“你家”試劑內(nèi)部參考品（工作校準(zhǔn)品）設(shè)置對(duì)了嗎

“你家”試劑內(nèi)部參考品（工作校準(zhǔn)品）設(shè)置對(duì)了嗎？在技術(shù)審評(píng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，許多產(chǎn)品的企業(yè)內(nèi)部參考品的設(shè)置不慎合理，無(wú)法客觀評(píng)價(jià)產(chǎn)品的各種性能，因此也給產(chǎn)品帶來(lái)了許多缺陷以及不足之處。企業(yè)內(nèi)部參考品對(duì)于生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō)是非常重要的，其是產(chǎn)品原材料選擇、制備、鑒定以及確定原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品生產(chǎn)工藝確定，反應(yīng)體系組成、反應(yīng)條件等的最重要的確定標(biāo)準(zhǔn)和依據(jù)。對(duì)于此類產(chǎn)品而言，首先原材料對(duì)于產(chǎn)品的質(zhì)量基非常重要的，無(wú)論原材料是生產(chǎn)企業(yè)外購(gòu)的還是自己生產(chǎn)的，生產(chǎn)企業(yè)都應(yīng)該嚴(yán)把原材料的質(zhì)量關(guān)。對(duì)于原材料如何進(jìn)行評(píng)價(jià)、如何確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)企業(yè)都有自己的方法，但是通過(guò)技術(shù)審評(píng)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)企業(yè)均是使用企業(yè)內(nèi)部參考品作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？乖?、抗體等主要原材料除了進(jìn)行蛋白含量、純度、活性等方面的檢測(cè)外，最重要的是進(jìn)行功能性試驗(yàn)，功能性試驗(yàn)就是將原材料組裝成試劑盒小樣，使用企業(yè)內(nèi)部參考品進(jìn)行檢測(cè)，看是否能達(dá)到參考品設(shè)置的要求或者哪種來(lái)源的原材料其檢測(cè)性能更好，來(lái)確定選擇哪種來(lái)源的愿材料。對(duì)于生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的確定也主要依賴于企業(yè)內(nèi)部參考品，主要生產(chǎn)工藝包括抗原、抗體的包被濃度、包被時(shí)間、顯色系統(tǒng)濃度和用量的確定等，反應(yīng)體系的優(yōu)化主要包括被測(cè)樣本用量、試劑用量、反應(yīng)的溫度、濕度、時(shí)間等的確定，以上條件的確定均是采用不同生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品和不同的反應(yīng)體系檢測(cè)企業(yè)內(nèi)部參考品，已確定最佳的生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系。企業(yè)內(nèi)部參考品設(shè)置的是否合理就顯得非常重要，如果參考品的設(shè)置不合理或者存在缺陷，那就會(huì)造成整個(gè)產(chǎn)品的原材料選擇、生產(chǎn)工藝的確定和反應(yīng)體系的組成均存在較大的問(wèn)題，導(dǎo)致產(chǎn)品的質(zhì)量不能達(dá)到臨床使用的安全性和有效性，容易在臨床檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果而影響臨床的診斷和治療。點(diǎn)擊“

雙?11活動(dòng)！全套二類注冊(cè)模板，先到先得！”聯(lián)系！因此，企業(yè)內(nèi)部參考品的設(shè)置必須客觀合理，能夠充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量，有些企業(yè)對(duì)于參考品的設(shè)置欠考慮，如陽(yáng)性參考品只選擇強(qiáng)陽(yáng)性的樣本，陰性參考品只選擇健康人的陰性樣本，精密度參考品只選擇中等陽(yáng)性的樣本，根本無(wú)法體現(xiàn)產(chǎn)品的任何檢測(cè)性能，對(duì)于產(chǎn)品檢測(cè)灰區(qū)樣本的能力沒(méi)有評(píng)價(jià)，產(chǎn)品的檢測(cè)性能也無(wú)法明確確定。所以下文將對(duì)企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)如何設(shè)置進(jìn)行論述，以下內(nèi)容只是對(duì)定性檢測(cè)產(chǎn)品如何設(shè)置企業(yè)內(nèi)部參考品進(jìn)行概述，有些特殊產(chǎn)品還應(yīng)進(jìn)行特殊的考慮。參考品的基質(zhì)應(yīng)與臨床被檢樣本使用相同的基質(zhì)，如完全相同基質(zhì)的樣本不易獲得，應(yīng)采用盡可能與臨床被檢樣本基質(zhì)接近的樣本，并對(duì)樣本的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究。企業(yè)內(nèi)部參考品至少應(yīng)包括陽(yáng)性參考品、陰性參考品、精密度參考品、最低檢出限參考品等。1，陽(yáng)性參考品陽(yáng)性參考品主要可反映產(chǎn)品檢測(cè)的靈做度以及對(duì)不同型別被測(cè)物的檢出能力。1.1陽(yáng)性參考品應(yīng)包括強(qiáng)陽(yáng)性參考品、中等陽(yáng)性參考品、弱陽(yáng)性參考品，其中主要應(yīng)以中等陽(yáng)性參考品、弱陽(yáng)性參考品為主，弱陽(yáng)性參考品的數(shù)量應(yīng)最多，以更好的反映產(chǎn)品的靈敏度，建議陽(yáng)性參考品數(shù)量至少應(yīng)包括20個(gè)不同陽(yáng)性程度的參考品，如被測(cè)物包括不同的型別及亞型，陽(yáng)性參考品數(shù)量還應(yīng)相應(yīng)的增加。陽(yáng)性參考品的制備可將強(qiáng)陽(yáng)性參考品使用健康人的陰性血清進(jìn)行系列稀釋得到不同稀釋度的陽(yáng)性樣本，該稀釋用陰性血清不能對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)產(chǎn)生不利的影響。同時(shí)還應(yīng)在臨床樣本中選擇不同陽(yáng)性強(qiáng)度的樣本直接作為參考品。弱陽(yáng)性參考品是反映產(chǎn)品檢測(cè)灰區(qū)樣本能力的重要指標(biāo)，其滴度應(yīng)在產(chǎn)品檢測(cè)限的附近或稍高于產(chǎn)品的最低檢出限，必須精確確定弱陽(yáng)性參考品中被測(cè)物的濃度。1.2

