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專題(zhuāntí)二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題(kètí)3分解纖維素的微生物的分離**第一頁(yè),共38頁(yè)。一.基礎(chǔ)知識(shí)㈠.纖維素與纖維素酶1.纖維素纖維素是一種(yīzhǒnɡ)由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物,是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。第二頁(yè),共38頁(yè)。思考:纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)(wùzhì),植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸,但卻不會(huì)在地球上大量的積累,為什么?纖維素能被土壤中某些微生物分解利用,這是因?yàn)樗鼈?tāmen)能夠產(chǎn)生纖維素酶。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然(tiānrán)產(chǎn)物。第三頁(yè),共38頁(yè)。2.纖維素酶
纖維素酶是一種(yīzhǒnɡ)復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素一.基礎(chǔ)知識(shí)㈠.纖維素與纖維素酶第四頁(yè),共38頁(yè)。能分解纖維素的微生物,有各種(ɡèzhǒnɡ)細(xì)菌、真菌和少數(shù)放線菌。一.基礎(chǔ)知識(shí)㈠.纖維素與纖維素酶3.纖維素的分解(fēnjiě):第五頁(yè),共38頁(yè)。一.基礎(chǔ)知識(shí)㈡.纖維素分解(fēnjiě)細(xì)菌的篩選:1.方法(fāngfǎ):剛果紅染色法。第六頁(yè),共38頁(yè)。剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,紅色復(fù)合物無法形成,出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,我們可以通過是否產(chǎn)生(chǎnshēng)透明圈來篩選纖維素分解菌。2.原理(yuánlǐ):一.基礎(chǔ)知識(shí)㈡.纖維素分解細(xì)菌(xìjūn)的篩選:第七頁(yè),共38頁(yè)。該方法可以通過(tōngguò)顏色反應(yīng)直接篩選。一.基礎(chǔ)知識(shí)㈡.纖維素分解細(xì)菌(xìjūn)的篩選:3.優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn):第八頁(yè),共38頁(yè)。第九頁(yè),共38頁(yè)。二.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作(cāozuò)㈠.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):土壤(tǔrǎng)取樣選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落第十頁(yè),共38頁(yè)。①分布(fēnbù)環(huán)境1、土壤(tǔrǎng)取樣:富含纖維素的環(huán)境(huánjìng)中操作步驟由于生物適應(yīng)一定的環(huán)境,環(huán)境對(duì)生物有選擇作用,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對(duì)提高,因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。②原因第十一頁(yè),共38頁(yè)。③實(shí)例:樹林中多年落葉形成的腐殖土,多年積累(jīlěi)的枯枝敗葉等。④討論:如果找不到(bùdào)合適的環(huán)境,可以將濾紙埋在土壤中,將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋在土壤中多深?答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中,實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存(shēngcún)的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約10cm左右的土壤中。第十二頁(yè),共38頁(yè)。2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度(nóngdù),以確保能夠從樣品中分離所需要的微生物。①目的(mùdì):閱讀書本P29纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方,回答問題。第十三頁(yè),共38頁(yè)。答:用牛肉膏蛋白(dànbái)胨培養(yǎng)基與之對(duì)照。或者將纖維素改為葡萄糖。2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)②制備(zhìbèi)選擇培養(yǎng)基:A、旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基?為什么?答:是液體培養(yǎng)基,原因是配方中無凝固劑(瓊脂)B、這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用?如果具有,是如何進(jìn)行選擇的?答:有選擇作用,本配方中以纖維素作為唯一碳源,只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。C、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn),說明選擇培養(yǎng)基的作用第十四頁(yè),共38頁(yè)。稱取土樣20g,在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上,在30℃下振蕩培養(yǎng)1~2d,至培養(yǎng)基變混濁。吸取一定的培養(yǎng)液(約5mL),轉(zhuǎn)移至另一瓶新鮮(xīnxiān)的選擇培養(yǎng)基中,以同樣的方法培養(yǎng)到培養(yǎng)液變渾濁。