細胞化學(xué)染色檢驗

細胞化學(xué)染色檢驗第一頁，共四十頁，2022年，8月28日

細胞學(xué)和化學(xué)結(jié)合的一門科學(xué)。以細胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學(xué)反應(yīng)原理對細胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（包括酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核算等）作定性、定位、半定量分析的方法。

第二頁，共四十頁，2022年，8月28日臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的臨床類型。根據(jù)細胞化學(xué)染色結(jié)果不同，可推斷細胞所屬系列。輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷。由于血細胞在病理情況下，其化學(xué)成分及含量發(fā)生變化，可以輔助疾病的診斷，如中性粒細胞堿性磷酸酶染色、鐵染色等。第三頁，共四十頁，2022年，8月28日細胞染色的基本步驟

固定為了保持細胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的不變，需要對細胞進行固定。分為物理法和化學(xué)法物理法：干燥和火焰固定化學(xué)法：蒸氣固定和液體固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。第四頁，共四十頁，2022年，8月28日有色沉淀反應(yīng)通過不同化學(xué)反應(yīng)，是被檢測物質(zhì)最終形成穩(wěn)定的有色沉淀。1）偶氮偶聯(lián)法：含苯酚的底物，在相應(yīng)酶的作用下釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽結(jié)合，偶氮偶聯(lián)形成相應(yīng)顏色的沉淀物。2）普魯士藍反應(yīng)：細胞內(nèi)、外的鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成如亞鐵氰化鉀藍色沉淀。第五頁，共四十頁，2022年，8月28日3）雪夫反應(yīng)：過碘酸氧化細胞內(nèi)糖類中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀物。第六頁，共四十頁，2022年，8月28日復(fù)染目的在于使各種細胞能顯示出來便于辨認。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯對比度既能使細胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚的看出細胞化學(xué)染色的結(jié)果。第七頁，共四十頁，2022年，8月28日

鐵染色ferricstain第八頁，共四十頁，2022年，8月28日原理健康人骨髓中的鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍色的亞鐵氫化鐵沉淀，定位于含鐵部位。第九頁，共四十頁，2022年，8月28日

化學(xué)反應(yīng)

鐵+亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵酸性環(huán)境

藍色沉淀第十頁，共四十頁，2022年，8月28日

細胞外鐵

主要存在于骨髓小粒的巨噬細胞內(nèi)，反映體內(nèi)貯存鐵。

分-、+、++、+++、++++五個等級。第十一頁，共四十頁，2022年，8月28日

細胞內(nèi)鐵

存在于中幼紅細胞、晚幼紅細胞、及紅細胞中的鐵（包括鐵粒幼紅細胞、鐵粒紅細胞）。

油鏡下計數(shù)100個中幼紅和晚幼紅細胞，記錄胞漿中含有藍色顆粒細胞的百分數(shù)。第十二頁，共四十頁，2022年，8月28日

鐵粒幼細胞根據(jù)藍色鐵顆粒多少粗細分為：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。

環(huán)形鐵粒幼細胞：胞質(zhì)內(nèi)藍色顆粒5顆以上，圍繞核周三分之一以上。

鐵粒紅細胞：紅細胞內(nèi)出現(xiàn)鐵顆粒。第十三頁，共四十頁，2022年，8月28日

參考范圍細胞外鐵：+~++細胞內(nèi)鐵：鐵粒幼細胞陽性率在12%~44%。Ⅰ型為主，少數(shù)Ⅱ型。無環(huán)形鐵粒幼及鐵粒紅細胞。第十四頁，共四十頁，2022年，8月28日臨床意義缺鐵性貧血：細胞外鐵陰性，細胞內(nèi)鐵陽性率下降或為零。經(jīng)鐵劑治療后，其細胞內(nèi)、外鐵增多，因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要方法。第十五頁，共四十頁，2022年，8月28日鐵粒幼細胞貧血：鐵粒幼紅細胞增多，有時可見到鐵粒紅細胞，細胞外鐵也常增多。因此鐵染色可作為診斷本病的重要方法。第十六頁，共四十頁，2022年，8月28日骨髓增生異常綜合征：伴環(huán)形鐵粒幼紅細胞增多，其環(huán)形鐵粒幼細胞大于有核細胞15%,細胞外鐵也常增多。第十七頁，共四十頁，2022年，8月28日非缺鐵性貧血：溶血性貧血、巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血、多次輸血后和白血病等，細胞外鐵和內(nèi)鐵正?；蛟黾?。感染、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、血色病等細胞外鐵明顯增加而鐵粒幼細胞減少。第十八頁，共四十頁，2022年，8月28日應(yīng)用評價臨床上應(yīng)用最廣泛的一種細胞化學(xué)反應(yīng)。鐵染色的結(jié)果一般是可信的，雖不如血清鐵蛋白敏感，但不受多種病理因素影響，因此鐵染色是反映機體儲存鐵的金標準。假陽性：骨髓涂片受試劑、玻片清潔度及操作過程等因素影響，造成細胞外鐵和內(nèi)鐵假性增高或陰性患者假陽性。假陰性：標本凝塊誤認為骨髓小粒第十九頁，共四十頁，2022年，8月28日

