生物樣本樣品前處理

關(guān)于生物樣本樣品前處理第1頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五簡(jiǎn)介第2頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五前處理技術(shù)1、直接稀釋法：簡(jiǎn)單、回收率高、成本低，但選擇性差，應(yīng)用有限2、超濾法：多用于測(cè)定游離藥物濃度3、蛋白沉淀法：幾乎適用于所有小分子化合物，簡(jiǎn)單快速，回收率高，但選擇性差，基質(zhì)效應(yīng)嚴(yán)重4、液液提取法：基質(zhì)效應(yīng)降低，低成本，重復(fù)性好；但難以自動(dòng)化，不適用于水溶性化合物的提取，極性相差較大的化合物同時(shí)提取困難5、固相萃取法：可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，基質(zhì)效應(yīng)降低，同時(shí)完成樣品的富集與凈化；但成本較高第3頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五液液提取法利用目標(biāo)化合物在生物基質(zhì)和與水不互溶的有機(jī)溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物從生物基質(zhì)中轉(zhuǎn)移至有機(jī)相中。兩相的分離需借助兩相的密度差來(lái)實(shí)現(xiàn)原理：相似相溶分配系數(shù)：kA=yA/xAyA和xA分別表示在萃取相和萃余相中的質(zhì)量比率選擇性系數(shù)（分離系數(shù)）：β=kA/kB=萃取劑的選擇：1、選擇性好：表現(xiàn)為選擇性系數(shù)大。2、萃取容量大：表現(xiàn)為分配系數(shù)大。3、萃取劑與原溶劑的互溶度。4、萃取劑和原溶劑有較大的密度差。5、化學(xué)穩(wěn)定性耐酸耐堿、抗氧化還原、耐熱、無(wú)腐蝕。6、安全性好。7、經(jīng)濟(jì)性好。Tips:PH和溫度對(duì)萃取有一定影響。第4頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五常用液液提取溶劑溶劑名稱分子量沸點(diǎn)（℃）密度（g/mL)偶極矩（D)二氯甲烷84.9401.331.60乙酸乙酯88.177.10.901.78氯代正丁烷92.6770.89乙醚74.134.50.711.15戊烷72.236.10.630

環(huán)己烷84.280.70.780正己烷86.2690.660.08甲苯92.2110.60.870.36異丙醇*60.182.40.791.66四氫呋喃*72.1660.891.63乙腈*41.181.60.783.92正丁醇*74.11171.001.50水*18.01001.001.84注：“*”表示與水互溶偶極矩越小，極性越小第5頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法

HLB(Hydrophilic-LipophilicBalanceCopolymer)材料的優(yōu)點(diǎn)△水可浸潤(rùn)△反相保留△PH1-14范圍內(nèi)穩(wěn)定△沒(méi)有裸露硅羥基第6頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法第7頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法第8頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法改變化合物PH，酸性保留，堿性洗脫第9頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法改變化合物PH，堿性保留，酸性洗脫第10頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法改變吸附劑PH，堿性保留，酸性洗脫第11頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五固相提取法改變吸附劑PH，酸性保留，堿性洗脫第12頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五LC-MS-MS方法需考慮的問(wèn)題

基質(zhì)效應(yīng)※樣品中除被檢測(cè)化合物外的成分，對(duì)化合物測(cè)定造成影響的效應(yīng)?！鶅煞N方式檢測(cè)基質(zhì)效應(yīng)：柱后灌流法（定性），樣品處理比較法（定量）?！鉀Q方案：1、改變樣品前處理方法。（液液提取和固相提取法可降低基質(zhì)效應(yīng)）2、優(yōu)化色譜條件。（將干擾物和待測(cè)物分離）3、優(yōu)化質(zhì)譜條件。（更換離子源，APCI源優(yōu)于ESI源）4、同位素內(nèi)標(biāo)。（終極辦法，最有效）生物基質(zhì)中的磷脂化合物易導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)，大多數(shù)表現(xiàn)為基質(zhì)抑制。建議：LC-MS-MS方法時(shí)監(jiān)測(cè)m/z184→m/z184離子對(duì)。第13頁(yè)，共15頁(yè)，2023年，2月20日，星期五LC-MS-MS方法需考慮的問(wèn)題

非特異性吸附※在低蛋白含量的生物基質(zhì)（尿液，腦脊液，透析液等）中，化合物在存放/轉(zhuǎn)移過(guò)程中與容器材料發(fā)生特異性結(jié)合的現(xiàn)象?！谙鄳?yīng)的生物基質(zhì)中或水中測(cè)試，做轉(zhuǎn)管實(shí)驗(yàn)?！ǔ８鼡Q儲(chǔ)存材料，或者在基質(zhì)中加入一定量表面活性劑可消除非特異性吸附現(xiàn)象。

常見(jiàn)表面活性劑：Triton-X-100，吐溫等1、表面活性劑需確立一個(gè)濃度范圍而不是單一濃