病毒的感染和檢查方法專家講座

第二十四章病毒感染與檢驗(yàn)方法【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1．描述標(biāo)本采集與送檢注意事項(xiàng)。2．列出病毒感染路徑與類型。3．說出病毒致病機(jī)制。4．簡述病毒感染快速診療；病毒分離培養(yǎng)與判定。病毒的感染和檢查方法第1頁案例24-1：患者男性，30歲，間歇性黃疸一年余。病人自訴一年來經(jīng)常腹瀉、伴皮疹和體重減輕。一年前曾因在交通事故中受傷而接收過輸血。無靜脈毒品注射史，無神經(jīng)精神病家族史。查體：黃疸，肝脾大，有觸痛；無腹水征象，無Kayser-Fleischer環(huán)。

試驗(yàn)室檢驗(yàn)：直接高膽紅素血癥，血清轉(zhuǎn)氨酶顯著增高，HBV血清標(biāo)識物陰性，抗-HAV陰性。肝活檢顯示肝細(xì)胞呈氣球樣變形，肝實(shí)質(zhì)或緊鄰肝門區(qū)域呈局灶性炎癥并伴有肝細(xì)胞壞死。診療為丙型肝炎病毒引發(fā)輸血后肝炎，90%丙肝病例與輸血傳輸相關(guān)。病毒的感染和檢查方法第2頁思索：1.丙型肝炎病毒傳輸方式是什么？病毒還有哪些感染方式？2.病毒引發(fā)感染類型有哪些？3.病毒性疾病怎樣進(jìn)行病原學(xué)診療？病毒的感染和檢查方法第3頁第一節(jié)病毒感染一、感染方式與路徑水平傳輸

1.經(jīng)過粘膜傳輸2.經(jīng)過皮膚傳輸3.醫(yī)源性傳輸

垂直傳輸

病毒的感染和檢查方法第4頁二、感染類型隱性感染病毒侵入機(jī)體內(nèi)不引發(fā)臨床癥狀者為隱性感染又稱亞臨床感染。隱性感染者也可向體外排出病毒，成為傳染源，在流行病學(xué)上有十分主要意義。

病毒的感染和檢查方法第5頁顯性感染顯性感染是病毒侵入機(jī)體后，引發(fā)顯著臨床癥狀，即病毒性傳染病。1.急性感染普通潛伏期短，發(fā)病急，病程數(shù)日至數(shù)周2.連續(xù)性感染連續(xù)性感染指病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)連續(xù)數(shù)月至數(shù)十年、甚至終生?？沙霈F(xiàn)也可不出現(xiàn)癥狀，但長久攜帶病毒，成為主要傳染源。

病毒的感染和檢查方法第6頁連續(xù)性病毒感染可分為三種：（1）慢性感染：病毒感染機(jī)體后，病毒長久存在體內(nèi)，機(jī)體表現(xiàn)有臨床癥狀，病程連續(xù)時間較長。如艾滋病、慢性乙型肝炎、傳染性軟疣等。

病毒的感染和檢查方法第7頁

（2）潛伏感染：原發(fā)感染后，病毒長久潛伏于機(jī)體某一特定組織內(nèi)、既不增殖又不引發(fā)臨床癥狀、與機(jī)體處于相對平衡狀態(tài)。

病毒的感染和檢查方法第8頁（3）遲發(fā)感染較少見但后果嚴(yán)重。其特點(diǎn)是潛伏期較長，可達(dá)數(shù)月至多年、甚至數(shù)十年，一旦出現(xiàn)臨床癥狀，病情多呈亞急性進(jìn)行性發(fā)展過程，直至死亡。

病毒的感染和檢查方法第9頁三、病毒致病機(jī)制細(xì)胞水平致病機(jī)制

1.殺細(xì)胞效應(yīng)

指病毒進(jìn)入機(jī)體后在細(xì)胞內(nèi)增殖，造成宿主細(xì)胞溶解、死亡作用。

病毒的感染和檢查方法第10頁2.細(xì)胞膜改變

有些病毒感染宿主細(xì)胞后并不使細(xì)胞發(fā)生溶解、死亡，而是引發(fā)宿主細(xì)胞膜改變：①細(xì)胞融合②細(xì)胞膜上出現(xiàn)新抗原