中性粒細胞堿性磷酸酶染色

neutrophilicalkalinephosphataseNAP第二十頁，共四十頁，2022年，8月28日原理中性粒細胞堿性磷酸酶的染色方法有Gonmori鈣-鈷偶聯(lián)法和kaplow偶氮偶聯(lián)法。第二十一頁，共四十頁，2022年，8月28日Kaplow偶氮偶聯(lián)法磷酸萘酚鈉萘酚包漿中NAPPH9.6重氮鹽不溶性紫黑色沉淀第二十二頁，共四十頁，2022年，8月28日正常細胞染色反應(yīng)NAP主要存在于中性成熟粒細胞（包括中性桿狀核細胞和分葉核細胞），故成熟中性粒細胞胞漿呈陽性，其他細胞基本陰性。第二十三頁，共四十頁，2022年，8月28日結(jié)果判讀

胞漿中有紫黑色顆粒結(jié)果為陽性，分為+，++，+++，++++，分別為1分、2分、3分、4分，100個細胞中陽性細胞的積分之和即為積分值。第二十四頁，共四十頁，2022年，8月28日參考范圍陽性率<40%,NAP積分值為30~130分。第二十五頁，共四十頁，2022年，8月28日臨床意義1、NAP積分增加：見于細菌性感染（類白血病反應(yīng)）、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾?。?、骨髓纖維化、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥）、慢性粒細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、雄激素治療等。第二十六頁，共四十頁，2022年，8月28日2.NAP積分下降：慢性粒細胞白血病慢性期、急性粒細胞白血病、陣發(fā)性隨眠性血紅蛋白尿、骨髓異常增生綜合征、惡性組織細胞病。第二十七頁，共四十頁，2022年，8月28日應(yīng)用評價NAP主要用于慢性粒細胞白血病與類白血病反應(yīng)、PNH與再障及急性白血病類型的鑒別。本實驗影響因素較多，如試劑、生理性波動及試驗人員及判斷標準等，使結(jié)果相差較大，各單位應(yīng)建立本實驗室參考標準。第二十八頁，共四十頁，2022年，8月28日過氧化物酶染色peroxidasePOX第二十九頁，共四十頁，2022年，8月28日原理

血細胞中所含主要為髓過氧化物酶MPO，MPO是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質(zhì)。POX染色方法有多中：復(fù)方聯(lián)苯胺法、二甲基聯(lián)苯胺法、四甲基聯(lián)苯胺法等。第三十頁，共四十頁，2022年，8月28日

二甲基聯(lián)苯胺法：

過氧化氫新生態(tài)氧過氧化物酶二氨基聯(lián)苯胺不溶性沉淀第三十一頁，共四十頁，2022年，8月28日正常細胞染色反應(yīng)1.粒細胞系統(tǒng)分化差的原始粒細胞為陰性分化好的原始粒細胞至成熟粒細胞各階段均呈陽性。陽性程度隨細胞成熟增強。嗜酸性粒細胞陽性最強，嗜堿性粒細胞陰性。第三十二頁，共四十頁，2022年，8月28日

2.單核細胞系統(tǒng)：陰性或弱陽性

3.其他細胞：淋巴、紅系、巨核系均為陰性，漿細胞，組織細胞可陰性，可陽性。第三十三頁，共四十頁，2022年，8月28日臨床意義輔助診斷急性白血病的首選，主要用于鑒別急性髓細胞白血病和急性淋巴細胞白血病。第三十四頁，共四十頁，2022年，8月28日急性淋巴細胞白血?。涸剂馨图毎坝字杉毎赎幮?，實際上急性淋巴細胞患者骨髓中可殘留部分原始粒細胞，而出現(xiàn)陽性，故參考范圍為陰性或陽性<3%第三十五頁，共四十頁，2022年，8月28日急性粒細胞白血?。涸剂＜毎幮曰蜿栃?，常陽性，為+~++，陽性顆粒數(shù)較多，顆粒較粗大，急性早幼粒細胞白血病：早幼粒細胞呈強陽性，+++~++++急性單核細胞白血?。涸紗魏撕陀字蓡魏思毎赎幮曰蛉蹶栃?，其陽性顆粒少而細小。第三十六頁，共四十頁，2022年，8月28日急性紅白血?。涸剂＜毎赎栃曰蜿幮?，原始單核細胞呈陰性或弱陽性，有核紅細胞呈陰性中性成熟粒細胞POX活性下降：見于骨髓異常增生綜合征、放射病、退化的中性粒細胞及某些白血病。第三十七頁，共四十頁，2022年，8月28日應(yīng)用評價POX染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型中最重要、首選的常規(guī)細胞化學(xué)染色。

POX染色涂片上細胞結(jié)構(gòu)不如瑞氏染色清楚，且陽性細胞中已有陽性顆粒覆蓋，一定程度上干擾白細胞顆粒判斷。第三十八頁，共四十頁，2022年，8月28日

POX染色測定MPO的敏感性明顯低于流式細胞術(shù)對MPO測定