陽(yáng)性參考品應(yīng)包括被檢測(cè)物質(zhì)的各種型別，被檢測(cè)物質(zhì)可能存在各種基因型，包括不同的型別和亞型，在陽(yáng)性參考品的設(shè)置中應(yīng)盡可能包括臨床樣本中所有可能檢測(cè)到的型別及亞型。并且不同型別也應(yīng)該設(shè)置不同的陽(yáng)性稀釋度樣本，特別是低滴度的陽(yáng)性樣本，每個(gè)型別的低滴度陽(yáng)性樣本至少應(yīng)包括三個(gè)樣本。1.3

陽(yáng)性參考品應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ蚪饦?biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)，首先應(yīng)確認(rèn)被檢測(cè)物的存在以及存在的形式，其次應(yīng)對(duì)被檢測(cè)物的滴度進(jìn)行確認(rèn)。需對(duì)不同陽(yáng)性參考品進(jìn)行定性或定量的確認(rèn)。參考品中的被測(cè)物應(yīng)與臨床檢測(cè)樣本中的被測(cè)物盡可能的一致，特殊情況下可以采用基因重組或合成的物質(zhì)，但是該類物質(zhì)的性質(zhì)應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證，確保其與臨床樣本中的被測(cè)物性質(zhì)基本一致。點(diǎn)擊“

雙?11活動(dòng)！全套二類注冊(cè)模板，先到先得！”聯(lián)系！2，陰性參考品陰性參考品的主要用途是反映產(chǎn)品檢測(cè)的特異性，特異性的好壞對(duì)產(chǎn)品性能的影響是十分重要的。2.1

陰性參考品應(yīng)至少包括高值（高滴度）陰性參考品、陰性參考品、干擾樣本等。2.2

高值（高滴度）陰性參考品，此設(shè)置可以驗(yàn)證產(chǎn)品檢測(cè)的穩(wěn)定性。高值陰性樣本可進(jìn)一步驗(yàn)證產(chǎn)品Cut-off值的設(shè)定是否合理及該產(chǎn)品正確檢測(cè)灰區(qū)樣本的能力，此種樣本的數(shù)量應(yīng)至少為3個(gè)。2.3

陰性參考品為不含被測(cè)物的陰性樣本，陰性樣本可采集確定沒(méi)有被測(cè)物的健康人血樣本。2.4

干擾樣本為設(shè)置一定數(shù)量的含有可能會(huì)產(chǎn)生交夏反應(yīng)物質(zhì)的樣本，此項(xiàng)設(shè)置對(duì)反映產(chǎn)品檢測(cè)的特異性十分重要。該類參考品應(yīng)盡可能包括如具有可能與被測(cè)物同源性的病原微生物、抗體等，對(duì)于微生物檢測(cè)還應(yīng)具有采樣部位、正?？赡芗纳奈⑸?以及引起相似臨床癥狀的病原微生物。此外，以上參考品還應(yīng)包括不同稀釋度的樣本，主要應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性樣本和弱陽(yáng)性樣本，特別是人體可能出現(xiàn)的病理濃度樣本。對(duì)于其它被測(cè)物如病原體IgM抗體的檢測(cè)，需包括含有該被測(cè)物IgG抗體，其它同源病原體IgM抗體、IgG抗體的樣本，并應(yīng)包括不同的滴度。2.5干擾樣本還應(yīng)包括治療藥物干擾的樣本，包括對(duì)于該檢測(cè)項(xiàng)目可能的治療藥物及含有常規(guī)治療藥物濃度的樣本。2.6陰性參考品和干擾樣本應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ蚪饦?biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)，確認(rèn)被檢測(cè)物為陰性。3，精密度參考品精密度參考品可反映產(chǎn)品檢測(cè)的重復(fù)性以及重復(fù)檢測(cè)的穩(wěn)定性。一般精密度參考品應(yīng)包括至少兩種樣本。3.1

