微生物的純培養(yǎng)與顯微技術

關于微生物的純培養(yǎng)與顯微技術第1頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)一、相關概念培養(yǎng)物（culture）：在微生物學中，指在人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體。純培養(yǎng)物（pureculture）：只有一種微生物的培養(yǎng)物。無菌技術（aseptictechnique）：指在分離、轉接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其他微生物污染的技術。第2頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四二、無菌條件1、微生物培養(yǎng)用的常用器具

試管、玻璃三角燒瓶、平皿2、滅菌方式

高壓蒸汽滅菌、高溫干熱滅菌、化學試劑、紫外射線、微波、過濾等3、接種操作1）、對操作環(huán)境滅菌2）、對接種工具的滅菌3）、接種過程的無菌操作第3頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四高壓蒸汽滅菌鍋超凈工作臺第4頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四三、固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)（一）相關概念1、菌落（colony）：單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結構的子細胞生長群體。2、菌苔（lawn）：當固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。第5頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四細菌菌落形態(tài)第6頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第7頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第8頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第9頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四（二）微生物分離的手段1、稀釋倒平板法（pourplatemethod）

分離材料無菌水倍比稀釋取不同稀釋液少許

倒入45-50℃瓊脂培養(yǎng)基混合倒入培養(yǎng)皿培養(yǎng)第10頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2、涂布平板法（spreadplatemethod）一定稀釋度的樣品滴加在平板表面

無菌玻璃涂棒涂布菌液均勻分散整個平板表面

第11頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3、平板劃線法（streakplatemethod）第12頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四4、稀釋搖管法（dilutionshakeculturemethod）第13頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四四、液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、原因不是所有的微生物都能在固體培養(yǎng)基上生長。例如：許多原生動物、藻類、大細胞細菌等。2、方法

稀釋法（必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，應超過95%表現(xiàn)為不生長）第14頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四五、單細胞（孢子）分離直接采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。第15頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四六、選擇培養(yǎng)分離（一）原因：1、單一培養(yǎng)不能滿足所有微生物生長。2、微生物對培養(yǎng)條件的選擇。3、微生物對營養(yǎng)的竟爭。（二）分離方法1、利用選擇平板進行直接分離

依據(jù)：利用微生物自身特點選擇分離條件，如耐高溫、產(chǎn)特殊酶類等。第16頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2、富集培養(yǎng)

本質：使要分離的目的微生物的數(shù)量大大增加。

富集條件：根據(jù)所需分離的微生物的特點進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。

第17頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3、微生物的直接培養(yǎng)

方法：利用微生物自然生長條件下加入選擇條件。

原理：自然條件下微生物的多樣性，代謝的多樣性，微生物作用的協(xié)調性（分工合作）。第18頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四七、二元培養(yǎng)物（一）概念

二元培養(yǎng)物：培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關系的培養(yǎng)物。（二）應用方面

嚴格寄生物的分離、特殊共生關系的微生物的分離。第19頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四八、微生物的保藏技術1、意義2、菌種保藏機構（P19）3、保藏方法1）傳代培養(yǎng)保藏注意：a、應根據(jù)微生物不同特性選擇培養(yǎng)基。b、傳代時間

2）冷凍保藏

注意：a、冰晶形成對細胞傷害。b、要快速升降溫。c、加入保護劑第20頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3）干燥保藏法

a、沙土管保存

適用于產(chǎn)孢子的微生物，如芽孢桿菌、放線菌等。

b、冷凍真空保藏

將有保護劑樣品先凍結，然后真空作用下除去水分，置真空或惰性氣體的密閉環(huán)境中低溫保存。4）其它方法紙片保藏、薄膜保藏、寄主保藏等第21頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第二節(jié)顯微鏡下的微生物第22頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四一、細菌、放線菌和古生菌

原核微生物分為真細菌和古生菌，真細菌又分為細菌、放線菌。1、細菌的形態(tài)和排列

1）一般形態(tài)球狀、桿狀與螺旋狀三種

第23頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第24頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2)細菌的排列

許多細菌也常以成對、成鏈、成簇的形式生長。第25頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第26頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3）其它形態(tài)柄桿菌（prosthecatebacteria）細胞上有柄（stalk）、菌絲（hyphae）、附器（appendages）等細胞質伸出物，細胞呈桿狀或梭狀，并有特征性的細柄。第27頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四fivecellsareatachedbytheirstalks.第28頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四

