乙肝病毒檢測(cè)的方法學(xué)評(píng)價(jià)教案資料

乙肝病毒檢測(cè)(jiǎncè)——方法學(xué)評(píng)價(jià)(píngjià)第一頁(yè)，共34頁(yè)。乙肝病毒結(jié)構(gòu)(jiégòu)第二頁(yè)，共34頁(yè)。（一）乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)(jiégòu)特點(diǎn)HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般(yībān)不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好第三頁(yè)，共34頁(yè)?；颊哐?xuèqīng)中存在三種基本形態(tài)大球型顆粒(kēlì)，又稱Dane顆粒(kēlì)；小球型顆粒(kēlì)；管型顆粒(kēlì)小球型顆粒(kēlì)；管型顆粒(kēlì)管型顆粒(kēlì)第四頁(yè)，共34頁(yè)。乙型肝炎病毒(bìngdú)的實(shí)驗(yàn)室診斷（一）血清學(xué)檢查(jiǎnchá)（二）生化學(xué)檢查(jiǎnchá)（三）HBVDNA、基因型和變異檢查(jiǎnchá)

第五頁(yè)，共34頁(yè)。血清學(xué)檢查(jiǎnchá)項(xiàng)目(xiàngmù)：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)第六頁(yè)，共34頁(yè)。HBsAg–感染的標(biāo)志Anti-HBs–既往感染/接種疫苗Anti-HBcIgM–急性感染標(biāo)志Anti-HBcIgG–既往或慢性感染HBeAg–急性病毒(bìngdú)復(fù)制，有傳染性Anti-HBe–病毒(bìngdú)不再?gòu)?fù)制HBV-DNA–急性病毒(bìngdú)復(fù)制，比HBeAg更準(zhǔn)確；主要用于監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)第七頁(yè)，共34頁(yè)。HBV血清學(xué)標(biāo)志物的臨床意義感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗HBc(IgG)抗HBe抗HBs臨床意義1+-----急性乙肝潛伏期后期，攜帶者。2++----急性乙肝早期或潛伏期3+++---急性乙肝早期4++-++--急性乙肝后期5++-+----急性或慢性乙肝，有HBV復(fù)制6+++-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或無(wú)癥狀攜帶者7+-+-++-陰性慢性乙肝8+---+-慢性乙肝，無(wú)或低度HBV復(fù)制，乙肝恢復(fù)期，既往感染，隱匿性9---+-+乙肝恢復(fù)期，既往感染，隱匿性10-----+慢性乙肝，接種過(guò)乙肝疫苗。第八頁(yè)，共34頁(yè)。兩對(duì)半的意義(yìyì)—乙型肝炎的診斷(zhěnduàn)—判斷傳染性—判斷預(yù)后—篩查獻(xiàn)血員—流行病學(xué)調(diào)查第九頁(yè)，共34頁(yè)。乙肝三系定性檢查是用來(lái)(yònɡlái)判斷是否感染乙肝或粗略估計(jì)病毒復(fù)制水平的初步檢查，對(duì)患者病情程度的評(píng)估參考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性檢查的時(shí)候，應(yīng)結(jié)合肝功能檢查、乙肝病毒DNA檢查、B超檢查等來(lái)判定病情的輕重，第十頁(yè)，共34頁(yè)。ELISA檢測(cè)靈敏低的原因(yuányīn)及局限ELISA法受其自身敏感性和特異性的限制;HBVS和前C基因區(qū)出現(xiàn)(chūxiàn)位點(diǎn)突變導(dǎo)致HBsAg和HBeAg表達(dá)缺陷。影響因素多,如加樣時(shí)間,試劑平衡時(shí)間,樣本溶血程度等等。特別是低濃度樣本易導(dǎo)致假陰性結(jié)果,使弱陽(yáng)性樣本漏檢。急性感染的窗口期;HBsAg檢測(cè)方法靈敏度不足;血清亞型的漏檢等。標(biāo)本中病毒顆粒少;第十一頁(yè)，共34頁(yè)。血清學(xué)檢測(cè)(jiǎncè)的局限性HBV具有“檢測(cè)窗口期假陰性結(jié)果無(wú)法(wúfǎ)檢測(cè)突變株及抗體第十二頁(yè)，共34頁(yè)。乙肝病毒的定量(dìngliàng)檢測(cè)1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量檢測(cè)：1）參考值：0-0.05IU/mL2）臨床意義：（1）可作為HBV攜帶者乙肝病毒復(fù)制的參考指標(biāo)（2）評(píng)價(jià)拉美呋定的治療效果（3）監(jiān)測(cè)應(yīng)用alpha-干擾素治療病人(bìngrén)的乙肝病毒復(fù)制（4）確定肝移植病人(bìngrén)免疫球蛋白的使用劑量第十三頁(yè)，共34頁(yè)。2.