實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞的形態(tài)觀察和大小測量

實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞的形態(tài)觀察和大小測量第一頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、進(jìn)一步熟悉顯微鏡的使用方法；2、熟悉動植物、人體細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)；3、掌握顯微測微的原理和方法，通過測微對細(xì)胞的大小有所了解；4、學(xué)習(xí)細(xì)胞計(jì)數(shù)方法；5、掌握臨時(shí)裝片、涂片的制作方法。第二頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞是生命活動的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，其形態(tài)與功能相適應(yīng)，種類繁多，形態(tài)各異，有球形、橢圓形、扁平形、長梭形、星形等。雖然細(xì)胞的形狀各異，但是它們卻有共同的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，都是由細(xì)胞膜（動物），細(xì)胞壁（植物）、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核組成。一般光學(xué)顯微鏡分辨率為0.2um，細(xì)胞中的線粒體、高爾基體、中心體、核仁、染色體等細(xì)胞器長度或直徑大于0.2um，一般經(jīng)過一定固定染色處理后，借助顯微鏡可以觀察細(xì)胞及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。第三頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理

不同的組織細(xì)胞不僅形態(tài)上有差異，大小也往往各不相同。有機(jī)體的每種細(xì)胞都有其特定的尺寸和形態(tài)，這與它們發(fā)揮特定的功能有關(guān)，而一旦細(xì)胞不能保持固有形態(tài)，其功能就會受到損害，從而會給有機(jī)體帶來一系列問題。利用顯微鏡附帶的測微尺可以對觀察到的細(xì)胞或其結(jié)構(gòu)進(jìn)行長度測量，從而對其體積進(jìn)行計(jì)算。第四頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞計(jì)數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的一項(xiàng)基本技術(shù)，只有控制合適的細(xì)胞密度才能確保細(xì)胞順利生長，同時(shí)在研究細(xì)胞生長狀態(tài)，繪制生長曲線等實(shí)驗(yàn)中也會用到細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理較簡單，只要從需要計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸液中取一定體積的懸液，稀釋后在顯微鏡下利用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可換算出原始細(xì)胞懸液中細(xì)胞的密度以及細(xì)胞總數(shù)。第五頁，共六十頁，2022年，8月28日洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞第六頁，共六十頁，2022年，8月28日人口腔上皮細(xì)胞第七頁，共六十頁，2022年，8月28日人的紅細(xì)胞第八頁，共六十頁，2022年，8月28日神經(jīng)細(xì)胞第九頁，共六十頁，2022年，8月28日酵母菌細(xì)胞第十頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)用品