Anelectronmicrographofametal-shadowedpreparationofPlanctomycesmaris.Asinglecellisabout1-1.5umlong.Notethefibrillarnatureofthestalk.Piliarealsoabundant.Notealsotheflagella(curlyappendages)oneachcellandthebudthatisdevelopingfromthenonstalkedpoleofonecell.第29頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四PhotomicrographsofcellsofHyphomicrobium.Byphasecontrast,showingtypicalfields.Noticethelonghyphaeandtheoccasionalbuddingcell第30頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四

球衣菌（Sphaerotilus），能形成衣鞘（sheath），桿狀的細胞呈鏈狀排列在衣鞘內而成為絲狀.第31頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四細胞呈星形和方形的細菌

第32頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四支原體（Mycoplasma）由于只有細胞膜，沒有細胞壁，故細胞柔軟，形態(tài)多變，具有高度多形性。第33頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第34頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四Donotproducecellwalls

Haveagramnegative-likemembranestructure第35頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四4）繁殖方式：無性繁殖：裂殖

第36頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四有性繁殖：細菌結合conjugation第37頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2、放線菌1）菌絲形態(tài)：營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲（鑒定指標）第38頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四ChainofconidiosporesAgarsurfaceSubstratemyceliumAerialhyphae第39頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四孢子絲不同形態(tài)第40頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3、古生菌

古生菌與細菌具有類似的個體形態(tài)，但它們多生活于一些生存條件十分惡劣的極端環(huán)境中，例如高溫、高鹽、高酸等。隱蔽熱網(wǎng)菌（Pyrodictiumoccultum）是迄今所發(fā)現(xiàn)的最耐熱的生物之一，它的最適生長溫度為105℃

第41頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四從熱泉中分離出的火山熱原體（Thermoplasmavolcanium）細胞電鏡照片熱原體（Thermoplasma）沒有細胞壁，其形態(tài)也象細菌中的支原體一樣呈多形性。第42頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四4、原核生物的細胞大小1）隨種類不同而變化2）影響細菌形態(tài)變化的因素

第43頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四二、真菌

1、特點：

種類繁多，形態(tài)各異、大小懸殊，細胞結構多樣。2、霉菌（mold）

霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲（hypha）構成。許多菌絲交織在一起，稱為菌絲體（mycelium）。Filamentousfungi第44頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四1）無隔膜菌絲(nonseptatehypha)

整個菌絲為長管狀單細胞，細胞質內含有多個核。其生長過程只表現(xiàn)為菌絲的延長和細胞核的裂殖增多以及細胞質的增加。如根霉、毛霉、犁頭霉等。第45頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2）有隔膜菌絲(septatehypha)

菌絲由橫隔膜分隔成成串多細胞，每個細胞內含有一個或多個細胞核。第46頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3）相關概念營養(yǎng)菌絲：在固體培養(yǎng)基上，部分菌絲伸入培養(yǎng)基內吸收養(yǎng)料的菌絲。氣生菌絲：向空中生長的菌絲。繁殖菌絲：由氣生菌絲發(fā)育到一定階段，分化而成的。第47頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四4）繁殖方式無性生殖：菌絲斷裂、產(chǎn)生孢子

厚垣孢子第48頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四分節(jié)孢子

第49頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四分生孢子第50頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四有性生殖：準性生殖第51頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四第52頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3、酵母菌1）繁殖方式無性生殖：芽殖或裂殖

第53頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四有性繁殖：產(chǎn)生子囊孢子新型隱球酵母（Cryptococcusneoformans）第54頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2）形態(tài)單細胞呈卵圓形、圓形、圓柱形或檸檬形第55頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四多細胞相連成為鏈狀：假絲酵母第56頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3）作用

a、有利面：在釀造、食品、醫(yī)藥、飼料方面應用。

b、不利面：引起原料腐敗變質：蜂蜜酵母（Saccharomycesmellis）、魯氏酵母（Saccharomycesrouxii）

第57頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四三、顯微藻類1、特點：有葉綠素，可進行光合作用，放氧

2、形態(tài)1）單細胞

第58頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四2）單個的、相似的細胞互相粘連而成的簡單聚集體第59頁，共63頁，2023年，2月20日，星期四3）由具特殊功能分化了的不同細胞所構成很