精密度參考品應(yīng)是包括被測(cè)物的主要型別的不同樣本，且不同型別樣本應(yīng)是低滴度陽(yáng)性樣本。3.2

精密度參考品應(yīng)包括高值陰性樣本，該樣本可反映產(chǎn)品檢測(cè)的穩(wěn)定性。3.3

精密度參考品的檢測(cè)次數(shù)應(yīng)在10次左右，檢測(cè)次數(shù)過(guò)多或過(guò)少均無(wú)法客觀反映產(chǎn)品檢測(cè)的重復(fù)性。3.4

精密度的計(jì)算：在定性檢測(cè)的體外診斷試劑產(chǎn)品中，如可通過(guò)閱讀儀或其它讀取設(shè)備讀取光強(qiáng)度或其它信號(hào)來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，例如以酶聯(lián)免疫法原理檢測(cè)的試劑，應(yīng)采用檢測(cè)的OD值計(jì)算重復(fù)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)差、均值、變異系數(shù)（CV值）來(lái)表示產(chǎn)品檢測(cè)的重復(fù)性，不熊只以目測(cè)顏色深淺來(lái)對(duì)檢測(cè)的重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果的CV值一般情況下應(yīng)<10%，有些特殊方法的檢測(cè)試劑由于方法學(xué)的原因可以適當(dāng)放寬重復(fù)性要求。3.5

對(duì)于一些可能產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的檢測(cè)方法，如酶聯(lián)免疫分析法、膠體金法，應(yīng)制備強(qiáng)陽(yáng)性精密度參考品進(jìn)行精密度的檢測(cè)，以驗(yàn)證產(chǎn)品避免產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的能力。HOOK效應(yīng)是一些免疫檢測(cè)方法無(wú)法避免的方法缺陷，企業(yè)在研發(fā)和生產(chǎn)產(chǎn)品時(shí)應(yīng)對(duì)產(chǎn)品的HOOK效應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究，并給出產(chǎn)品檢測(cè)不會(huì)產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的被測(cè)物最大濃度，企業(yè)應(yīng)該根據(jù)此濃度設(shè)置強(qiáng)陽(yáng)性參考品，以驗(yàn)證同一批產(chǎn)品或不同批次產(chǎn)品之間是否存在差異，是否會(huì)產(chǎn)生HOOK效應(yīng)。點(diǎn)擊“

雙?11活動(dòng)！全套二類注冊(cè)模板，先到先得！”聯(lián)系！4，最低檢出限參考品最低檢出限參考品是評(píng)價(jià)產(chǎn)品檢測(cè)能力的重要工具，對(duì)于定性產(chǎn)品其是評(píng)價(jià)產(chǎn)品檢測(cè)下限的依據(jù)，因此其設(shè)計(jì)的合理性非常重要。4.1

如被測(cè)物包括多個(gè)型別和亞型，最低檢出限參考品至少選擇三個(gè)主要型別或亞型進(jìn)行設(shè)置。4.2

選擇不同型別的強(qiáng)陽(yáng)性樣本作為基礎(chǔ)樣本，使用鍵康人的陰性血清對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性樣本進(jìn)行倍比稀釋得到一系列稀釋度的樣本，該稀釋過(guò)程必須保證樣本的基質(zhì)保持不變。使用待評(píng)價(jià)產(chǎn)品對(duì)不同稀釋度的參考品進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)稀釋度參考品至少檢測(cè)三次，直至檢測(cè)為陰性結(jié)果為止。檢測(cè)為陽(yáng)性的最高稀釋度參考品為最低檢出限參考品。4.3

最低檢出限參考品的批間一致性是評(píng)價(jià)產(chǎn)品是否能保持批間一致性的重要指標(biāo)。因此，必須對(duì)最低檢出限參考品進(jìn)行被測(cè)物的定量或半定量。在技術(shù)審評(píng)過(guò)程中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有些申報(bào)企業(yè)在設(shè)置該參考品時(shí)只是選擇一個(gè)臨床的強(qiáng)陽(yáng)性樣本，然后進(jìn)行倍比稀釋，對(duì)系列稀釋的參考品進(jìn)行檢測(cè)，直至檢測(cè)到結(jié)果為陰性的參考品，并將上一個(gè)稀釋度參考品設(shè)置為最低檢出限的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，或格該參考品的橢釋度設(shè)定為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。但是其并不能清楚的確定參考品中的被測(cè)物的具體濃度。因此，這種設(shè)置并不能有效的評(píng)價(jià)產(chǎn)品的最低檢出限，也不能使不同批次的參考品保持一致性。所以應(yīng)采用可能的方法對(duì)該參考品進(jìn)行被測(cè)物的定量或半定量，以期給出最低檢出限參考品中的被測(cè)物的具體量值。

4.4

最低檢出限參考品可以采用國(guó)家藥監(jiān)局已經(jīng)批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品、質(zhì)量較好的