1、器材：普通光學(xué)顯微鏡，測微尺，細(xì)胞計(jì)數(shù)板，刀片，剪刀，小鑷子，玻片，擦鏡紙；2、材料：洋蔥，人口腔上皮細(xì)胞，雞血細(xì)胞懸液；3、試劑：碘液，瑞特染液第十一頁，共六十頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)步驟（一）洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的觀察1.臨時(shí)裝片的制備：在載玻片中央滴一滴1%的碘液，剝?nèi)⊙笫[鱗莖表皮，用小鑷子撕取內(nèi)表皮，用剪刀剪取0.5*0.5mm2大小平鋪在碘液中，用鑷子夾取一塊蓋玻片，將一條邊緣接觸碘液，然后緩緩蓋在液滴上，防止產(chǎn)生氣泡，輕壓蓋片，用吸水紙吸去擠出的碘液。2.將制備好的裝片放到顯微鏡下，先用低倍鏡觀察，尋找細(xì)胞形狀規(guī)則、形態(tài)清晰的區(qū)域，換高倍鏡觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。第十二頁，共六十頁，2022年，8月28日洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)第十三頁，共六十頁，2022年，8月28日碘液染色放大10倍洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞圖第十四頁，共六十頁，2022年，8月28日碘液染色放大40倍洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞圖第十五頁，共六十頁，2022年，8月28日（二）人口腔上皮細(xì)胞的觀察1.人口腔黏膜上皮細(xì)胞涂片標(biāo)本的制備：在載玻片中央滴一滴1%碘液，用一根經(jīng)過消毒的牙簽在實(shí)驗(yàn)者口腔內(nèi)壁輕輕刮取黏膜上皮細(xì)胞，將其放入碘液中攪動使細(xì)胞散開。染色1分鐘后小心加蓋玻片，方法同前。2.將制備好的裝片置于顯微鏡下觀察。第十六頁，共六十頁，2022年，8月28日人口腔上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)第十七頁，共六十頁，2022年，8月28日碘液染色放大10倍口腔上皮細(xì)胞圖第十八頁，共六十頁，2022年，8月28日碘液染色放大40倍口腔上皮細(xì)胞圖第十九頁，共六十頁，2022年，8月28日碘液染色放大40倍口腔上皮細(xì)胞圖第二十頁，共六十頁，2022年，8月28日（三）雞血細(xì)胞的觀察1.血涂片的制備：用吸管吸取少量稀釋了的雞血，在載玻片右端滴一滴，另取一張載玻片，使其一條邊緣接觸血液，兩玻片成30~45°，迅速向前推移，使血液被拉成均勻的薄膜。血液的大小、玻片的夾角、推移的速度對血膜的厚薄均有影響，將玻片在空氣中晾干。第二十一頁，共六十頁，2022年，8月28日2.染色：在血膜上滴幾滴瑞特染液，平置1分鐘，再向染液中加入等量的蒸餾水，稀釋染液，繼續(xù)9分鐘。用自來水輕輕沖洗玻片上的染液，晾干。3.觀察：分別用低倍鏡和高倍鏡觀察血細(xì)胞的形態(tài)。第二十二頁，共六十頁，2022年，8月28日血涂片的制片方法第二十三頁，共六十頁，2022年，8月28日染色的鴿紅細(xì)胞圖第二十四頁，共六十頁，2022年，8月28日染色的鴿紅細(xì)胞圖第二十五頁，共六十頁，2022年，8月28日染色的鴿紅細(xì)胞圖第二十六頁，共六十頁，2022年，8月28日未被染色的鴿紅細(xì)胞圖第二十七頁，共六十頁，2022年，8月28日（四）雞血細(xì)胞計(jì)數(shù)1.細(xì)胞計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)：細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一塊7.5*3.5cm2的厚玻片，通常有兩個正方形計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室較周圍稍低，其上覆蓋一片蓋玻片時(shí)，之間的距離為0.1mm。每個計(jì)數(shù)室被分成9個大方格（邊長為1mm），四角的四個大格又均分為16個中方格，這四個大格通常用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)和組織培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)。中間的大格被分成25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，這些小方格一般用于紅細(xì)胞和血小板的計(jì)數(shù)。用擦鏡紙輕輕擦拭計(jì)數(shù)板，蓋上蓋玻片，在顯微鏡低倍鏡下熟悉方格的布局。第二十八頁，共六十頁，2022年，8月28日第二十九頁，共六十頁，2022年，8月28日第三十頁，共六十頁，2022年，8月28日第三十一頁，共六十頁，2022年，8月28日2.加樣：從顯微鏡上取下計(jì)數(shù)板，蓋上蓋玻片，用吸管吸取稀釋的雞血細(xì)胞懸液，滴在計(jì)數(shù)板上蓋玻片的邊緣，細(xì)胞懸液會因?yàn)楸砻鎻埩ψ饔米匀涣魅胗?jì)數(shù)室內(nèi)（注意不要產(chǎn)生氣泡）。靜置2分鐘，待細(xì)胞沉降后即可上鏡觀察。3.計(jì)數(shù)：在低倍鏡下按照固定方向數(shù)出計(jì)數(shù)室四個角上的每個大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目，如果細(xì)胞正好停留在格線上，則按照數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則計(jì)數(shù)。第三十二頁，共六十頁，2022年，8月28日4.計(jì)算：按照下列公式計(jì)算每毫升雞血細(xì)胞懸液包含的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞總數(shù)（個/毫升）=（四個大格細(xì)胞數(shù)目總和/4）*104*稀釋倍數(shù)。第三十三頁，共六十頁，2022年，8月28日10倍放大倍數(shù)下鴿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)圖第三十四頁，共六十頁，2022年，8月28日10倍放大倍數(shù)下鴿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)圖第三十五頁，共六十頁，2022年，8月28日

（五）細(xì)胞的顯微測量我們在理論課上學(xué)習(xí)過細(xì)胞的大小，知道細(xì)胞一般都很小，如一般植物細(xì)胞的直徑為10~100μm，人和動物的細(xì)胞直徑為10~20μm，細(xì)菌的細(xì)胞就更小了，那么有沒有一種工具能夠測量細(xì)胞大小呢？今天，我們就來學(xué)習(xí)一種測量細(xì)胞大小的工具——顯微測微尺。第三十六頁，共六十頁，2022年，8月28日（1）、顯微測微尺的組成