乙肝表面(biǎomiàn)抗體（抗-HBs）定量測(cè)定：是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生(chǎnshēng)的特異性抗體，是一種保護(hù)性抗體，能中和HBV。（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保護(hù)性，需要注射乙肝疫苗（3針：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保護(hù)性，但較弱，需要乙肝疫苗強(qiáng)化注射（1針）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很強(qiáng)的保護(hù)性，不需要注射乙肝疫苗。第十四頁(yè)，共34頁(yè)。3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高說(shuō)明病毒復(fù)制，具有很強(qiáng)的傳染性。4、乙肝病毒e抗體(kàngtǐ)（抗-HBe）抗-HBe陽(yáng)性說(shuō)明病毒復(fù)制減少，傳染性弱，但并非沒(méi)有傳染性。抗HBe不是保護(hù)性抗體(kàngtǐ)。第十五頁(yè)，共34頁(yè)。5、乙肝病毒核心抗體（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗體，有IgG和IgM兩種形式(xíngshì)。IgM在早期出現(xiàn)，而IgG在恢復(fù)期出現(xiàn)，可持續(xù)多年或終身存在。第十六頁(yè)，共34頁(yè)。乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)(jiǎncè)的優(yōu)點(diǎn)由于乙肝病毒容易(róngyì)發(fā)生變異，再加上乙肝定性檢測(cè)方法的局限性，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，導(dǎo)致不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)乙肝的感染，也就不能得到及時(shí)的治療，對(duì)醫(yī)護(hù)人員和其他患者也存在著被感染的威脅。乙肝五項(xiàng)定量應(yīng)用目前最先進(jìn)的化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，避免了假陰性和漏檢的問(wèn)題，而且準(zhǔn)確，尤其對(duì)乙肝病人的療效觀察提供了依據(jù)，這是檢驗(yàn)發(fā)展的趨勢(shì)。第十七頁(yè)，共34頁(yè)。兩對(duì)半定量檢測(cè)極大地提高了檢測(cè)的靈敏度，LiCa技術(shù)檢測(cè)HBsAg靈敏度可達(dá)0．5ng/ml，而ELISA檢測(cè)HBsAg達(dá)到2ng/ml時(shí)才會(huì)陽(yáng)性。急性乙肝早期定量能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，幾乎能與PreSi同時(shí)檢測(cè)，在病程觀察中大大縮短了“窗口期”，而酶標(biāo)檢測(cè)在乙肝早期往往HBsAg呈陰性。慢性乙肝一些患者由于機(jī)體常缺乏對(duì)HBV包膜蛋白的免疫應(yīng)答，HBsAg表達(dá)較低，酶標(biāo)檢測(cè)可出現(xiàn)HBsAg和HBsAb均陰性的情況，而定量檢測(cè)則可避免這些情況的出現(xiàn)，為正確判斷病情(bìngqíng)提供依據(jù)。靈敏度如病毒發(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA測(cè)不出抗原，而定量檢測(cè)具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)極有可能同時(shí)檢測(cè)出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量與病人對(duì)HBsAg細(xì)胞免疫成反比關(guān)系，而肝功能改變則與此種細(xì)胞免疫成正比。定量HBsAg是反映這一關(guān)系的唯一手段?？砂l(fā)現(xiàn)低濃度的HBsAg攜帶者，特別是一些群體如醫(yī)務(wù)工作者及病人家屬等。第十八頁(yè)，共34頁(yè)。定量(dìngliàng)檢測(cè)意義監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展評(píng)估藥物療效(liáoxiào)指導(dǎo)疫苗接種第十九頁(yè)，共34頁(yè)。國(guó)內(nèi)疫苗(yìmiáo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)無(wú)應(yīng)答(yìngdá)者:無(wú)抗體產(chǎn)生(5%)----加強(qiáng)計(jì)量復(fù)種低應(yīng)答(yìngdá)者:<10IU/L(10%)----加強(qiáng)計(jì)量復(fù)種中應(yīng)答(yìngdá)者:10-100IU/L(65%)----無(wú)須復(fù)種高應(yīng)答(yìngdá)者:>100IU/L(20%)----無(wú)須復(fù)種第二十頁(yè)，共34頁(yè)。