③操作(cāozuò):2、選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)第十五頁(yè),共38頁(yè)。提示:在選擇培養(yǎng)的條件(tiáojiàn)下,可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件(tiáojiàn)的微生物得到迅速繁殖,而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件(tiáojiàn)的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用?!寂詸谒伎碱}〗為什么選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物?第十六頁(yè),共38頁(yè)。按照課題1的稀釋(xīshì)操作方法,將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋(xīshì)101~107倍。3.梯度(tīdù)稀釋第十七頁(yè),共38頁(yè)。4.將樣品涂布到鑒別(jiànbié)纖維素分解菌的培養(yǎng)基上⑴制備(zhìbèi)鑒別培養(yǎng)基:配方見書本(shūběn)29頁(yè)。操作過程見課題1(2)涂布平板:將稀釋度為104~106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培養(yǎng)基上,30℃倒置培養(yǎng)。第十八頁(yè),共38頁(yè)。5.剛果紅染色法方法一:先,再加入剛果紅進(jìn)行(jìnxíng)顏色反應(yīng)。方法二:在時(shí)就加入剛果紅。培養(yǎng)(péiyǎng)微生物倒平板(píngbǎn)第十九頁(yè),共38頁(yè)?!寂詸谒伎碱}〗這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)與不足?染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一方法二顏色(yánsè)反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生(fāshēng)混雜操作簡(jiǎn)便不存在菌落混雜問題1.產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素,形成明顯的透明圈。第二十頁(yè),共38頁(yè)。在產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落,挑取并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上,在300C-370C培養(yǎng),可獲得(huòdé)純化培養(yǎng)。6、純化(chúnhuà)培養(yǎng)第二十一頁(yè),共38頁(yè)。提示:課題2是將土樣制成的菌懸液直接(zhíjiē)涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上,直接(zhíjiē)分離得到菌落。本課題先通過選擇培養(yǎng),使纖維素分解菌得到增殖后,再將菌液涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致?!寂詸谒伎碱}〗本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些(nǎxiē)異同?第二十二頁(yè),共38頁(yè)。第二十三頁(yè),共38頁(yè)。㈡.操作過程:1.土壤取樣:采集土樣時(shí),應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境。若找不到合適環(huán)境,可將濾紙埋在土壤中一個(gè)月左右,也會(huì)有能分解纖維素的微生物生長(zhǎng)。〖旁欄思考題〗為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌?答:生物適應(yīng)一定環(huán)境,環(huán)境對(duì)生物具有選擇作用,只有在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分解菌的含量才會(huì)高于其它普通環(huán)境,從而提高獲得(huòdé)目的微生物的幾率?!寂詸谒伎碱}〗將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深?答:人工設(shè)置適宜環(huán)境,使纖維素分解菌相對(duì)聚集。將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中。第二十四頁(yè),共38頁(yè)。2.選擇培養(yǎng)⑴.選擇培養(yǎng)的目的:增加纖維素分解菌的濃度,以確保(quèbǎo)能夠從樣品中分離到所需要的微生物。第二十五頁(yè),共38頁(yè)。⑶選擇培養(yǎng):將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中,將錐形瓶固定在搖床上,在一定溫度下震蕩培養(yǎng)1~2天,直至(zhízhì)培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。第二十六頁(yè),共38頁(yè)。課題(kètí)成果評(píng)價(jià)(一)培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落(jūnluò):對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落(jūnluò)生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落(jūnluò),則說明可能獲得了分解纖維素的微生物(二)分離的結(jié)果是否一致:由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量,因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同,學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。第二十七頁(yè),共38頁(yè)。1.培養(yǎng)流感病毒時(shí),應(yīng)選用()A.固體培養(yǎng)基
