不同規(guī)格鹿茸商品藥材中氨基酸含量分析

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[摘要]目的：測定不同規(guī)格鹿茸商品藥材中氨基酸的含量，從氨基酸含量方面對不同規(guī)格鹿茸舉行質(zhì)量操縱。

方法：采用柱前衍生化法，利用氨基酸自動分析儀對樣品中18種氨基酸含量舉行測定。

結(jié)果：18種氨基酸線性方程r均大于0.997，平均回收率均在99.1%～108.1%，RSD均小于2.0%；39個不同品種規(guī)格鹿茸藥材中均含有17種氨基酸及7種人體必需氨基酸，臘片氨基酸含量較高，頭茬茸較二茬茸氨基酸含量高，與傳統(tǒng)分類相一致。

結(jié)論：該方法可用于鹿茸藥材氨基酸含量測定及質(zhì)量操縱。

[關(guān)鍵詞]鹿茸；氨基酸；含量測定

鹿茸CornuCerviPantotrichum為鹿科動物梅花鹿CervusnipponTemminck或馬鹿C.elaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，具有壯腎陽，益精血，強筋骨，調(diào)沖任，托瘡毒的成果[1]。由于鹿茸的商品藥材可按采收時間（頭茬茸、二茬茸）、生常年限（二杠、單門、三岔、蓮花、四岔等）、藥用部位（主枝、側(cè)枝）、飲片切制的部位（臘片、粉片、紗片和骨片）、加工過程（排血、不排血）等不同方面分為若干等[2]，市場上鹿茸的規(guī)格多達40余種。在鹿茸所含的各類成分中氨基酸是其主要且含量較高的成分，近年來對于鹿茸不同規(guī)格的藥材氨基酸含量的測定也有所報道[3-6]，但都是針對規(guī)格的某一個方面，為有效操縱鹿茸不同規(guī)格藥材的質(zhì)量，本測驗收集了39個不同規(guī)格的鹿茸藥材，利用氨基酸自動分析儀，采用柱前衍生化法對其中的18種氨基酸含量舉行了測定，以期從氨基酸含量方面對鹿茸商品藥材的規(guī)格劃分及質(zhì)量操縱供給理論依據(jù)。

1材料

1.1儀器

P230Ⅱ氨基酸自動分析儀，UV230Ⅱ紫外-可見檢測器，P230Ⅱ高壓恒流泵，QT-330色譜柱溫箱，EC2022色譜數(shù)據(jù)處理工作站（大連依利特分析儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；AR2140電子分析天平（METTLE公司）；101型電熱鼓風枯燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。

1.2試劑

Elite-AAK氨基酸對照品[天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、絲氨酸（Ser）精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、蘇氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、纈氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、半胱氨酸（Cys）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）色氨酸（Trp）苯丙氨酸（Phe）、組氨酸（His）、賴氨酸（Lys）每種5mg，酪氨酸（Tyr）2.5mg]；氨基酸衍生化試劑（2，4-二硝基氟苯）；衍生緩沖溶液固體組分A、衍生緩沖溶液固體組分B、平衡緩沖溶液固體組分A、平衡緩沖溶液固體組分B、滾動相固體組分B（以上試劑均由大連依利特分析儀器有限公司供給）；乙腈為色譜純（OceanpakAlexativeChemical公司）；水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.3藥材

39個不同規(guī)格的鹿茸商品藥材分別購于各藥材市場，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學李峰教授鑒定分別為鹿科動物梅花鹿C.nippon或馬鹿C.elaphus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，見表1。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱為依利特公司氨基酸分析專用ODS柱及養(yǎng)護柱；滾動相A為乙腈-水（1∶1），滾動相B相按依利特公司試劑說明配制，二元梯度洗脫；總流速1.2mL·min-1；柱溫27℃；檢測波長360nm；進樣量10μL；梯度洗脫程序見表2。

2.2溶液配制

衍生緩沖溶液、平衡緩沖溶液按試劑說明配置。

2.3對照品溶液的制備

將Elite-AAK氨基酸對照品用衍生緩沖溶液定容至250mL量瓶中，4℃冷藏，備用。

2.4供試品溶液的制備

分別取表1中樣品粉末約0.04g（過40目篩），細致稱定，置于10mL具塞試管中，參與5mL6mol·L-1鹽酸，放入烘箱中110℃水解24h。將水解后樣品屢屢用水洗滌轉(zhuǎn)入蒸發(fā)皿，80℃水浴蒸干。用衍生緩沖溶液屢屢洗滌蒸發(fā)皿，洗液轉(zhuǎn)入25mL量瓶中，并用衍生緩沖溶液定容。過濾，備用。

2.5對照溶液品和供試品溶液的衍生化

細致量取2.4項下供試品溶液2mL和3mL衍生緩沖溶液置25mL棕色量瓶中，或取對照品溶液5mL置25mL棕色量瓶中，分別參與2.5mL衍生化試劑，混勻，用封口膜封口。放入60℃水浴中，暗處回響60min?；仨懲戤?，取出冷卻至室溫，用平衡緩沖溶液稀釋至刻度，靜置15min，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.6方法學考察

2.6.1線性關(guān)系考察分別細致吸取2.5項下對照品溶液5，8，10，15，20μL注入氨基酸自動分析儀，按2.1項下色譜條件測定峰面積。以峰面積Y為縱坐標，進樣量X為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，見表3。

2.6.2細致度試驗取同一份樣品供試液，按2.5項下方法制備，重復進樣5次，每次進樣10μL，分別測定峰面積，結(jié)果18種氨基酸峰面積RSD均小于2.4%。

2.6.3