血脂檢測方法及臨床意義1課件

血脂檢測方法及臨床意義血脂概述血脂是血漿中的中性脂肪(甘油三酯和膽固醇)和類脂(磷脂、糖脂、固醇、類固醇)的總稱，廣泛存在于人體中。它們是生命細胞的基礎(chǔ)代謝必需物質(zhì)。一般說來，血脂中的主要成份是甘油三酯和膽固醇，其中甘油三酯參與人體內(nèi)能量代謝，而膽固醇則主要用于合成細胞漿膜、類固醇激素和膽汁酸。2023/2/91血漿脂蛋白的分類超速離心法1、乳糜微粒（CM）2、極低密度脂蛋白(VLDL)3、中間密度脂蛋白(IDL)4、低密度脂蛋白(LDL)5、脂蛋白（a）[LP(a)]6、高密度脂蛋白（HDL）2023/2/92血漿脂蛋白的分類電泳法分為乳糜微粒，前β脂蛋白，β脂蛋白和α脂蛋白四條脂蛋白區(qū)帶2023/2/93血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)

大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼。內(nèi)核由不同量的CE和TG組成，表層由載脂蛋白、PL和FC組成，F(xiàn)C及PL的極性基團向外暴露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。2023/2/95載脂蛋白血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白，主要分A、B、C、D、E五類，主要在肝(部分在小腸)合成，載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要組分?；竟δ苁沁\載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識別受體等功能。主要在肝(部分在小腸)合成，按ABC系統(tǒng)命名，各類又可細分幾個亞類，以羅馬數(shù)字表示。2023/2/96高脂蛋白血癥WHO分型2023/2/97高脂蛋白血癥的因素4、藥物：降壓藥，利尿劑，β受體阻滯劑可TG和HDL長期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療可使TG、TC升高5、其他：肝膽系統(tǒng)疾病、胰腺炎、長期過量飲酒2023/2/99低脂蛋白血癥表現(xiàn)1、家族性低β-脂蛋白血癥（肝臟LDL受體上調(diào)，伴膽汁酸過度合成，使血漿中VLDL在轉(zhuǎn)化為LDL前已被肝臟分解代謝。）2、β-脂蛋白缺乏血癥（ApoB合成分泌缺陷，使含ApoB的脂蛋白如CM、VLDL、LDL合成代謝障礙，伴隨脂肪吸收和代謝紊亂，血漿TC也非常低）2023/2/910血脂檢測方法及臨床意義總膽固醇(TC)甘油三酯(TG)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)載脂蛋白A1(ApoA1)載脂蛋白B(ApoB)2023/2/911

化學測定法

化學測定法通常需抽提純化。顯色劑主要有兩類：①醋酸-醋酐-硫酸②高鐵硫酸。

這些顯色反應(yīng)須用強酸試劑，干擾因素多，準確測定有賴于從標本中抽提、皂化、純化過程，因而操作較繁，不適于分析大批量標本，且不適于自動分析。

特點：1．Liberman-Burchard反應(yīng)

1885年Liberman發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色，1890年Burchard用此反應(yīng)測定膽固醇稱為L-B反應(yīng)。

1953年Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等與膽固醇作用生成紫紅色化合物來測定膽固醇，稱為Zak反應(yīng)。2．Zak反應(yīng)

酶測定法特點：

常規(guī)測定中現(xiàn)已廣泛應(yīng)用酶法，酶法具有特異性好，精密度和靈敏度都能很好地滿足臨床實驗室的要求，既可以手工操作，也適合自動分析，但酶法測定中出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效應(yīng)。

采用酶反應(yīng)原理的干化學法頗為實用，其缺點是價格高，精密度差。膽固醇的酶測定法始于70年代。由于操作簡便，試劑無腐蝕性，特別適用于自動生化分析，目前已成為測定膽固醇的主要方法。評價：主要缺點是：優(yōu)點：本法靈敏度高、準確度高、精密度好，線性范圍寬。①某些膽固醇酯酶對膽固醇酯的水解不完全，不能用純膽固醇結(jié)晶以有機溶劑配制的溶液作為TC分析的校準液，而應(yīng)以準確定值的血清作為標準，此校準液（品）相當于三級標準。②表面活性劑，如吐溫-40可以干擾膽固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇6000可使結(jié)果提高1％～2％；③本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素C和谷胱甘肽等的干擾?！緟⒖贾怠?/p>

血清總膽固醇合適范圍：≤5.22mmol/L(200mg/dl)，邊緣升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dl)，升高：≥5.72mmol/L(220mg/dl)。影響TC水平的因素①年齡與性別；②長期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TC增高；③遺傳因素；④其它：如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可能使TC升高。TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標，對于動脈粥樣硬化和冠心病而言，TC是一個明確的危險因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)?！九R床意義】高TC血癥：原發(fā)和繼發(fā)

低TC血癥：原發(fā)和繼發(fā)

血清（漿）甘油三酯測定化學法酶法基本操作：

化學測定法1、抽提：關(guān)鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質(zhì)的影響。2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用KOH作皂化劑3、氧化：過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸4、顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：①甲醛與變色酸(4，5-二羥-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物②甲醛與乙酰丙酮在銨離子(NH4+)存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶磷酸甘油氧化酶法原理用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中TG水解成脂肪酸和甘油，甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）將甘油磷酸化，以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P）產(chǎn)生H2O2，最后以Trinder反應(yīng)顯色，A500nm的值與TG濃度成正比。TG+H2O→甘油+脂肪酸甘油+ATP→G-3-P+ADPG-3-P+O2→磷酸二羥丙酮+H2O2H202+4-AAP+4-氯酚→苯醌亞胺非那腙+H2O22023/2/923

乳酸脫氫酶法

原理：

TG+3H2OLPL

Glycerol+3RCOOHGlycerol+ATPGK+Mg2+G-3-P+ADPADP+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶丙酮酸+ATP丙酮酸+NADHLDHNAD++乳酸

由于反應(yīng)消耗NADH，故可利用NADH在340nm吸光度降低來測定甘油三脂的濃度。評價：

本法結(jié)果準確，但靈敏度較低，試劑也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等干擾物質(zhì)，所以測定時除了要做試劑空白外，還要做標本空白甘油三酯的參考范圍TG0.56---1.70mmol/L升高：＞1.70mmol/L2023/2/929

高密度脂蛋白測定常以測定HDL-C含量代表HDL水平。參考方法:

超速離心分離HDL，然后用化學法（ALKB法）或酶法測定其膽固醇含量，此法需特殊設(shè)備，而且不易常握。常規(guī)方法:1．磷鎢酸-鎂法2．HDL直接測定法HDL直接測定法大致分三類，分別是:聚乙二醇/抗體包裹法酶修飾法選擇性抑制法，又稱掩蔽法，選擇性抑制法原理分兩步：第一試劑用聚陰離子及分散型表面活性劑（反應(yīng)抑制劑），后者與LDL、VLDL、CM表面的疏水基團有高度親和力，吸附在這些脂蛋白表面形成掩蔽層，但不發(fā)生沉淀，能抑制這類脂蛋白中的膽固醇與酶試劑反應(yīng)。第二試劑含膽固醇測定酶及具有對HDL表面的親水基團有親和力的表面活性劑（反應(yīng)促進劑），使酶與HDL中的膽固醇起反應(yīng)2023/2/932HDL-C合適范圍：≥1.04mmol/L(40mg/dl),＜0.91mmol/L(35mg/dl)為減低?！緟⒖贾怠俊九R床意義】

流行病學與臨床研究證明，HDL-C與冠心病發(fā)病呈負相關(guān)，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危險因素。HDL-C大于1.55mmol/L被認為是冠心病的“負”危險因素。HDL-C下降還多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血癥往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降，適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-C升高。

低密度脂蛋白測定1．Friedewald公式法LDL-C＝TC－HDL-C－TG/5（以mg/dl為單位時），或LDL-C＝TC－HDL-C－TG/2.2（以mmol/L為單位時）。2．聚乙烯硫酸鹽沉淀法本法并非對LDL-C作直接測定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）選擇性沉淀血清中LDL，再以血清TC減去上清液（含HDL與VLDL）膽固醇即得LDL-C值。3．直接測定法:兩類目前各類方法測定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在內(nèi)LDL-C合適范圍：≤3.12mmol/L(120mg/dl)，邊緣升高：3.15～3.61mmol/L(121～139mg/dl)

升高：≥3.64mmol/L(140mg/dl)。【參考值】【臨床意義】LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素。由于TC水平同時也受HDL-C水平的影響，所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險因素指標。美國國家膽固醇教育計劃成人治療專業(yè)組規(guī)定以LDL-C水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達到的治療目標。

脂蛋白(a)測定Lp(a)測定有兩類方法

一是以免疫化學原理測定其所含Apo(a)，結(jié)果以Lp(a)質(zhì)量表示，也有以Lp(a)顆粒數(shù)mmol/L表示的。另一類方法測定其所含的膽固醇，結(jié)果以Lp(a)-C表示。目前大都用免疫學方法測定。

正常人群的Lp(a)水平呈明顯的正偏態(tài)分布，大多在200mg/L以下，平均數(shù)在120～180mg/L，中位數(shù)約100mg/L。Lp(a)水平高于醫(yī)學決定水平（300mg/L），冠心病危險性明顯增高?！緟⒖贾怠俊九R床意義】

血清Lp(a)水平是動脈粥樣硬化性疾病的獨立危險因素,與動脈粥樣硬化成正相關(guān)。

血清載脂蛋白測定免疫化學法：單向免疫擴散（RID）電免疫分析（如火箭電泳法）放射免疫分析（RIA）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）等早期目前：

目前比較適合于臨床實驗室的是免疫濁度法，包括免疫散射比濁法（INA）和免疫透射比濁法（ITA）?！緟⒖贾怠浚篈poAI：1.00～1.60g/L，ApoB：0.60～1.10g/L。【臨床意義】

ApoAI是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白，ApoB是LDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。在某些病理情況下，ApoAI與HDL和ApoB與LDL并非成正相關(guān)，因此，同時測定載脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL對病理發(fā)生狀態(tài)的分析很有幫助。冠心病、腎病綜合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。臨床上常將ApoAI和ApoB比值作為冠心病的危險指標。載脂蛋白參考值A(chǔ)poA1：1.00—1.5g/LApoB：0.8—1.00g/L2023/2/940糖的來源與去路2023/2/941葡萄糖的測定葡萄糖氧化酶法（首選方法）己糖激酶法葡萄糖脫氫酶法2023/2/942葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶（GOD）將葡萄糖水解為葡萄糖酸和過氧化氫，后者在過氧化物酶（POD）和色素原性氧受體存在下，將過氧化氫分解為水和氧，同時使色素原性氧受體4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即Trider反應(yīng)。其色澤深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比。葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖酸內(nèi)酯+H2O22H2O2+4-氨基安替比林+酚→紅色醌類化合物2023/2/943血糖的臨床意義生理性或暫時性增高：餐后，攝入高糖飲食，情緒激動等病理性高血糖：①糖尿?、诩卓海I上腺皮質(zhì)功能亢進等③應(yīng)激性高血糖，如顱腦損傷，顱內(nèi)壓增高等④脫水引起的血液濃縮，如嘔吐、腹瀉、高熱等⑤嚴重的肝硬化不能使糖轉(zhuǎn)化為肝糖原儲存⑥胰腺病變2023/2/944血糖的臨床意義生理性或暫時性低血糖饑餓和劇烈運動等病理性低血糖可見于胰島β細胞增