B.含有多種無機(jī)鹽的培養(yǎng)液C.活的雞胚
D.無菌的牛肉湯2.微生物(除病毒外)需要從外界(wàijiè)吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長(zhǎng)和繁殖。下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)的說法正確的是()A.乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的
B.微生物生長(zhǎng)中不可缺少的一些微量的無機(jī)物稱為生長(zhǎng)因子
C.培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對(duì)微生物的增殖越有利D.生長(zhǎng)因子一般是酶或核酸的組成成分,微生物本身合成這些生長(zhǎng)因子的能力往往不足CD第二十八頁(yè),共38頁(yè)。3.在接種操作的過程(guòchéng)中,不正確的是()A.要將接種環(huán)灼燒滅菌
B.取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C.將接種環(huán)伸入試管內(nèi),先接觸長(zhǎng)菌多的部位
D.接種后還要將管口滅菌加塞4.高壓蒸氣滅菌的原理是()A.高壓使細(xì)菌DNA變性
B.高壓使細(xì)菌蛋白質(zhì)凝固變性C.高溫燙死細(xì)菌
D.高溫使細(xì)菌DNA變性CB第二十九頁(yè),共38頁(yè)。5.在105稀釋度下,平板(píngbǎn)上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)為50則每克樣品中的菌落數(shù)是………()A.5×107B.50C.5×108D.50×36.下列屬于菌落特征的是…………()①菌落的形狀②菌落的大小③菌落的多少④隆起程度⑤顏色⑥有無莢膜A.①②③④B.①②④⑤C.②③④⑥D(zhuǎn).①②③④⑤⑥7.能排除培養(yǎng)基是否有雜菌污染的方法是……()A.將未接種的培養(yǎng)基放在實(shí)驗(yàn)桌上培養(yǎng)B.將未接種的培養(yǎng)基放在窗臺(tái)上培養(yǎng)C.將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)D.將已接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)ABC第三十頁(yè),共38頁(yè)。8、(20分)某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(xìjūn)(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題:(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的(mùdì)是篩選,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。目的(mùdì)菌
選擇性
第三十一頁(yè),共38頁(yè)。某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題(wèntí):(北京卷)(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的,實(shí)驗(yàn)(shíyàn)需要振蕩培養(yǎng),由此推測(cè)“目的菌”的代謝類型是?;衔顰異養(yǎng)需氧第三十二頁(yè),共38頁(yè)。某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。研究人員(rényuán)用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題:(3)培養(yǎng)若干天后,應(yīng)選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)瓶中化合物A含量的培養(yǎng)液,接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng),使“目的菌”的數(shù)量。減少(jiǎnshǎo)
增加
第三十三頁(yè),共38頁(yè)。某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解(jiànɡjiě)的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解(jiànɡjiě)化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題:(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)(péiyǎng)時(shí),常采用方法接種,獲得單菌落后繼續(xù)篩選。劃線(huáxiàn)第三十四頁(yè),共38頁(yè)。某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的(mùdì)菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題:(5)若研究“目的菌”的生長(zhǎng)(shēngzhǎng)規(guī)律,將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng),可采用的方法進(jìn)行計(jì)數(shù),以時(shí)間為橫坐標(biāo),以為縱坐標(biāo),繪制生長(zhǎng)(shēngzhǎng)曲線。細(xì)菌(xìjūn)數(shù)目的對(duì)數(shù)第三十五頁(yè),共38頁(yè)。某化工廠的污水池中,含有一種有害的、難于降解的有機(jī)(yǒujī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題:(6)實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)束后,使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行處理后,才能倒掉。滅菌(mièjūn)第三十六頁(yè),共38頁(yè)。根據(jù)用途分選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)(cùjìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物。例如:伊紅和美藍(lán),和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈黑色(老教材說法:深紫色,帶有金屬光澤),鑒別大腸桿菌第三十七頁(yè),共38頁(yè)。85.每一年,我都更加相信生命的浪費(fèi)是在于:我們沒有獻(xiàn)出愛,我們沒有使用力量,我們表現(xiàn)出自私的謹(jǐn)慎,不去冒險(xiǎn),避開痛苦,也失去了快樂。――[約翰·B·塔布]86.微笑,昂首闊步,作深呼吸,嘴里哼著歌兒。倘使你不會(huì)唱歌,吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一來,你想讓自己煩惱都不可能。――[戴爾·卡內(nèi)基]87.當(dāng)一切毫無希望時(shí),我看著切石工人在他的石頭上,敲擊了上百次,而不見任何裂痕出現(xiàn)。但在第一百零一次時(shí),石頭被劈成兩半。我體會(huì)到,并非那一擊,而是前面的敲打使它裂開。――[賈柯·瑞斯]88.每個(gè)意念都是一場(chǎng)祈禱。――[詹姆士·雷德非]89.虛榮心很難說是一種惡行,然而一切惡行都圍繞虛榮心而生,都不過是滿足虛榮心的手段。――[柏格森]90.習(xí)慣正一天天地把我們的生命變成某種定型的化石,我們的心靈正在失去自由,成為平靜而沒有激情的時(shí)間之流的奴隸。――[托爾斯泰]91.要及時(shí)把握夢(mèng)想,因?yàn)閴?mèng)想一死,生命就如一只羽翼受創(chuàng)的小鳥,無法飛翔。――[蘭斯頓·休斯]92.生活的藝術(shù)較像角力的藝術(shù),而較不像跳舞的藝術(shù);最重要的是:站穩(wěn)腳步,為無法預(yù)見的攻擊做準(zhǔn)備。――[瑪科斯·奧雷利阿斯]93.在安詳靜謐的大自然里,確實(shí)還有些使人煩惱.懷疑.感到壓迫的事。請(qǐng)你看看蔚藍(lán)的天空和閃爍的星星吧!你的心將會(huì)平靜下來。[約翰·納森·愛德瓦茲]94.對(duì)一個(gè)適度工作的人而言,快樂來自于工作,有如花朵結(jié)果前擁有彩色的花瓣。――[約翰·拉斯金]95.沒有比時(shí)間更容易浪費(fèi)的,同時(shí)沒有比時(shí)間更珍貴的了,因?yàn)闆]有時(shí)間我們幾乎無法做任何事。――[威廉·班]96.人生真正的歡欣,就是在于你自認(rèn)正在為一個(gè)偉大目標(biāo)運(yùn)用自己;而不是源于獨(dú)自發(fā)光.自私渺小的憂煩軀殼,只知抱怨世界無法帶給你快樂。――[蕭伯納]97.有三個(gè)人是我的朋友愛我的人.恨我的人.以及對(duì)我冷漠的人。愛我的人教我溫柔;恨我的人教我謹(jǐn)慎;對(duì)我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格]98.過去的事已經(jīng)一去不復(fù)返。聰明的人是考慮現(xiàn)在和未來,根本無暇去想過去的事。――[英國(guó)哲學(xué)家培根]99.真正的發(fā)現(xiàn)之旅不只是為了尋找全新的景色,也為了擁有全新的眼光。――[馬塞爾·普勞斯特]100.這個(gè)世界總是充滿美好的事物,然而能看到這些美好事物的人,事實(shí)上是少之又少。――[羅丹]101.稱贊不但對(duì)人的感情,而且對(duì)人的理智也發(fā)生巨大的作用,在這種令人愉快的影響之下,我覺得更加聰明了,各種想法,以異常的速度接連涌入我的腦際。――[托爾斯泰]102.人生過程的景觀一直在變化,向前跨進(jìn),就看到與初始不同的景觀,再上前去,又是另一番新的氣候――。[叔本華]103.為何我們?nèi)绱思臣秤诿?,如果一個(gè)人和他的同伴保持不一樣的速度,或許他耳中聽到的是不同的旋律,讓他隨他所聽到的旋律走,無論快慢或遠(yuǎn)近。――[梭羅]104.我們最容易不吝惜的是時(shí)間,而我們應(yīng)該最擔(dān)心的也是時(shí)間;因?yàn)闆]有時(shí)間的話,我們?cè)谑澜缟鲜裁匆膊荒茏?。――[威廉·彭]105.人類的悲劇,就是想延長(zhǎng)自己的壽命。我們往往只憧憬地平線那端的神奇【違禁詞,被屏蔽】,而忘了去欣賞今天窗外正在盛開的玫瑰花。――[戴爾·卡內(nèi)基]106.休息并非無所事事,夏日炎炎時(shí)躺在樹底下的草地,聽著潺潺的水聲,看著飄過的白云,亦非浪費(fèi)時(shí)間。――[約翰·羅伯克]107.沒有人會(huì)只因年齡而衰老,我們是因放棄我們的理想而衰老。年齡會(huì)使皮膚老化,而放棄熱情卻會(huì)使靈魂老化。――[撒母耳·厄爾曼]108.快樂和智能的區(qū)別(qūbié)在于:自認(rèn)最快樂的人實(shí)際上就是最快樂的,但自認(rèn)為最明智的人一般而言卻是最愚蠢的。――[卡雷貝·C·科爾頓]109.每個(gè)人皆有連自己都不清楚的潛在能力。無論是誰(shuí),在千鈞一發(fā)之際,往往能輕易解決從前認(rèn)為極不可能解決的事。――[戴爾·卡內(nèi)基]110.每天安靜地坐十五分鐘·傾聽你的氣息,感覺它,感覺你自己,并且試著什么都不想。――[艾瑞克·佛洛姆]111.你知道何謂沮喪---就是你用一輩子工夫,在公司或任何領(lǐng)域里往上攀爬,卻在抵達(dá)最高處的同時(shí),發(fā)現(xiàn)自己爬錯(cuò)了墻頭。--[坎伯]112.「?jìng)ゴ蟆惯@個(gè)名詞未必非出現(xiàn)在規(guī)模很大的事情不可;生活中微小之處,照樣可以偉大。――[布魯克斯]113.人生的目的有二:先是獲得你想要的;然后是享受你所獲得的。只有最明智的人類做到第二點(diǎn)。――[羅根·皮沙爾·史密斯]114.要經(jīng)常聽.時(shí)常想.時(shí)時(shí)學(xué)習(xí),才是真正的生活方式。對(duì)任何事既不抱希望,也不肯學(xué)習(xí)的人,沒有生存的資格。――[阿薩·赫爾帕斯爵士]115.旅行的精神在于其自由,完全能夠隨心所欲地去思考.去感覺.去行動(dòng)的自由。――[威廉·海茲利特]116.昨天是張退票的支票,明天是張信用卡,只有今天才是現(xiàn)金;要善加利用。――[凱·里昂]
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