PCR技術(shù)在乙肝方面(fāngmiàn)的應(yīng)用乙型肝炎病毒(bìngdú)屬嗜肝DNA病毒(bìngdú)科（hepadnaviridae），基因組長(zhǎng)度3.2kb目前感染人類最小的DNA病毒(bìngdú)部分雙鏈環(huán)狀DNA。第二十一頁(yè)，共34頁(yè)。定量(dìngliàng)PCR的特點(diǎn)可定量結(jié)果，準(zhǔn)確(zhǔnquè)靈敏地反應(yīng)了病原體的感染和治療恢復(fù)情況光譜分析儀直讀結(jié)果，自動(dòng)分析，增強(qiáng)了靈敏性和客觀性。第二十二頁(yè)，共34頁(yè)。第二十三頁(yè)，共34頁(yè)。HBV基因及編碼蛋白第二十四頁(yè)，共34頁(yè)。HBV-DNA定量檢測(cè)(jiǎncè)的臨床應(yīng)用慢性乙肝診斷(zhěnduàn)治療監(jiān)測(cè)和療效評(píng)價(jià)跟蹤隨訪預(yù)后判斷第二十五頁(yè)，共34頁(yè)。（二）HBV-DNA與“兩對(duì)半”1.“兩對(duì)半”：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；FQ-PCR：檢測(cè)的是HBV本身(běnshēn)的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。2.“攜帶者”、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。第二十六頁(yè)，共34頁(yè)。3.血清學(xué)指標(biāo)(－)不能排除HBV感染(gǎnrǎn)。4.也可能出現(xiàn)HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。5.HBsAb(＋)、HBcAb(＋)、HBeAb(＋)三抗體陽(yáng)性與HBVDNA2.5×103copy/ml結(jié)果解釋。第二十七頁(yè)，共34頁(yè)。HBV-DNA檢測(cè)(jiǎncè)的臨床意義⒈診斷方面(fāngmiàn)：⑴HBVDNA是HBV存在最直接的依據(jù)⑵HBVDNA是HBV復(fù)制的標(biāo)志⑶HBVDNA是患者具有傳染性的標(biāo)志⑷對(duì)HBV-M起補(bǔ)充作用：①HBeAg(﹣)/抗HBe(﹢)乙型肝炎（前C區(qū)變異）②HBsAg(﹣)乙型肝炎（S區(qū)變異）③低水平感染單項(xiàng)抗HBc(﹢)乙型肝炎第二十八頁(yè)，共34頁(yè)。⒉療效判斷：HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物(yàowù)療效最敏感的指標(biāo)⒊預(yù)后判斷HBVDNA水平與病情有一定的關(guān)系第二十九頁(yè)，共34頁(yè)。一、乙肝病毒DNA檢查可檢查乙肝病毒的復(fù)制狀況。如乙肝病毒DNA測(cè)定值>1000copies/ml，就提示乙肝病毒有復(fù)制，而且病毒數(shù)量的高低與病毒復(fù)制的程度成正相關(guān)。若結(jié)果陰性(yīnxìng)，則表明病毒處于不活躍階段，病情比較平穩(wěn)。二、乙肝病毒DNA檢查還是判斷乙肝病毒傳染性的重要指標(biāo)。如果乙肝病毒DNA測(cè)定值>1000copies/ml，常提示具有傳染性，且檢測(cè)值越高就說(shuō)明乙肝病毒復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。第三十頁(yè)，共34頁(yè)。三、乙肝病毒DNA檢查可以作為肝病患者確診病情的主要依據(jù)。乙肝病毒DNA陽(yáng)性者，即使肝功能正常，必要時(shí)也應(yīng)考慮進(jìn)行抗病毒治療。乙肝抗病毒治療的標(biāo)準(zhǔn)就是乙肝病毒DNA>1000copies/ml，且患者轉(zhuǎn)氨酶超過(guò)正常值兩倍，此時(shí)是肝病患者抗病毒治療的最佳時(shí)機(jī)。四、乙肝病毒DNA檢查結(jié)果還可以在一定程度上輔助判斷乙肝病毒是否產(chǎn)生了變異，如在治療過(guò)程中乙肝病毒DNA檢測(cè)結(jié)果由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性時(shí)，則提示病毒已發(fā)生(fāshēng)變異，應(yīng)結(jié)合具體病情重新選擇抗病毒藥物。第三十一頁(yè)，共34頁(yè)?；?jīyīn)檢測(cè)在乙肝診療各階段的應(yīng)用藥物治療方案(fāngàn)的確定（用藥：干擾素、拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋）藥物(yàowù)治療（療效評(píng)價(jià)）前C區(qū)1896位點(diǎn)突變檢測(cè)跟蹤隨訪乙肝病毒定量檢測(cè)確診病毒學(xué)分析乙肝病毒分型檢測(cè)拉米夫定耐藥檢測(cè)阿德福韋耐藥檢測(cè)共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccD