熒光光度法及期末復(fù)習(xí)

二、注意事項(xiàng)帶計(jì)算器、學(xué)生遵守考場(chǎng)紀(jì)上節(jié)課要點(diǎn)一一最大吸收波長(zhǎng)吸光度摩爾吸光系數(shù)（2朗伯-比爾定 (Lmol1cm 3朗伯-比爾定律的分析溶液濃度的A＝b工作(校準(zhǔn)曲線

A** 4量的

Er c T對(duì)誤與T(或 的關(guān) 2

(T0(36.8

A在0.15～1.0(調(diào)c,)實(shí)際工作中，應(yīng)A在0.15～1.0(調(diào)c,)57.5.5 HL、L顏色不

配制一系列c相同,pH不同的溶液,測(cè)(HL)

L

(HL [HL]+[L]

+

Ka Ka高酸度下，幾乎全部以HL存在，可測(cè)得低酸度下，幾乎全部以L存在，可測(cè)得AL代入整理

A-A-Aa

AH -

A-AA-Aa -

MO吸收曲曲曲11.10,23456bAb5對(duì)pH、 可321

123456

均值即可

7光度分析的方法和儀目視比色 觀察方 方便、靈敏，但準(zhǔn)確度差.常用于限界分析8法通過(guò)濾光片得一窄范圍的光(幾十計(jì)結(jié)構(gòu)示9濾光吸收濾光片：只允許指定的窄范圍波長(zhǎng)光過(guò)，其他波長(zhǎng)的光均被吸收選擇濾光片的原則光,即濾光片的顏色與有色溶液的顏色互補(bǔ).波長(zhǎng)可調(diào),故選擇性好,準(zhǔn)確度高.光單色吸收檢測(cè)系分光光度計(jì)的基本組分光光度計(jì)的主要部可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375氙燈：紫外、可見(jiàn)光區(qū)均可用作光 鎢燈（熱輻射光源氫

氙 氫色：光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的玻璃350～3200nm,石英185～4000nm光柵

分辨性能好,使用方便 吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊.檢流計(jì)(指示器吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比?毛準(zhǔn)光毛

光電倍增管(PhotomultiplierTube,160~700

1個(gè)光子可產(chǎn)生106～107個(gè)電722型分光光波長(zhǎng)范圍：330～800nm多堿陰極真空300～850 ：2對(duì) 分光光度計(jì)的基本可變波長(zhǎng)單光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)示意光源

反光

參比光子檢光子檢

放大

檢測(cè)濾光片單色 樣品 反光扇形正面

雙光束型可以消除光源強(qiáng)度變化的影響單光雙光雙波多通道器（MultichannelInstruments）Photodiodearrays同時(shí)測(cè)量200～820nm范圍內(nèi)的整個(gè)光譜比單個(gè)檢測(cè)器快316倍,信噪比增加3161/2倍.纖維光度將光度計(jì)放入樣品中位測(cè)量環(huán)境和多通道二極管陣列分光光度計(jì)光路示意纖維光度計(jì)示意鍍鋁反纖維光度NanoDrop2000cmicro-volumesectro99.1熒光（磷光）光譜 光致發(fā)光的基本原熒光現(xiàn)象的熒 : : ～10分子吸光與發(fā)光示蒽的激發(fā)光譜（吸收光譜）和發(fā)射光譜（熒光光譜發(fā)射光EmissionSpectrum,發(fā)射波長(zhǎng):em激發(fā)光譜和激發(fā)光譜：物質(zhì)分子選擇性地收某一波段發(fā)射光譜：受激發(fā)光照射時(shí)，熒光（磷光）鎂-Oxine的激發(fā)光譜和發(fā)射熒光熒光分析法測(cè)中的熒光光譜的特9.1.2躍遷激 *, n* * 發(fā)與n*躍遷相比，*躍遷的大~1000倍，較短，通過(guò)系間竄躍至三重態(tài)的速率也較小，因此*躍遷的熒光共軛效應(yīng)→*芳香族化合物、五元雜環(huán)上取代苯基強(qiáng)熒 H

無(wú)熒 φ= φ=化合

C

C酚酞(無(wú)熒光 熒光 羥基喹啉(弱熒光 紅色熒光聯(lián)二φ=φ=3,4-苯并苯甲3化合 熒光相對(duì)強(qiáng) 苯 0給電子基增強(qiáng)熒光吸電子基減弱甚至熄滅熒光

水楊OC無(wú)熒

有熒

9.1.3F＝2.3Kφεbφ—熒光物質(zhì)的熒光效率(量子產(chǎn)率 吸收激發(fā)光的量子I0—入射光K—檢測(cè)效率（由儀器決定當(dāng)b，I0一定時(shí)濃度：稀溶液 (光源： 應(yīng)強(qiáng)度大，穩(wěn)定溫度：T低，φ增加熒光素鈉的乙醇溶液,T<0℃時(shí),10℃φ增加3%,-80℃時(shí)φ100%酸度 無(wú)無(wú)熒 有熒自吸收現(xiàn)象，使F與c不呈線性關(guān)Fc一一般當(dāng)εbc0.05時(shí)F與c呈線性關(guān)測(cè)定方法—標(biāo)準(zhǔn)確

em(激發(fā)光譜和發(fā)射光譜確定適宜的條件:試劑濃度，pH，T，t以標(biāo)準(zhǔn)溶液作工作曲線 熒光光度計(jì)及熒光分析法的激激發(fā)光源:能夠在紫外-可見(jiàn)光區(qū)連續(xù)發(fā)發(fā)

常用氙燈、高壓燈或激光光源 樣品

單色

檢測(cè)系熒光光度計(jì)示意 氙燈(或高壓燈(200~800 光電倍熒光光度法與吸光光度法的對(duì)MFS與UV/Vis法比測(cè)定方原理靈敏度,測(cè)定方II 10-5～10-6molL-II 發(fā)

molLF gmL比分光光度法高2～4個(gè)數(shù)量級(jí)（在黑背景下檢測(cè)；光源的強(qiáng)度大熒光測(cè)定的選擇蒽的激發(fā)和發(fā)射光

菲在360nm以上 收用可以在400nm測(cè)定蒽的熒光.菲和蒽的熒光光菲和蒽的熒光光

在265nm,蒽和菲均有吸收，選擇性適當(dāng)選擇激發(fā)光的波長(zhǎng)和熒光測(cè)定的波長(zhǎng)應(yīng)用熒 的差別––時(shí)間分辨技術(shù)熒光光度法的生物化學(xué)分析，生理醫(yī)學(xué)研究，臨床檢測(cè)直接測(cè)定能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)帶苯環(huán)的氨基酸：色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸測(cè)定能與熒光試劑反應(yīng)生成熒光化合物的物質(zhì).Ni2+對(duì)Al-PAN絡(luò)合物有熒光猝滅作用，可測(cè)Ni2+(6×10-～6×10-3 -第9章思考題3，思考題8章分析化學(xué)中常用的分離概沉淀分溶劑萃取分離固相萃取一、分離和分析對(duì)象的復(fù)雜分析方法的選擇對(duì)分離的要求 ）干擾組分應(yīng)減小至不再干擾被測(cè)組分的測(cè)2）二、分離富集方法被測(cè)組分A的回收率 分離后A的測(cè)定100% 樣品中A的總加標(biāo)回收率一般要求加標(biāo)回收率在90-110%富集倍

100依據(jù) “相似相溶水中:極性,離子型化合物(親水性)易溶. : 進(jìn)入有機(jī)相 反萃取恢復(fù)親水性目標(biāo)物再回到水分配平 Ao 有機(jī) 水分配系

DD一定溫度下,濃度不太大時(shí),KD為常數(shù),稱D Da(A)W

碘在CCl4-H2O中的分配[I2]O(gL[I2]W(gL分配 [A +[A +D= O [A1]W+[A2]W+,D [I2[I [I

[I2[I (1[I]

I2(I

II,

當(dāng)[I-]

I2(I-

1DKDlg[I-

I-

I2(I

1D萃取E被萃取物在有機(jī)相中的總量 cOVOcWVW

cOVO/cOVO/cWVOcWVW/

DVW/相比

EEDDlg[I-0-----DE萃取次數(shù)與萃取率E RV/VDVw/o D若D=5，R=1時(shí)，一次萃取率若D5，R1/3時(shí)，一次萃

E=E=若D5，R1時(shí)，三次總萃E結(jié)論：用同量溶劑多次萃取效果好萃取分雙硫腙能與20余種M生成螯后,用含EDTA的堿性溶液洗萃取液,HgY被反萃到水相,幾乎無(wú)干擾.中性或弱堿性，可萃取Zn、Cd、Pb、萃取富天然水 物3,4-苯并芘的檢用環(huán)已酮從大量水中萃取，濃縮到小體積，層析分離后熒光法測(cè)定連續(xù)萃取裝水溶 液水溶溶劑比水輕 溶劑比水重液-液萃取的易出 現(xiàn)費(fèi)時(shí)選擇SPE：SolidPhase

燒結(jié) 填填料（極性，非極性

分離正相離子交換(陽(yáng)離子，陰離子自動(dòng)化固相取液-液萃取vs固相取產(chǎn)生大量有機(jī)廢較低回收

顯著減少溶劑定量萃能處理小體積選擇性無(wú)能處理小體積選擇性無(wú)相分離不完全相費(fèi)時(shí)，不易自動(dòng)液-

快速自動(dòng)固相期末總的平衡關(guān)α

能準(zhǔn)確滴

突躍范±

(pM')

i

i

(pM')-

查表得(pM)t(pM)氧化還原平衡處理p2Ox1+p1Red2= n?n n1n2 0.1%:?還

3?

n(還

3 淀絡(luò)酸 ?合效效

n(氧沉應(yīng)應(yīng)

(??) 沉淀溶解平衡處理思

條件

對(duì)對(duì) Ksp=[M]m[A]n=

由Ksp計(jì)算溶解度：以MAMA均不過(guò)量S=[M]=[A

當(dāng)M過(guò)量當(dāng)A

S=[A]=Ksp/[MS=[M]=Ksp/[A 二、滴定分析方酸堿滴pH~T%絡(luò)合滴定pM’~T%沉淀滴定pAg~T%氧化還原滴定‘(V)~滴定突躍的計(jì)算：sp和滴滴定突躍的影響因素(反應(yīng)完全度和濃度緩沖溶液pH的計(jì)基本單元法,摩爾比法指示XO,EBT（緩沖溶液的選擇淀粉;二苯胺磺酸鈉；鄰二氮菲亞鐵K2CrO4鐵銨礬熒光滴定方置換滴定法;析出法。EDTA,AgNO3, K2Cr2O7,I3-,Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液絡(luò)合滴三、重量分析重點(diǎn)掌握：測(cè)Ba2+、SO4晶計(jì)量四、吸光光