Canine CV的基因組序列及其致病性分析,病毒學(xué)論文

CanineCV的基因組序列及其致病性分析,病毒學(xué)論文2020年，Li等[4]通過PCR對168只腹瀉犬和204只健康犬的糞便，以及409份患血小板中性粒細(xì)胞減少癥、不明原因發(fā)熱和曾被蜱蟲叮咬過的犬血清樣本進(jìn)行了CanineCV檢測，其陽性檢測率分別為11.3%〔19/168〕、6.9%〔14/204〕和3.3%〔19/409〕.CanineCV陽性的腹瀉樣本中，有68%〔13/19〕與其他病原體共感染。通過ISH和透射電子顯微技術(shù)，在4只患有血管損傷及組織細(xì)胞炎癥的犬淋逢迎和脾臟內(nèi)檢測到了CanineCV.2020年Decaro等[3]報(bào)道在意大利一爆發(fā)過急性腸炎的犬繁衍舍的死亡幼犬體內(nèi)檢測到了CanineCV〔Bari/411-13〕,對其基因組進(jìn)行序列分析表示清楚，該毒株與美國報(bào)道的毒株有高度遺傳類似性，且經(jīng)調(diào)查證明，在2018年CanineCV就已經(jīng)出現(xiàn)。Han-Siang等[13]建立了特異性的SYBRGreen-basedreal-time-PCR檢測方式方法，調(diào)查統(tǒng)計(jì)了臺灣地區(qū)CanineCV的流行率。對2020-2020年收集的207份腹瀉糞便和160份健康犬糞便進(jìn)行了檢測，CanineCV的陽性率分別為28%〔58/207〕和11.9%〔19/160〕.Thaiwong等[14]利用qPCR技術(shù)在出血性腹瀉和急性死亡的患犬體內(nèi)檢測到了高滴度的犬細(xì)小病毒〔Canineparvovirus,CPV-2〕〔Ct15〕和CanineCV〔Ct13〕.Herbst等[15]利用電子顯微鏡觀察和PCR技術(shù)回首性分析了2000年以來收集的417份犬糞便樣本。電鏡下，在兩份糞便樣本〔V2177/00;V3374/00〕中觀察到了大小形態(tài)與CV一致的病毒顆粒。通過PCR擴(kuò)增，樣本V2177/00檢測到了PCV2a,這是初次在犬體內(nèi)檢測到PCV2的報(bào)道。在我們國家CanineCV檢測的報(bào)道中，2021年孫文超等[16]采用重疊PCR對中國廣西20份家犬血清進(jìn)行了檢測，并成功獲得了一株CanineCV全基因組序列，命名為JZ98/2020〔GenBank登錄號：KT946839〕.該序列大小為2063nt,與其他已報(bào)道的毒株基因組大小一致，但與歐美毒株處于不同進(jìn)化分支。2CanineCV的致病性研究表示清楚，CanineCV不僅存在于犬的腸道內(nèi)，還存在于肝臟、脾臟、淋巴等組織內(nèi)。且該病毒與犬壞死性脈管炎和出血性淋逢迎炎相關(guān)。CanineCV與PCV2感染在臨床異常感覺和狀態(tài)和病理變化上特別類似，主要損害淋巴細(xì)胞，在淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)可構(gòu)成包容體[4].Han-Siang等[13]調(diào)查臺灣地區(qū)CanineCV流行率的同時(shí)，探尋求索了CanineCV與犬腹瀉之間的相關(guān)性，經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示CanineCV與犬腹瀉有明顯的相關(guān)性〔P=0.00028〕.Li等對4只CanineCV陽性的死亡犬進(jìn)行了尸檢，分析其組織病理特征和病毒在組織中的分布。4只犬均有壞死性血管炎和多灶性出血，華而不實(shí)3只犬有淋逢迎炎和肉芽腫[4].總體特征與豬感染PCV2的臨床異常感覺和狀態(tài)類似，尤其與PCV2引起的豬皮炎與腎病綜合征高度類似。在CanineCV陽性犬的淋巴組織中的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中始終可檢測到病毒DNA,這與PCV2在豬淋巴細(xì)胞中的分布情況高度一致。因而，該研究以為CanineCV可能是犬不明原因的脈管炎的致病因素，CanineCV致病性可能與PCV2類似，該病毒可能損害犬免疫系統(tǒng)，對犬產(chǎn)生免疫抑制。該研究同時(shí)證明，CanineCV在被發(fā)現(xiàn)前，在犬種群中至少已存在了5年之久。2020年意大利某臘腸犬舍爆發(fā)急性腸炎，1只5-6月齡、已完成免疫的幼犬死亡。在該犬體內(nèi)檢測到了CanineCV,且并未檢測到其他病原體。尸檢結(jié)果顯示該犬患有肝炎、出血性腸炎和腸系膜淋逢迎充血等[3].Thaiwong等[14]對蝴蝶犬繁衍場在2020年3月和2020年2月爆發(fā)的2次嚴(yán)重出血性腹瀉進(jìn)行了相關(guān)調(diào)查。通過PCR檢測，發(fā)現(xiàn)患犬體內(nèi)存在犬細(xì)小病毒和CanineCV的雙重感染。通過IHC和ISH技術(shù)分析病毒在患犬體內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn)小腸隱窩存在大量CPV-2,這是犬細(xì)小病毒病的特征，也是導(dǎo)致嘔吐和出血性腹瀉的主要原因。但在淋巴細(xì)胞內(nèi)僅檢測到了少量CPV-2,而在淋巴壞死灶和肉芽腫病灶內(nèi)檢測到大量CanineCV.因而，研究者提出假講，CPV-2感染導(dǎo)致腸隱窩上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞壞死，之后，上皮細(xì)胞再生和淋巴細(xì)胞增殖，為CanineCV大量復(fù)制提供了條件，最終加重了病情。除此之外，研究發(fā)現(xiàn)，CanineCV的病毒脫落形式與PCV2一致，可能在自然感染病毒很長一段時(shí)間以后，仍能夠高濃度存在于血清、糞便及鼻腔內(nèi)。Anderson等[12]通過RealtimeTaqManPCR技術(shù)對55例患AHDS犬、66例健康犬〔已接受常規(guī)免疫〕和54例感染CPV犬的糞便進(jìn)行了CanineCV檢測。