鏡臺測微尺顯微測微尺

目鏡測微尺第三十七頁，共六十頁，2022年，8月28日鏡臺測微尺：鏡臺測微尺是一塊特制的載玻片，在它的中央由一片圓形蓋片封固著一個具有精細(xì)刻度的標(biāo)尺，標(biāo)尺長1mm，分成100等份的小格，每小格長為10μm，標(biāo)尺的外圍有一黑色的小環(huán)，以便在顯微鏡下尋找標(biāo)尺位置。第三十八頁，共六十頁，2022年，8月28日目鏡測微尺：分為線性目鏡測微尺和網(wǎng)狀目鏡測微尺。目鏡測微尺是一塊比目鏡筒內(nèi)徑稍小的有標(biāo)尺的圓形玻璃片，標(biāo)尺長10mm、分為100等份的小格。每小格表示的實(shí)際長度隨不同的顯微鏡、不同放大倍數(shù)的物鏡而不同。線性目鏡測微尺一般用來測量長度，網(wǎng)狀目鏡測微尺上有數(shù)個正方格的網(wǎng)狀刻度，經(jīng)常使用網(wǎng)狀目鏡測微尺測面積。第三十九頁，共六十頁，2022年，8月28日（2）、測微原理鏡臺測微尺是顯微長度測量的標(biāo)準(zhǔn)，但它并不被用來直接測量（為什么）。目鏡測微尺每小格的實(shí)際長度隨不同顯微鏡、不同放大倍數(shù)而不同，因?yàn)槟跨R測微尺是安裝在目鏡隔板上，顯微鏡下被測標(biāo)本的物像是經(jīng)過物鏡、目鏡兩次放大成像后才進(jìn)入視野的，而目鏡測微尺上的刻度只經(jīng)過一次放大成像，放大倍數(shù)與顯微鏡下標(biāo)本的放大倍數(shù)不同，因此目鏡測微尺每小格的長度只代表相對長度，是變化的，必須由鏡臺測微尺校正后才有意義，因此鏡臺測微尺和目鏡測微尺必須配合使用。第四十頁，共六十頁，2022年，8月28日

所以先要用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進(jìn)行校正，測出不同放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格的實(shí)際長度。在測量標(biāo)本時(shí)，移去鏡臺測微尺，換上被測標(biāo)本，用目鏡測微尺即可測得觀察標(biāo)本的實(shí)際長度。鏡臺測微尺用來校正目鏡測微尺，故其質(zhì)量對所測細(xì)胞影響極大。通過測量細(xì)胞的長度可以計(jì)算出細(xì)胞的面積和體積。第四十一頁，共六十頁，2022年，8月28日0.01mm鏡臺測微尺第四十二頁，共六十頁，2022年，8月28日目鏡測微尺0102030405060708090100第四十三頁，共六十頁，2022年，8月28日（3）、顯微測微尺的使用方法（3.1）安裝1、卸下目鏡的一個上透鏡，將目鏡測微尺刻度線向下安裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。2、將鏡臺測微尺刻度向上安裝在載物臺上夾好，打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)載物臺使測微尺分度位于視野中央。用低倍鏡（4倍）觀察，調(diào)焦至能看清鏡臺測微尺的刻度線。第四十四頁，共六十頁，2022年，8月28日（3.2）校正

調(diào)換物鏡至10倍放大倍數(shù)，調(diào)節(jié)焦距使鏡臺測微尺的刻度線最清晰。此時(shí)在視野內(nèi)可以同時(shí)看到鏡臺測微尺和目鏡測微尺。移動載物臺將鏡臺測微尺標(biāo)尺移至目鏡測微尺的下方以避免后者標(biāo)尺上的刻度線妨礙視線。旋轉(zhuǎn)目鏡鏡筒使目鏡測微尺的標(biāo)尺與鏡臺測微尺平行且靠近，移動載物臺使鏡臺測微尺左端的0刻度線與目鏡測微尺左端的0刻度線重疊，從左至右依次間隔（為什么）讀出兩尺刻度線重合的位置，記錄格數(shù)，至少記錄5個讀數(shù)。第四十五頁，共六十頁，2022年，8月28日

若以S表示鏡臺測微尺的格數(shù)、E表示目鏡測微尺的格數(shù)，L表示目鏡測微尺每小格代表的實(shí)際長度，計(jì)算5次數(shù)值的平均值即為該放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格代表的實(shí)際長度。

