植物細(xì)胞工程的基本設(shè)備和無菌操作

植物細(xì)胞工程的基本設(shè)備和無菌操作第一頁，共二十五頁，2022年，8月28日一、基本設(shè)備1、植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的組成洗滌室滅菌室配制室無菌操作室培養(yǎng)室鑒定室馴化移植室第二頁，共二十五頁，2022年，8月28日2、基本設(shè)備玻璃器皿和器械無菌操作設(shè)備培養(yǎng)設(shè)備其它設(shè)備第三頁，共二十五頁，2022年，8月28日第四頁，共二十五頁，2022年，8月28日第五頁，共二十五頁，2022年，8月28日第六頁，共二十五頁，2022年，8月28日第七頁，共二十五頁，2022年，8月28日第八頁，共二十五頁，2022年，8月28日第九頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十頁，共二十五頁，2022年，8月28日二、無菌操作1、各種滅菌方法及其適用范圍A干熱滅菌法B濕熱滅菌法C熏蒸滅菌法D過濾滅菌法E藥劑滅菌法F灼燒滅菌法G照射滅菌法第十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日2、無菌操作過程A清洗玻璃器皿的清洗實(shí)驗(yàn)材料的清洗B滅菌※培養(yǎng)材料的滅菌以藥劑滅菌法為主主要考慮：藥劑的滅菌效果、材料對藥劑的耐受力第十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十四頁，共二十五頁，2022年，8月28日※培養(yǎng)基滅菌高壓蒸汽滅菌過濾滅菌C接種經(jīng)過表面滅菌的材料，按不同的要求，經(jīng)過剪切、整理后，移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)的過程。接種室（無菌操作室）的滅菌接種臺的滅菌工作人員注意事項(xiàng)第十五頁，共二十五頁，2022年，8月28日三、培養(yǎng)基的組成及母液的配制1、培養(yǎng)基的組成

無機(jī)營養(yǎng)：大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg

微量元素：Fe、Mn、Cu等有機(jī)營養(yǎng)：碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖氮源：氨基酸類、酰胺類活性物質(zhì)：煙酸、肌醇、生物素等植物激素：生長素類：IAA、NAA、IBA等細(xì)胞分裂素類：激動素、玉米素等其它類：赤霉素、脫落酸、乙烯附加物類：瓊脂、椰乳、水解蛋白等第十六頁，共二十五頁，2022年，8月28日2、培養(yǎng)基母液配制配制培養(yǎng)基前，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，常將大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物類和激素類分別配制成比培養(yǎng)基濃度大若干倍的母液。當(dāng)配制培養(yǎng)基時，只需按預(yù)先計(jì)算好的量吸取母液稀釋即可。母液應(yīng)保存在冰箱中備用，保存時間不可過長，當(dāng)母液出現(xiàn)沉淀或霉菌團(tuán)時，則不能使用。第十七頁，共二十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)一

培養(yǎng)基母液的配制

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆张囵B(yǎng)基母液的配制方法。2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（1）培養(yǎng)基母液配制的各種準(zhǔn)備工作；（2）以常用基本培養(yǎng)基MS母液的配制以及各種附加成分母液的配制為例，學(xué)習(xí)培養(yǎng)基母液的配制方法.3、實(shí)驗(yàn)儀器：主要包括電子天平、烘干箱、蒸餾水器、冰箱、各類常用玻璃器皿和容器等。第十八頁，共二十五頁，2022年，8月28日4、實(shí)驗(yàn)操作方法：玻璃器皿的清洗與干燥藥品用量計(jì)算稱取藥品大量元素母液的配制微量元素母液的配制鈣鹽和鐵鹽母液的配制激素及其它有機(jī)物母液的配制.第十九頁，共二十五頁，2022年，8月28日5、作業(yè)：1）按MS培養(yǎng)基配方需要量計(jì)算配制100ml母液所需藥品量、母液濃度及配制500ml培養(yǎng)基各種母液吸取量

2）為什么在配制培養(yǎng)基之前要先配制母液？

第二十頁，共二十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)二：MS培養(yǎng)基的配制與滅菌

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的配制與滅菌操作方法.2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：培養(yǎng)基的配制,培養(yǎng)基的滅菌.3、實(shí)驗(yàn)儀器：主要為臺秤,高壓滅菌鍋,各種玻璃器皿和容器等。

第二十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日4、實(shí)驗(yàn)操作方法：量取大量元素量取微量元素量取鈣鹽、鐵鹽和其它有機(jī)物稱取蔗糖和瓊脂配制MS培養(yǎng)基調(diào)PH值分裝培養(yǎng)基培養(yǎng)基滅菌.

第二十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日5、作業(yè)：1）高壓蒸汽滅菌注意事項(xiàng)有哪些？

2）列表計(jì)算配制300ml下列培養(yǎng)基（pH＝5.8）所需的各種母液及其它成分用量。

AMS基本培養(yǎng)基附加瓊脂10g/LBMS基本培養(yǎng)基附加IAA1mg/L、BA2mg/L、瓊脂10g/L、蔗糖30g/L第二十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)三：無菌操作技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆占?xì)胞工程中的無菌操作技術(shù)。學(xué)習(xí)植物外植體的消毒技術(shù)、離體培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：以柑桔種子為例，完成從外植體表面消毒到接種整個過程的操作。每人均獨(dú)立操作完成。3、實(shí)驗(yàn)儀器：主要為超凈工作臺等。

第二十四頁，共二十五頁，202