病毒的感染和檢查方法第11頁病毒的感染和檢查方法第12頁3.包涵體形成

在一些病毒感染細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)，用普通顯微鏡觀察到非正常斑塊狀結(jié)構(gòu)，即包涵體。病毒包涵體染色性、形態(tài)大小、存在部位則因病毒不一樣而異。

病毒的感染和檢查方法第13頁病毒的感染和檢查方法第14頁4.細(xì)胞轉(zhuǎn)化

有些病毒在侵入宿主細(xì)胞后，病毒核酸可整合于宿主細(xì)胞基因組中，使宿主細(xì)胞遺傳性狀發(fā)生改變，引發(fā)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化細(xì)胞特征是：①取得旺盛生長力；②轉(zhuǎn)化細(xì)胞表面可出現(xiàn)新抗原。病毒的感染和檢查方法第15頁5.細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡是由宿主細(xì)胞基因所指令發(fā)生一個生物學(xué)過程。病毒的感染和檢查方法第16頁機(jī)體水平致病機(jī)制

1.對免疫系統(tǒng)抑制作用2.免疫病理反應(yīng)病毒的感染和檢查方法第17頁第二節(jié)病毒感染檢驗(yàn)方法一、標(biāo)本采集與送檢采集標(biāo)本

必須依據(jù)臨床診療及病程不一樣采集不一樣標(biāo)本。如鼻咽分泌物、糞便、腦脊液、血液等。檢測病毒抗體或分離病毒時，應(yīng)在發(fā)病早期即急性期采集標(biāo)本；檢測抗病毒抗體時，應(yīng)取雙份血清，即在急性期和恢復(fù)期各取一份血清標(biāo)本。

病毒的感染和檢查方法第18頁標(biāo)本處理

要盡可能做到無菌取材；對本身就含有細(xì)菌標(biāo)本，應(yīng)加入抗生素進(jìn)行處理；對不能馬上送檢標(biāo)本，應(yīng)置于含有抗生素50%甘油緩沖鹽水中低溫保留。

病毒的感染和檢查方法第19頁低溫保留

標(biāo)本采集后應(yīng)馬上送試驗(yàn)室檢驗(yàn)，不能馬上檢驗(yàn)標(biāo)本，應(yīng)置于-70℃保留。

病毒的感染和檢查方法第20頁二、病毒分離動物接種

這是最原始病毒培養(yǎng)方法。慣用動物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等，接種路徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等。依據(jù)病毒種類不一樣，選擇敏感動物及適宜部位接種。病毒的感染和檢查方法第21頁雞胚培養(yǎng)

雞胚對各種病毒敏感。依據(jù)病毒種類不一樣，可將標(biāo)本接種于雞胚羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊或絨毛尿囊膜上。病毒的感染和檢查方法第22頁病毒的感染和檢查方法第23頁病毒的感染和檢查方法第24頁細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)最慣用于培養(yǎng)病毒，依據(jù)細(xì)胞起源，染色體特征及傳代次數(shù)又可分為以下類型：原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)，二倍體細(xì)胞株和傳代細(xì)胞系。病毒的感染和檢查方法第25頁病毒的感染和檢查方法第26頁病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖可引發(fā)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。常見CPE有細(xì)胞圓縮、空泡、聚集、拉絲、脫落、融合形成多核巨細(xì)胞、形成包涵體等。病毒的感染和檢查方法第27頁病毒的感染和檢查方法第28頁三、病毒感染血清學(xué)診療

原理

是用已知病毒抗原來檢測病人血清中有沒有對應(yīng)抗體，故須待病人感染后體內(nèi)產(chǎn)生抗體時才能檢出。另外，在采取臨床標(biāo)本及病人血清應(yīng)注意病程，必須采取患者急性期血清與恢復(fù)期血清(雙份血清)進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)。若第2次血清抗體滴度比第1次高出4倍以上時，才有診療意義。病毒的感染和檢查方法第29頁四、病毒感染快速檢驗(yàn)

普通顯微鏡檢驗(yàn)電子顯微鏡檢驗(yàn)免疫標(biāo)識技術(shù)病毒核酸檢測

病毒的感染和檢查方法第30頁五、病毒感染防治標(biāo)準(zhǔn)人工自動免疫

1.滅活疫苗

流行性乙型腦炎疫苗、狂犬病疫苗和流感疫苗。2.減毒活疫苗脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、風(fēng)