血庫(kù)作業(yè)指導(dǎo)書(SOP)

血庫(kù)作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：GGYY-1-XK-01~10第A版兵文兵文生效日期：2012年6月1日開(kāi)正醫(yī)院檢驗(yàn)科目錄序號(hào)主題容代號(hào)頁(yè)號(hào)血庫(kù)作業(yè)指導(dǎo)書局部1交叉配血〔凝聚胺法和鹽水法〕GGYY-3-XK-0112ABO血型鑒定〔正定型和反定型〕GGYY-3-XK-0273Rh血型鑒定GGYY-3-XK-03114ABO正定型和Rh血型鑒定〔微柱凝膠檢測(cè)法〕〔微柱凝膠檢測(cè)法〕GGYY-3-XK-04155冰凍血漿解凍箱GGYY-3-XK-0420修訂頁(yè)序號(hào)文件編號(hào)頁(yè)碼需更改的容更改容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期123456789101112131415161718192021交叉配血操作規(guī)程〔凝聚胺法和鹽水法〕1.目的本規(guī)程規(guī)定了紅細(xì)胞交叉配血操作規(guī)程，以確保紅細(xì)胞交叉配血試驗(yàn)準(zhǔn)確無(wú)誤。2.職責(zé)血型室工作人員按照此規(guī)程進(jìn)展紅細(xì)胞交叉配血操作。3.圍本規(guī)程適用于紅細(xì)胞交叉配血。4.原理交叉配血試驗(yàn)系指檢查受血者與獻(xiàn)血者〔或供血者〕的抗原與抗體成分是否相容，以與是否含不規(guī)那么抗體等，以保證安全輸血。交叉配血分主側(cè)交叉試驗(yàn)即為患者血清與獻(xiàn)血者〔或供血者〕紅細(xì)胞的相容性試驗(yàn)；次側(cè)交叉試驗(yàn)，即獻(xiàn)血者〔或供血者〕血漿與患者紅細(xì)胞的相容性試驗(yàn)。5.材料與設(shè)備5.1抗A〔B型〕、抗B〔A型〕與抗A、B〔O型〕分型血清效價(jià)1：128。5.2患者血樣。5.3獻(xiàn)血者〔或供血者〕血液。5.4設(shè)備器材:滴管，試管架，試管〔10mm×60mm〕，離心機(jī)。5.5試劑:低離子聚凝胺試劑，抗人球蛋白血清。6、檢測(cè)環(huán)境條件:溫度：16-30％濕度：25-75％。7、方法步驟7.1鹽水介質(zhì)配血法〔試管法〕。7.1.1步驟①抽取受血者靜脈血3－4ml，后別離血漿，并將紅細(xì)胞配成2％紅細(xì)胞懸液。②將獻(xiàn)血者〔或供血者〕血樣以同樣方法別離血漿，并配制2％紅細(xì)胞懸液。③取潔凈小試管〔10mm×60mm〕3支，1支標(biāo)明受血者血漿〔PS〕＋獻(xiàn)血者〔或供血者〕細(xì)胞〔DC〕為主側(cè)管，另1支標(biāo)明獻(xiàn)血者〔或供血者〕血漿〔DS〕＋受血者細(xì)胞〔PC〕為次側(cè)管，第3支標(biāo)明受血者血漿〔PS〕＋受血者細(xì)胞〔PC〕為自身對(duì)照管。④按標(biāo)記主側(cè)管加受血者血漿2滴，加獻(xiàn)血者〔或供血者〕2％紅細(xì)胞1滴。次側(cè)管加獻(xiàn)血者〔或供血者〕血漿2滴，加受血者2％紅細(xì)胞懸液1滴。自身對(duì)照管加受血者血漿2滴，加受血者紅細(xì)胞懸液1滴。混勻，以1300g離心15秒。輕輕搖動(dòng)試管，觀察結(jié)果。冬季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反響。7.2聚凝胺配血法7.2.1步驟①取試管3支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清(血漿)2滴，加供血者3－5％紅細(xì)胞懸液1滴，次側(cè)管反之。自身對(duì)照管同鹽水配血法。②各加LIM0.7ml，混合均勻后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均勻。③1300g離心15秒，然后把上清夜倒掉。④輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，那么必須重做。⑤最后參加Resuspending2滴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如果在30－60秒凝集散開(kāi)，代表是由Polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開(kāi)，那么為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反響，配血結(jié)果不相合。如反響可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。7.3抗人球蛋白配血法7.3.1步驟①取試管3支，分別標(biāo)明主側(cè)、次側(cè)和自身對(duì)照，主側(cè)管加受血者血清2滴和獻(xiàn)血者〔或供血者〕3％紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，次側(cè)管加獻(xiàn)血者〔或供血者〕血清2滴和受血者3％紅細(xì)胞懸液1滴，自身對(duì)照管同鹽水配血法。②混合置37℃水浴致敏30分鐘，取出后用生理鹽水洗滌3次，傾去上清液。③加最適稀釋度抗人球蛋白血清2滴，1300g離心15秒，觀察結(jié)8.結(jié)果分析與報(bào)告8.1以上三種配血方法主側(cè)、次側(cè)配血管和自身對(duì)照管均無(wú)凝集，均無(wú)溶血，表示無(wú)輸血禁忌可以輸注。8.2以上三種配血方法主側(cè)和自身對(duì)照管均無(wú)凝集、均無(wú)溶血，而次側(cè)管有一種或三種方法均凝集或均溶血經(jīng)三洗后可少量輸注。8.3以上三種配血方法主側(cè)、次側(cè)配血管均凝集或均溶血，而自身對(duì)照均無(wú)凝集、均無(wú)溶血，表示有輸血禁忌不可以輸注。8.4以上三種配血方法主側(cè)管均凝集或均溶血，而次側(cè)管和自身對(duì)照均無(wú)凝集均無(wú)溶血，表示有輸血禁忌不可以輸注。9.考前須知9.1送檢血液標(biāo)本的標(biāo)識(shí)必須與送檢單一致，要認(rèn)真核對(duì)。9.2操作過(guò)程中必須認(rèn)真細(xì)心，規(guī)操作。9.3交叉配血試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不配合時(shí)，首先要考慮受血者和獻(xiàn)血者〔或供血者〕的ABO定型是否錯(cuò)誤，必要時(shí)進(jìn)展Rh血型鑒定與抗體篩檢。其次應(yīng)注意有無(wú)特異性同種抗體，或者病人的血清在室溫、37℃9.4受血者和獻(xiàn)血者〔或供血者〕的樣本，在每次輸血之后，在2℃～6存7天。如果病人在輸血中發(fā)生不良反響時(shí)，或在輸血后數(shù)天發(fā)生遲發(fā)性、溶血性反響時(shí)，保存病人和獻(xiàn)血者〔或供血者〕的血樣就有可能要重做或追加試驗(yàn)，必要時(shí)從發(fā)生溶血性輸血反響的病人重新采取血樣與輸血前病人血樣同時(shí)檢查比擬。9.5聚凝胺法配血時(shí)應(yīng)注意以下問(wèn)題9.5.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。9.5.2假設(shè)病人血清(血漿)含肝素，如洗腎患者，須多加4－6滴Ploybrene溶液以中和肝素。9.5.3試劑使用前請(qǐng)回復(fù)室溫再行操作。9.5.4加做輔助性抗人球蛋白試驗(yàn)，目的是增加檢測(cè)抗K的敏感性，對(duì)檢測(cè)其他紅細(xì)胞抗體無(wú)幫助。9.5.5在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果出現(xiàn)。假設(shè)有此懷疑，建議在最后滴入Resuspending時(shí)，將試管立即置于37℃水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合，并在30秒觀察結(jié)果。10.支持性文件《中國(guó)輸血技術(shù)操作規(guī)程》－血站局部1997版。ABO血型鑒定1.原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú)A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型與O型四種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對(duì)A抗原和B抗原的特異性抗體。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用的抗A、抗B試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合時(shí)，與抗A試劑發(fā)生凝集者即為A型，與抗B分型試劑發(fā)生凝集者即為B型，與抗A、抗B試劑均發(fā)生凝集者即為AB型，與抗A、抗B試劑均不凝集者即為O型。所謂反定型，是用A細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗－A或/和抗－B。2.標(biāo)本采集2.1標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2.2標(biāo)本要求：2.2.1抗凝劑：如用抗凝血，多主用EDTAK2〔㎎/dL〕抗凝。2.2.2用手指末梢血作血型檢測(cè)時(shí)，最少樣品量為100ul，如手指有凍瘡，那么主采耳垂血。3.標(biāo)本儲(chǔ)存：2小時(shí)完成實(shí)驗(yàn)，室溫放置下不超過(guò)8小時(shí)，4℃保存不超過(guò)48小時(shí)。4.標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本不能作測(cè)定6.試劑6.1試劑名稱：ABO血型檢測(cè)試劑6.2試劑生產(chǎn)廠家：華欣藥業(yè)生物工程6.3試劑組成試劑1：抗A分型試劑〔藍(lán)色〕，效價(jià)1：128，2℃-8℃試劑2：抗B分型試劑〔黃色〕，效價(jià)1：128，2℃-8℃試劑3：5％A、B與O型紅細(xì)胞鹽水懸液，自制。配制方法：分別采取A、B、O三種血型的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，以壓積紅細(xì)胞配成不同濃度的紅細(xì)胞懸液。紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度〔％〕壓積紅細(xì)胞〔滴〕鹽水〔滴〕25102011112ml〔40〕0.8ml〔16〕0.4ml〔8〕0.2ml〔4〕為了防止紅細(xì)胞懸液敏感性不一致，可隨機(jī)采取3個(gè)或以上的健康成人血液，按A、B、O型分別混合后，按上法制備。7.操作步驟7.1玻片法7.1.1取清潔玻片1〔或白瓷板1塊〕，用肥皂水刷洗后晾干，用蠟筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片〔或瓷盤〕上A、B處。分別取等體積待檢血樣〔5％-10％紅細(xì)胞懸液或全血〕于抗A試劑和抗B試劑。7.1.2另取潔凈玻片1〔或白瓷板1塊〕，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。7.1.3用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調(diào)勻，同時(shí)不停的搖動(dòng)玻片〔或瓷盤〕并觀察血型凝集〔或溶血〕反響。如以玻片做試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。7.2試管法7.2.1取潔凈小試管〔徑10mm×60mm〕2支，分別標(biāo)上A、B字樣，用滴管分別向A管滴加抗A分型試劑1滴。向B管滴加抗B分型試劑1滴。向A、B管各滴加待檢血樣的5％紅細(xì)胞懸液各1滴，混合。7.2.2另取潔凈小試管〔徑10mm×60mm〕3支，分別標(biāo)明A、B和O細(xì)胞。用滴管分別參加受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管參加A、B和O型5％紅細(xì)胞懸液1滴，混合。7.2.3搖勻后以1000轉(zhuǎn)/分的速度離心1分鐘判定結(jié)果。將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無(wú)凝集〔或溶血〕現(xiàn)象。如肉眼不見(jiàn)凝集，應(yīng)將反響物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。8.結(jié)果判斷8.1觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。8.2凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：4＋＝紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3＋＝紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2＋＝紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見(jiàn)到游離紅細(xì)胞。1＋＝肉眼可見(jiàn)大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞?！?鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF＝混合凝集外觀是指鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。－表示陰性，鏡下未見(jiàn)凝集，紅細(xì)胞均勻分布。8.3按下表報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型ABO血型正反定型結(jié)果分型血清＋受檢者紅細(xì)胞受檢者受檢者血清＋試劑紅細(xì)胞抗－A＋——＋抗－B—＋—＋抗－A＋B＋＋—＋血型ABOABA細(xì)胞—＋＋—B細(xì)胞＋—＋—O細(xì)胞————9.臨床意義：輸血、器官移植與親子鑒定10.操作性能：快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好。11超出圍結(jié)果處理11.1紅細(xì)胞自凝：冷凝集系增高是最為常見(jiàn)原因。應(yīng)用37℃-40℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞可去除紅細(xì)胞外表附著的導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集的冷集素。11.2正反定型結(jié)果不一致原因11.2.1分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗—A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。11.2.2紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例那么不適當(dāng)，使反響不明顯，誤判為陰性反響。11.2.3受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少〔如亞型〕或抗原性減弱〔見(jiàn)于白血病或惡性腫瘤〕以與B類或cisAB等。11.2.4受檢者血清中蛋白紊亂〔高球蛋白血癥〕，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過(guò)高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。11.2.5受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗—A和抗—B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。11.2.6各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，局部溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。11.2.7由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.2.8血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。11.2.9老年人血清中抗體水平大幅度下降。11.3正反定型結(jié)果不一致的解決方法：11.3.1另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。11.3.2將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成2％鹽水細(xì)胞懸液，用抗—A、抗—B、抗—AI，抗—A＋B與抗—H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。11.3.3對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。11.3.4用A1、A2、B、O紅細(xì)胞從自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗—I，用O型〔或ABO相合的〕臍血紅細(xì)胞檢查。11.3.5如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)將細(xì)胞與血清試驗(yàn)至少在室溫和4℃放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。11.3.6如疑為A抗原或B抗原減弱，那么可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗—B血清作吸收與放散試驗(yàn)以與受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80％HAB分泌型的人有用。11.3.7如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混合。往往可使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。11.3.8如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時(shí)，可用以下方法進(jìn)展鑒別：11.3.8.1觀察細(xì)胞與抗—A與抗B的凝集強(qiáng)度，與抗A的反響要比抗—B的反響強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。11.3.8.2用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗—B不凝集自身紅細(xì)胞上的類B抗原。11.3.8.3檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物質(zhì)而無(wú)B物質(zhì)。11.3.8.4核對(duì)患者的診斷，類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰件桿菌感染有關(guān)。12.方法局限性12.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后，應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。12.2試管、滴管和玻片必須清潔枯燥，防止溶血。12.3操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。12.4按理IgM抗—A和抗—B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反響溫度以4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般仍在室溫〔20℃-24℃〕進(jìn)展試驗(yàn)，37℃12.5離心時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，速度不宜過(guò)快或過(guò)慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。12.6觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以與緡錢狀排列的區(qū)別。12.7判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，防止筆誤。12.8試劑一旦發(fā)現(xiàn)渾濁不得使用。12.9制紅細(xì)胞懸液時(shí)防止自凝現(xiàn)象。13.參考文獻(xiàn)中國(guó)人民國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程〔第二版〕.1997，89-92Rh〔D〕血型鑒定1、實(shí)驗(yàn)原理紅細(xì)胞與抗D抗體發(fā)生凝集反響說(shuō)明該細(xì)胞有D抗原，反之，無(wú)凝集現(xiàn)象說(shuō)明試驗(yàn)的紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度的D抗原。2、標(biāo)本收集和制備無(wú)菌操作收集血液標(biāo)本,收集后盡可能立即進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。如果不能立即實(shí)驗(yàn),應(yīng)將樣品貯存于2-8C。收集在ACD、CPD、CPD－2A液中的血液標(biāo)本,不超過(guò)21天仍可進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，但是加EDTA、肝素和凝集的血液標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在2天進(jìn)展。3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以與其他所需物品：Rh(IgM)血型定型試劑〔單克隆抗體〕：血液生物醫(yī)藥XX公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S20060018,包裝、規(guī)格：每盒裝有1支試劑，10ml/支，儲(chǔ)存要求：存放2—8℃4、操作步驟4.1玻片法：4.1.1干凈玻片上加1滴抗D。4.1.2再參加1滴40%-50%的被檢紅細(xì)胞懸液。該紅細(xì)胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞。4.1.3在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果。不要將試劑的枯燥與凝集相混淆。4.1.4如果是陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。4.2鹽水試管法4.2.1加一滴抗D試劑于預(yù)先標(biāo)記好的試管中4.2.2再加1滴約3%—5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹?。4.2.3離心，速度和時(shí)間可選擇以下二種之一：轉(zhuǎn)速1000rpm，時(shí)間一分鐘1分鐘或3400rpm，時(shí)間15秒。4.2.4檢查是否溶血〔溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染〕，然后輕輕搖晃，是細(xì)胞再懸浮起來(lái)。4.2.5觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時(shí)可借助顯微鏡。4.2.6假設(shè)是陰性結(jié)果，需在37℃孵育15分鐘-30分鐘，然后再離心觀察結(jié)果。結(jié)果假設(shè)呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)是否是弱D4.3微量板法〔U型板〕4.3.1加一滴抗D試劑于U型底的微孔中。4.3.2再在微孔中一滴約3-5%的被檢紅細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液需事先制備于生理鹽水中。4.3.3用機(jī)械的方法將U型板混勻。4.3.4用板式離心機(jī)離心：2000rpm,時(shí)間30秒。不同的離心機(jī)，不同的微量板所需要的離心條件有所區(qū)別，正確實(shí)驗(yàn)的結(jié)果需要適當(dāng)?shù)碾x心，使反響板產(chǎn)生清晰的細(xì)胞扣與透亮的上清液。4.3.5檢測(cè)溶血情況〔溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染〕。4.3.6結(jié)果判斷：用機(jī)械震蕩U型板，再懸浮細(xì)胞，根據(jù)懸浮情況來(lái)判斷凝集。陽(yáng)性反響，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，而陰性反響在微孔中會(huì)出現(xiàn)均勻細(xì)胞懸液。4.3.7可用肉眼和自動(dòng)化判讀結(jié)果。4.3.8如果呈陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。5、參考值圍陽(yáng)性反響：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為RhD陽(yáng)性。陰性反響：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為RhD陰性。6、產(chǎn)品性能指標(biāo)抗D〔IgM〕效價(jià)大于等于1：64〔ccDeeO型〕7、方法的局限性本實(shí)驗(yàn)不能凝集CategoryDVI細(xì)胞，對(duì)于陰性和弱陽(yáng)性結(jié)果，按有關(guān)安全輸血規(guī)進(jìn)展確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展確認(rèn)。8、考前須知8.1試劑含有0.1%W/V疊氮鈉，如果攝入會(huì)中毒。8.2試劑如出現(xiàn)混濁那么不能使用，假設(shè)開(kāi)瓶使用時(shí)間較長(zhǎng)后，最好用RhD陰性、RhD陽(yáng)性紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效，而造成錯(cuò)誤。與時(shí)貼上時(shí)間標(biāo)簽，在效期使用。8.3由于人紅細(xì)胞的D抗原往往表現(xiàn)較弱，故必要時(shí)進(jìn)展顯微鏡鏡檢，以免錯(cuò)判結(jié)果，特別是陰性結(jié)果時(shí)。8.4Rh血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因Rh抗原、抗體集反響凝塊比擬脆弱，觀察反響結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕側(cè)動(dòng)試管，不可用力振搖。