人乳頭瘤病毒

人乳頭瘤病毒第1頁/共30頁人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型檢測第2頁/共30頁人乳頭瘤病毒（HPV）HPV(人類乳頭瘤病毒)是以人類為唯一宿主的一種DNA病毒，現(xiàn)在已經(jīng)明確，HPV與宮頸癌的發(fā)生高度相關(guān)。醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)表明，60％～70％的女性感染過HPV病毒，99.8％的宮頸癌患者中可以檢測到HPV，而HPV陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌。除此之外，98％以上的宮頸疾病患者體內(nèi)也存在HPV。第3頁/共30頁

目前有100余種型別HPV,約35種型別與生殖道感染有關(guān)，大約20種型別與癌癥相關(guān)。與宮頸癌相關(guān)的高危型HPV有13種：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。與宮頸癌相關(guān)的低危型別有：6，11，40，42，43，44。第4頁/共30頁HPV基因分型檢測的意義?宮頸病變及宮頸癌的篩查，通過分型檢測對(duì)患者個(gè)體化評(píng)估，預(yù)測宮頸病變發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)度,決定篩查的間隔、治療方案的制定。?未明確診斷意義的非典型鱗狀細(xì)胞和腺細(xì)胞（AS-CUS/AGUS）和宮頸上皮內(nèi)低度病變（LSIL）的分流，提高診斷的可信度，降低漏疹風(fēng)險(xiǎn)。?宮頸病變治療后的追綜和隨訪第5頁/共30頁HPV陽性還可提示生殖器贅生物為尖銳濕疣的可能性。HPV感染與宮頸炎的發(fā)生有密切關(guān)系。HPV病毒也可引起宮頸糜爛。第6頁/共30頁宮頸癌篩查方案1.基本篩查方案醋酸或碘染色后肉眼觀察陽性陰性陰道鏡活檢+病理檢查相應(yīng)治療定期隨訪第7頁/共30頁2.一般篩查方案HPV檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC相應(yīng)治療（-）（+）第8頁/共30頁3.最佳篩查方案HPV檢測+液基細(xì)胞學(xué)檢查HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H隨訪（次/3-5年隨訪（次/年陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC相應(yīng)治療（+）（-）第9頁/共30頁HPV基因分型檢測的方法我科目前采用分子生物學(xué)前沿技術(shù)—多重PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）先進(jìn)技術(shù)，通過對(duì)HPV-DNA基因分型，可快速、準(zhǔn)確地檢測常見的23種HPV亞型，包括5種低危型（HPV6，11，42，43，44）和18種高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆蓋了現(xiàn)有已知的與人生殖道感染有關(guān)的絕大部分HPV亞型。第10頁/共30頁HPV基因分型芯片技術(shù)特點(diǎn)HPV基因芯片分型檢測，利用L區(qū)相對(duì)保守區(qū)的引物對(duì)待測樣品中可能HPV亞型進(jìn)行廣譜擴(kuò)增，再將產(chǎn)物與固定在膜芯片上的亞型特異性探針進(jìn)行雜交，顯色并判讀結(jié)果。此技術(shù)靈敏、準(zhǔn)確、高效、快速，并確定具體亞型。第11頁/共30頁GC-HPV檢測實(shí)驗(yàn)流程第12頁/共30頁HPV檢測目標(biāo)物：宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、組織切片、活體組織第13頁/共30頁陰道鏡下“活檢”組織的采集

通過陰道鏡觀察宮頸表面血管的病變，并用宮頸活檢鉗或?qū)m頸管刮勺從宮頸上提取可疑組織，裝入有保存液的洗脫管中，旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí)