L＝S/E*10μm

第四十六頁，共六十頁，2022年，8月28日第四十七頁，共六十頁，2022年，8月28日10倍放大倍數(shù)下的校正值測量次數(shù)及讀數(shù)12345鏡臺測微尺（格數(shù)）110316595目鏡測微尺（格數(shù)）110306493目鏡測微尺每小格實(shí)長(μm)101010.3310.1610.22L=(L1+L2+L3+L4+L5)/5=(10+10+10.3+10.2+10.2)/5=10.14(μm)第四十八頁，共六十頁，2022年，8月28日

依次在高倍鏡和油鏡下對目鏡測微尺進(jìn)行校正。在高倍鏡和油鏡下鏡臺測微尺的刻度線顯得很粗，目鏡測微尺的刻度線與它相比是很細(xì)的，為了減少誤差，校正時(shí)目鏡測微尺左端的刻度線應(yīng)放在鏡臺測微尺左端刻度線的左旁邊緣。

第四十九頁，共六十頁，2022年，8月28日（3.3）測微移去鏡臺測微尺，換上洋蔥鱗莖表皮裝片，用目鏡測微尺測量一個細(xì)胞所占小格數(shù)并乘以目鏡測微尺每小格代表的實(shí)際長度，即為被測細(xì)胞的實(shí)際長度。在10倍放大倍數(shù)下測得一個洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的寬共有23格，由此可以計(jì)算出這個洋蔥表皮細(xì)胞的寬：

10.14×23=233.22(μm)

用同樣的方法可以測量洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的長，測出長后可以計(jì)算出細(xì)胞的面積。第五十頁，共六十頁，2022年，8月28日0102030405060708090100洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞第五十一頁，共六十頁，2022年，8月28日測量口腔上皮細(xì)胞大小圖第五十二頁，共六十頁，2022年，8月28日

在測量過程中，為了數(shù)值的準(zhǔn)確性，一般通過多次測量取平均值。另外我們在測量的過程中還會出現(xiàn)被測標(biāo)本的長度不是整數(shù)格，這個時(shí)候就要估計(jì)，有時(shí)遇到比較大的細(xì)胞，目鏡測微尺的長度不夠長，要通過幾次測量才可以把一個長度測出來，出現(xiàn)這兩種情況就會產(chǎn)生誤差。第五十三頁，共六十頁，2022年，8月28日

（4）.使用顯微測微尺注意事項(xiàng)

1.鏡臺測微尺標(biāo)尺的圓環(huán)上蓋有一圓形蓋玻片起保護(hù)刻度線的作用，蓋玻片是用樹膠粘在載玻片上的，因此避免二甲苯與其接觸。（酒精和乙醚2：8或3：7混合液擦洗）

2.在用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進(jìn)行校正時(shí)，注意不要把鏡臺測微尺放反或放倒。

3.在用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進(jìn)行校正時(shí)，顯微鏡的光亮度不易太亮。

4.測微尺都是用玻璃材質(zhì)做的，在使用的時(shí)候要小心，不要摔碎或壓碎。

第五十四頁，共六十頁，2022年，8月28日結(jié)果討論

思考題：1、將所觀察到的幾種細(xì)胞繪制在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上，并表明其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。2、計(jì)算1ml雞血細(xì)胞懸液中所包含的細(xì)胞數(shù)。3、測量一個洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的大小。第五十五頁，共六十頁，2022年，8月28日生物學(xué)繪圖方法及注意事項(xiàng)

生物繪圖是形象地描繪生物外形、結(jié)構(gòu)和行為等的一種重要的科學(xué)記錄方法。其原則是要求對所描繪的生物對象做深入細(xì)致的觀察，從科學(xué)的角度充分了解其有關(guān)形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，在此基礎(chǔ)上準(zhǔn)確、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)乩L制。生物繪圖要求具有科學(xué)性、真實(shí)性，并且要求清晰。一、繪圖用具2H或3H鉛筆、繪圖紙、削筆刀、橡皮、小尺等。第五十六頁，共六十頁，2022年，8月28日二、生物繪圖的主要技法(一)基本要求

(1).仔細(xì)觀察標(biāo)本，區(qū)分正常結(jié)構(gòu)與偶然、人為的差異，選擇典型和正常的部分認(rèn)真觀察。充分了解各部分的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是繪圖的前提。科學(xué)、認(rèn)真、實(shí)事求是的態(tài)度是繪圖的保證。