8.5對(duì)于結(jié)果可疑的，必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗(yàn)。9、操作性能概要9.1假陽(yáng)性反響原因分析：9.1.1試劑中存在具有其他特異性的抗體〔指不完全抗D抗體〕，因此，對(duì)疑難抗原定型時(shí)，建議用不同來(lái)源的抗血清同時(shí)做兩份實(shí)驗(yàn)。因?yàn)槭褂脙煞萏禺愋砸粯拥目寡宓玫讲灰恢碌慕Y(jié)果時(shí)，就會(huì)使檢驗(yàn)人員意識(shí)到有進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的必要。9.1.2多凝集紅細(xì)胞與任何人血清會(huì)發(fā)生凝集。9.1.3當(dāng)用未經(jīng)洗滌的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時(shí)，試樣中的自身凝集和異常蛋白質(zhì)可能引起假陽(yáng)性結(jié)果。9.14試劑瓶可能被細(xì)菌、外來(lái)物質(zhì)或其他抗血清所污染。9.2假陰性反響原因分析：9.2.1搞錯(cuò)抗血清每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)細(xì)心核對(duì)抗血清瓶子上的標(biāo)簽。9.2.2試管中漏假抗血清在參加細(xì)胞懸液之前，必須檢查試管中有無(wú)抗血清。9.2.3某種特定的抗血清不能和其他相應(yīng)抗原的變異型起反響。9.2.4如某種抗血清含有主要對(duì)抗Rh復(fù)合抗原的抗體，那么可能與獨(dú)立的基因產(chǎn)物的個(gè)別抗原不發(fā)生反響。這在抗C血清最為常見(jiàn)，因?yàn)楹芏嗫笴血清含有反響性更強(qiáng)的抗Ce成分。9.2.5未遵照抗血清使用說(shuō)明書做試驗(yàn)，如抗血清和細(xì)胞的比例以與溫育的溫度和時(shí)間不正確。9.2.6抗血清保存不妥，試劑中的免疫球蛋白變質(zhì)。10、參考文獻(xiàn)：全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程〔第3版〕ABO正定型和Rh血型鑒定〔微柱凝膠檢測(cè)法〕1.原理ABO血型系統(tǒng)的紅細(xì)胞遺傳表型是根據(jù)每個(gè)人紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原以與血清中相應(yīng)的抗體來(lái)決定的，將人分為四種血型：A型、B型、AB型和O型。紅細(xì)胞上有A抗原的A型血清中有抗B，紅細(xì)胞上有B抗原的B型血清中有抗A，紅細(xì)胞上有A和B抗原的AB型血清中無(wú)抗A和抗B，紅細(xì)胞上無(wú)A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。Rh血型系統(tǒng)的鑒定是根據(jù)是否存在D抗原來(lái)決定的。微柱凝膠檢測(cè)法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反響相結(jié)合的產(chǎn)物，通過(guò)調(diào)節(jié)凝膠〔葡聚糖〕的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細(xì)胞通過(guò)，從而達(dá)到別離游離紅細(xì)胞和凝集紅細(xì)胞的目的。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，說(shuō)明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，說(shuō)明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。2.標(biāo)本采集2.1標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血2.2標(biāo)本要求：2.2.1抗凝劑：EDTA〔濃度15g/L〕或枸櫞酸鈉〔濃度32g/L〕抗凝2.2.2采血量：至少不低于5ml的靜脈血〔參加試管后注意于抗凝劑混勻〕2.2.3離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于3500轉(zhuǎn)/分，時(shí)間必須大于15分鐘3.標(biāo)本儲(chǔ)存：待測(cè)標(biāo)本在2-8℃下的保存時(shí)間為48小時(shí)4.標(biāo)本運(yùn)輸：室溫保存5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：不可使用溶血或受污染，或者含有凝塊的樣品。6.試劑6.1試劑名稱：DianaGelConfirm凝膠卡、DianaSol1號(hào)試劑6.2試劑生產(chǎn)廠家：DiagnosticGrifols,S.A.〔西班牙〕6.3試劑說(shuō)明：每DianaGelConfirm凝膠卡由8個(gè)微孔管組成〔A-B-D-Ctrl-A-B-D-Ctrl〕，微孔管含緩沖液浸泡的微粒篩，加上不同的試劑，試劑為：A：?jiǎn)慰寺】梗瑼〔克隆16243G2+16247E6〕，B：?jiǎn)慰寺】梗瑽〔克隆9621A7.