磁珠分離細胞技術

磁珠分選技術當前1頁，總共22頁。磁珠分選技術免疫學+細胞生物學+磁力學基于抗體對抗原的特異性識別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、OligodT磁珠在高強度、梯度磁場中達到磁性分離的目的：分離細胞、蛋白、核酸、細菌等當前2頁，總共22頁。磁珠磁力架分離柱或分離試管MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…磁珠分選系統(tǒng)當前3頁，總共22頁。管式分選Dynalbeads?Dynalbeads分離試管磁力架當前4頁，總共22頁。當前5頁，總共22頁。柱式分選當前6頁，總共22頁。未標記的細胞

先行流出MACS微珠進行磁性標記撤去磁場，將標記的細胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下形成強大的磁場，使含磁珠的細胞懸浮在磁場中當前7頁，總共22頁。MACSd≈50nm，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細胞生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細胞(10-8);Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被的氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適用于細胞活化；BDd≈200nm，超順磁化微粒；包被了高質量的BD抗體；StemCell管式；柱式;R&Dd≈150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體.當前8頁，總共22頁。直標間標抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠當前9頁，總共22頁。在沒有直接標記微珠可選時使用自備抗體或配體的磁性分選中分選或去除用多個抗體混合物標記的多種細胞分選稀有細胞和抗原弱表達的細胞間標擴展了分選范圍當前10頁，總共22頁。分選策略陽性分選去除分選多重分選當前11頁，總共22頁。用磁珠標記目標細胞目標細胞滯留在分選柱內目標細胞被洗脫，收集目的細胞磁性標記后，作為陽性的標記組分直接分選出來。高純度，高回收率，操作簡單，尤其是富集稀少細胞。當前12頁，總共22頁。分選前陰性組分(未滯留在分選柱上的細胞)陽性組分(滯留在分選柱上的細胞)應用anti-CD19磁珠分選人外周血中的B細胞當前13頁，總共22頁。非目的細胞磁性標記后，作為陰性的組分滯留在分選柱上，未標記的目的細胞被分選出來。去除不需要的細胞缺乏針對目的細胞的特異性抗體（如腫瘤細胞）不需要抗體和目的細胞結合，即細胞不被刺激（如T細胞、B細胞、NK細胞功能分析）需進一步通過陽性選擇分選細胞亞群。標記非目的細胞非目的細胞滯留在分選柱上，被去除當前14頁，總共22頁。生物素標記CD2,CD14,CD16,CD36,CD43,CD235a;再加入鏈酶親和素標記的磁珠應用去除法分選人外周血中的B細胞當前15頁，總共22頁。先去除非目的細胞，再進行陽性分選。非目的細胞也表達用來陽性選擇目的細胞的抗原；要分選非常稀有細胞，先去除非目的細胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細胞。標記去除非目的細胞標記目的細胞洗脫目的細胞當前16頁，總共22頁。應用：分選人外周血中的CD4+CD25+

T細胞分選前去除分選后陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陽性組分當前17頁，總共22頁。洗脫目標細胞用標記1標記目標細胞用標記2標記目標細胞去除磁珠標記洗脫目標細胞進行多次連續(xù)陽性分選，進行新標記前先去除原來的磁珠標記。可進行多參數(shù)分選。當前18頁，總共22頁。應用：分選人外周血中的CD3+CD56+

T細胞分選前第一次陽選第二次陽選當前19頁，總共22頁。優(yōu)點：操作簡單，高效快捷，無菌和細胞狀態(tài)更有保證，回收率、純度高。缺點：不能在分選的同時進行分析，分選過程中很難去除死細胞團塊的干擾，難于同時進行多種標記物的分選。當前20頁，總共22頁。分選前標本處理密度梯度離心(Ficoll,Percoll)（根據(jù)情況）溶血(溶解紅細胞)過濾(單個細胞)分選標本：不含有死細胞或者碎片的單細胞懸液骨髓