NY/T 678-2003豬偽狂犬病免疫酶試驗方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準

犖犢／犜６７８—２００３

豬偽狂犬病免疫酶試驗方法

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２００３０７３０發(fā)布２００３１００１實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６７８—２００３

前言

本標準的附錄Ａ是規(guī)范性附錄。

本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標準主要起草人：王宏偉、吳清民、童光志、田克恭、陳西釗、蘇敬良、王傳彬。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７８—２００３

豬偽狂犬病免疫酶試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了豬偽狂犬病Ｅ糖蛋白（ｇＥ，即ｇｐⅠ）酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫酶組織化學(xué)試驗方法。

本標準適用于檢測豬血清中的豬偽狂犬病病毒ｇＥ特異性抗體和組織中的豬偽狂犬病病毒抗原。

２犈糖蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗（犵犈犈犔犐犛犃）

２．１材料準備

２．１．１試劑

ａ）ＥＬＩＳＡ抗原包被板；

ｂ）標準陽性血清：偽狂犬病病毒ｇＥ單克隆抗體；

ｃ）標準陰性血清：無偽狂犬病病毒ｇＥ抗體的豬血清；

ｄ）酶結(jié)合物：辣根過氧化物酶（ＨＲＰ）標記的抗偽狂犬病病毒ｇＥ單克隆抗體；

ｅ）磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章；

ｆ）洗滌液：配制見第Ａ．２章；

ｇ）樣品稀釋液：配制見第Ａ．３章；

ｈ）底物溶液：配制見第Ａ．５章；

ｉ）終止液：配制見第Ａ．６章。

２．１．２器材

ａ）酶聯(lián)檢測儀；

ｂ）微量加樣器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｃ）３７℃恒溫培養(yǎng)箱。

２．１．３樣品

采集被檢豬血液，分離血清，血清應(yīng)新鮮、透明、不溶血、無污染，密裝于滅菌小瓶內(nèi)，４℃或－３０℃保

存或立即送檢。試驗前將被檢血清統(tǒng)一編號，并用樣品稀釋液作２倍稀釋。

２．２操作方法

２．２．１取出包被板，并將樣品位置準確記錄在記錄單上。

２．２．２向Ａ１、Ａ２、Ａ３孔中分別加入１００μＬ未經(jīng)稀釋的陰性對照血清，Ａ４、Ａ５、Ａ６孔中分別加入

１００μＬ未經(jīng)稀釋的陽性對照血清，其他各孔加入１００μＬ稀釋好的待檢樣品。

２．２．３置室溫１ｈ。

２．２．４棄去孔內(nèi)液體，再在紗布或吸水紙上拍干。

２．２．５用洗滌液將反應(yīng)板洗滌（３～５）次，每次洗滌后均棄去孔內(nèi)液體。最后一次洗滌后，除凈孔內(nèi)液

體，拍干。

２．２．６每孔加入１００μＬ酶結(jié)合物溶液，室溫下作用２０ｍｉｎ。

２．２．７重復(fù)２．２．４和２．２．５。

２．２．８各孔加入１００μＬ底物液。

２．２．９室溫放置１５ｍｉｎ。

２．２．１０各孔加入５０μＬ終止液，立即用酶標儀于６５０ｎ