第14頁/共30頁疣體樣本的采集用棉拭子在疣體表面剮蹭4-6遍，也可以把通過手術(shù)切除下來的疣體直接作為檢測樣本。第15頁/共30頁專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器第16頁/共30頁步驟1.標(biāo)本采集擴(kuò)陰器暴露宮頸口，用棉拭子將分泌物擦去將宮頸刷伸入宮頸口，單向輕柔轉(zhuǎn)動(dòng)4-5周將其放入有保存液的洗脫管中旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí)將宮頸刷折斷，刷頭留在管中第17頁/共30頁步驟二：提取HPVDNA13000rpm10分鐘，棄上清

將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到1.5mL微量離心管中加50L裂解液充分懸浮沉淀100℃加熱10分鐘

13000rpm離心10分鐘，保留上清待用第18頁/共30頁步驟三：PCR擴(kuò)增50℃ 15min95℃ 10min 94℃ 30s42℃ 90s40cycles72℃ 30s72℃ 5min

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51℃洗脫15min步驟四：雜交與洗脫

設(shè)定雜交儀的溫度，無需看守，于51℃雜交1小時(shí)

PCR產(chǎn)物加入雜交緩沖液中,沸水浴變性10min第20頁/共30頁步驟五顯色與結(jié)果判讀POD孵育POD洗滌顯色前準(zhǔn)備配制顯色液,顯色第21頁/共30頁檢測結(jié)果：膜條顯色直接提示感染的HPV亞型，包括高危及低危亞型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC第22頁/共30頁適用人群：三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪尖銳濕疣患者咽喉部HPV感染導(dǎo)致的疣體增生的嬰幼兒第23頁/共30頁受檢前須知：月經(jīng)來潮后10-18天為最佳檢查時(shí)間檢查前三天內(nèi)不要用避孕藥膏等陰道內(nèi)用藥物及陰道沖洗檢查前24小時(shí)最好不要有性生活第24頁/共30頁HPV檢驗(yàn)報(bào)告單將分為高危及低危兩組報(bào)告結(jié)果，并注明兩組中具體的陽性亞型，未注明的表示為陰性。例：HPV-DNA分型報(bào)告單高危組陽性（+）16，33

低危組陰性（-）第25頁/共30頁結(jié)果分析HPV-DNA陽性：

20％－30％的HPV病毒感染會(huì)引起疾病，如果HPV-DNA陽性，并伴隨宮頸病變，應(yīng)采取進(jìn)一步醫(yī)學(xué)檢查，以明確病變性質(zhì)。60％－70％的人僅是HPV陽性而未見宮頸病變，提示雖然發(fā)生HPV感染但并沒有導(dǎo)致宮頸病變或?qū)m頸癌，只需每年進(jìn)行一次HPV病毒篩查及相關(guān)其它檢查即可。HPV-DNA陰性：如果30歲以上的女性HPV檢測結(jié)果為陰性，同時(shí)細(xì)胞學(xué)檢查提示沒有發(fā)生任何病變，3－5年內(nèi)都無需再做類似檢查。第26頁/共30頁HPV檢測后的處理HPV基因分型檢測陰性常規(guī)篩查陽性低危高危無癥狀一年后復(fù)查疣體組織相應(yīng)治療（冷凍、激光）液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）正常一年后復(fù)查HPV和TCT≤AS-CUS一年后復(fù)查HPV和TCT或陰道鏡檢查≥ASC-H陰道鏡活檢/多點(diǎn)活檢+ECC6個(gè)月后復(fù)查HPV和TCT（-）（+）相應(yīng)治療第27頁/共30頁標(biāo)本收集時(shí)間及結(jié)果報(bào)告標(biāo)本可于每天規(guī)定工作時(shí)間（8：00AM~5：00PM）送檢驗(yàn)科，未及時(shí)送檢的可于4℃冰箱保存。在臨床送檢的標(biāo)本量滿足每天檢測前提下，當(dāng)日8：30后送檢的標(biāo)本，次日下午發(fā)出報(bào)告，若標(biāo)本量較少，則集中在每周三、五進(jìn)行檢測。第28頁/共30頁HPV感染后的教育信息HPV檢測陽性只說明一種病毒感染，而不是疾病