq細(xì)菌的原理，人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。第8頁(yè)/共18頁(yè)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

常用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)30—300的平板計(jì)數(shù)。第9頁(yè)/共18頁(yè)培養(yǎng)基上的菌落第10頁(yè)/共18頁(yè)設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。第11頁(yè)/共18頁(yè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)合課本上給出的資料與實(shí)驗(yàn)流程示意圖，思考有關(guān)問題，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并且些出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。資料一土壤取樣資料二樣品的稀釋資料三微生物的培養(yǎng)與觀察第12頁(yè)/共18頁(yè)操作提示無(wú)菌操作

1.取土樣的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。

2.應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入燒瓶中，塞好棉塞。

3.在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。第13頁(yè)/共18頁(yè)做好標(biāo)記本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多。為避免混淆，最好在使用前就做好標(biāo)記。例如：在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)，應(yīng)注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度。

第14頁(yè)/共18頁(yè)規(guī)劃時(shí)間對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，我們需要實(shí)現(xiàn)規(guī)劃時(shí)間，以便提高工作效率，在操作時(shí)更加有條不紊。第15頁(yè)/共18頁(yè)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)結(jié)合對(duì)照，分析培養(yǎng)物總共是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落？是否獲得了某一稀釋度下，菌落數(shù)目在30—300的平板。在這一稀釋度下，是否至少有兩個(gè)平板的菌落數(shù)相接近？你統(tǒng)計(jì)的每克土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？第16頁(yè)/共18頁(yè)課題延伸本課題對(duì)能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了初步的篩選，這只是純化菌種的第一步。對(duì)分離菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。我們可以通過檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來(lái)判斷細(xì)菌