操作步驟7.1將樣品、DianaSol1號(hào)試劑和DianaGelConfirm凝膠卡達(dá)到室溫；7.2將新DianaGelConfirm凝膠卡離心；7.3紅細(xì)胞懸液的制備：用Diana1號(hào)試劑來(lái)配制2-3％的血紅細(xì)胞稀釋液〔25μl壓積極紅細(xì)胞參加1ml的Diana1號(hào)試劑中〕；7.4在相應(yīng)的微孔〔1-6微管〕中分別參加25μl的2-3％的紅細(xì)胞懸液；7.5在DianaFuge離心機(jī)中離心9min；7.6判讀結(jié)果。8.結(jié)果判斷模式9.臨床意義：ABO、Rh血型鑒定不合出現(xiàn)溶血性輸血反響。10.操作性能10.1為國(guó)際安全輸血檢查的推薦方法；10.2操作簡(jiǎn)便方便；10.3可節(jié)省樣品紅細(xì)胞和血漿；10.4靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好；10.5客觀性好，防止主觀判讀結(jié)果的影響；10.6檢測(cè)結(jié)果可較長(zhǎng)時(shí)間保存；10.7操作者更少接觸血液標(biāo)本。11.超出圍結(jié)果處理11.1紅細(xì)胞自凝：冷凝集素增高是最為常見(jiàn)的原因。用37-40℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞可去除紅細(xì)胞外表附著的導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集的冷凝集素，可獲得可靠的正定型。11.2正反定型結(jié)果不一致原因11.2.1自身免疫性溶血性貧血引起的紅細(xì)胞被自身抗體包被；11.2.2紅細(xì)胞A或B抗原的弱化；11.2.3紅細(xì)胞懸液濃度過(guò)濃或過(guò)淡；11.2.4紅細(xì)胞抗原位點(diǎn)過(guò)少或抗原性減弱；11.2.5病人感染細(xì)菌或病毒后，細(xì)菌或病毒產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血漿中都含有抗T抗體，因此可于正常人血漿中產(chǎn)生凝集反響，正定型實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性；11.2.6嚴(yán)重感染的病人，其血漿中白細(xì)胞過(guò)多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細(xì)胞的沉降，引起假陽(yáng)性。12方法局限性：12.1變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會(huì)帶來(lái)錯(cuò)誤的陰或陽(yáng)性結(jié)果；12.2因?yàn)閮?chǔ)運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問(wèn)題，如果無(wú)法消除，請(qǐng)棄之不用；12.3如果發(fā)現(xiàn)有管膠量不足或干裂，請(qǐng)不要用之；12.4如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度不符，可能會(huì)引起錯(cuò)誤結(jié)果；12.5使用非原廠的稀釋液來(lái)配制紅血球懸液可能會(huì)導(dǎo)致不良結(jié)果；12.6質(zhì)控結(jié)果必須似陰性，如果是陽(yáng)性，檢測(cè)無(wú)效，用生理鹽水清洗紅細(xì)胞并重新配制懸液重新檢測(cè)，如果得到陰性質(zhì)控結(jié)果，那么可以判讀結(jié)果；12.7為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實(shí)驗(yàn)在室溫25℃中進(jìn)展。不規(guī)那么抗體篩選1、原理紅細(xì)胞血型抗體分子的物理特性與血清學(xué)的反響性之間有著直接的關(guān)系?？煞譃镮gM和IgG球蛋白抗體IgM為天然抗體，在鹽水介質(zhì)中能直接相應(yīng)的紅細(xì)胞，使之發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反響。IgG為免疫抗體，常經(jīng)妊娠或輸血等免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏抗原的紅細(xì)胞，且必須通過(guò)特定的方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝膠〔或玻璃〕等方法。2、方法待檢血清需要使用多種方法進(jìn)展鑒定。一般使用鹽水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝膠法檢測(cè)抗體。在檢測(cè)到弱抗體時(shí)，可以利用適當(dāng)增加血清的細(xì)胞比例、適當(dāng)增加孵育時(shí)間、參加低離子強(qiáng)度溶液增效劑或PEG聚氧乙烯乙二醇等方法增加反響的敏感性。不同的抗體在不同的方法和條件下可以有不同的表現(xiàn)。這些特性為判定抗體特異性提供了參考信息。3、試劑3.1、紅細(xì)胞：選取三個(gè)以上的O型紅細(xì)胞組成一組篩選細(xì)胞〔抗原〕。3.2、譜細(xì)胞：選取八個(gè)以上的O型紅細(xì)胞組成一組譜細(xì)胞〔抗原〕。4、操作4.1、不規(guī)那么抗體的篩選：用篩選細(xì)胞〔1、2、3號(hào)〕，同患者血清在三種介質(zhì)中〔鹽水、凝聚胺、看球蛋白〕反響，需做自身細(xì)胞對(duì)照。4.2、不規(guī)那么抗體的鑒定：對(duì)篩選陽(yáng)性的患者應(yīng)檢查其抗體的特異性。用一組譜細(xì)胞〔1-11〕同患者血清在三種介質(zhì)中〔鹽