其陽性率分別為3.64%〔2/55〕、4.55%〔3/66〕和12.96%〔7/54〕.AHDS組與健康組的陽性率沒有顯著差異，且在美國的另外一項(xiàng)研究中，健康犬中CanineCV陽性率為6.9%,因而推斷CanineCV可能沒有致病性，不是犬急性出血性腹瀉的主要病原體。在CPV陽性組中，CanineCV共感染的犬死亡率明顯高于CanineCV陰性的犬〔死亡率分別為42.86%和8.51%〕,CanineCV致病性可能在腸道受損后〔CPV造成腸黏膜損傷〕出現(xiàn)了變化，CanineCV與其他病原體共感染時(shí)會加重疾病。最新報(bào)道證明，CanineCV在腸道疾病中對其他腸道病毒起協(xié)同作用。Dowgier等對2020-2021年的病例進(jìn)行了對照研究，以調(diào)查犬單獨(dú)感染CanineCV或與CPV、犬冠狀病毒〔Caninecoronavirus,CCoV〕及犬瘟熱病毒〔Caninedistempervirus,CDV〕共同感染與犬腸炎之間的關(guān)系。該研究中病例組為219只急性胃腸炎患犬，對照組為67只無腸道疾病的犬。該試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析得出，CanineCV單獨(dú)感染與急性胃腸炎之間沒有明顯的關(guān)聯(lián)〔P=0.531〕.且CanineCV與其他病毒共感染的感染率高達(dá)77.33%,有81.69%的CanineCV陽性病例有共感染的情況，與對照組相比，共感染與胃腸疾病顯著相關(guān)〔P0.00001〕[17].當(dāng)前，已陸續(xù)在美國、意大利、德國和中國等國家檢測到CanineCV,且已獲得病毒的全基因組序列。但僅確定CanineCV可導(dǎo)致犬出現(xiàn)脈管炎、壞死性淋逢迎炎等。CanineCV的致病機(jī)制，可能與PCV2極為類似[12,17].CanineCV在病毒共感染中與其他病毒起協(xié)同作用，CanineCV可能會損傷宿主免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制，進(jìn)而與其他病原體共感染并導(dǎo)致臨床疾病加重?；蛘咴谄渌≡w損傷宿主腸道上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞后，CanineCV致病性發(fā)生變化，進(jìn)而加重病情[12].以下為參考文獻(xiàn)[1]KapoorA,DuboviEJ,Henriques-RiveraJA,etal.Completegenomesequenceofthefirstcaninecircovirus[J].JVirol,2020,86〔12〕:7018.[2]蔡杰，呼高偉，王乃東，等。新型豬圓環(huán)病毒疫苗的研究進(jìn)展[J].經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報(bào)，2021,20〔3〕:171-174.[3]DecaroN,MartellaV,DesarioC,etal.Genomiccharacterizationofacircovirusassociatedwithfatalhemorrhagicenteritisindog,Italy[J].PLoSOne,2020,9〔8〕:el05909.[4]LiL,McGrawS,ZhuK,etal.Circovirusintissuesofdogswithvasculitisandhemorrhage[J].EmergInfectDis,2020,19〔4〕:534-541.[5]PalinskiR,Pi1eyroP,ShangP,etal.Anovelporcinecircovirusdistantlyrelatedtoknowncircovirusesisassociatedwithporcinedermatitisandnephropathysyndromeandreproductivefailure[J].JournalofVirology,2021,91〔1〕.doi:10.1128/JVI.01879-16.[6]顧金燕，邢剛，雷靜，等。豬圓環(huán)病毒2型與豬圓環(huán)病毒相關(guān)性系統(tǒng)疾病的回首及瞻望[J].生物工程學(xué)報(bào)，2021,31〔6〕:880-891.[7]李進(jìn)軍，侯強(qiáng)紅，龐培，等。湘西山區(qū)豬2型圓環(huán)病毒血清學(xué)調(diào)查[J].經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報(bào)，2021,20〔3〕:159-162.[8]劉杏，王鳳雪，溫永俊，等。豬繁衍與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒2型混合感染的流行病學(xué)調(diào)查[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2021,38〔4〕:456-459.[9]PhanTG,GiannittiF,RossowS,etal.DetectionofanovelcircovirusPCV3inpigswithcardiacandmulti-systemicinflammation[J].VirologyJournal,2021,13〔1〕:184.[10]KuX,ChenF,LiP,etal.Identificationandgeneticcharacterizationofporcinecircovirustype3inChina[J].TransboundaryEmergingDiseases,2021,64〔3〕:703.[11]ShenH,LiuX,ZhangP,etal.Genomecharacterizationofaporcinecircovirustype3inSouthChina[J].TransboundaryEmergingDiseases,2021.doi:10.111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