第六章一般毒性36

第六章化學(xué)毒物的一般毒性作用

（commontoxicityofchemicalpoison)1【目的要求】掌握一般毒性作用的概念、試驗(yàn)?zāi)康氖煜ひ话愣拘栽囼?yàn)方法要點(diǎn)熟悉亞慢性毒性試驗(yàn)方法了解蓄積毒作用概念2【內(nèi)容】急性毒作用：概念、試驗(yàn)?zāi)康摹⒃囼?yàn)方法的要點(diǎn)、分級和評價(jià)蓄積毒作用：概念亞慢性毒作用：概念、目的和方法要點(diǎn)慢性毒作用：概念、目的、方法要點(diǎn)和注意事項(xiàng)3毒理學(xué)主要三大研究領(lǐng)域描述毒理學(xué)（Descriptivetoxicology）機(jī)制毒理學(xué)（Mechanistictoxicology）管理毒理學(xué)（Regulatorytoxicology）

4毒理學(xué)研究方法整體動(dòng)物試驗(yàn)(invivo)體外試驗(yàn)（invitro)人體觀察（HumanToxicology)流行病學(xué)研究(EpidemiologicalStudy)一般毒性試驗(yàn)特殊毒性試驗(yàn)急性亞急性亞慢性慢性皮膚和眼刺激性致敏性等致突變致畸致癌發(fā)育與生殖毒性離體器官：心、肝、肺、腎、腦細(xì)胞：原代細(xì)胞、細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞器：線粒體、微粒體、胞核臨床毒理學(xué)研究：中毒事故的處理或治療志愿者研究：低濃度、短時(shí)間、可逆性描述流行病學(xué)研究：提出病因假說分析流行病學(xué)研究：驗(yàn)證病因假說，明確因果關(guān)系5外源化學(xué)物的一般毒性作用一般毒性作用也稱基礎(chǔ)毒性，是全身各系統(tǒng)對外源化學(xué)物的毒作用反應(yīng)，與特殊毒性（致畸、致突變、致癌）相對而言。6根據(jù)接觸毒物的時(shí)間長短，一般毒性作用分為急性毒性重復(fù)劑量毒性（亞急）亞慢性毒性慢性毒性根據(jù)毒物接觸時(shí)間長短所進(jìn)行的觀察和評價(jià)毒效應(yīng)的試驗(yàn)分為急性毒性試驗(yàn)重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)亞慢性毒性試驗(yàn)慢性毒性試驗(yàn)7能夠進(jìn)入人類生態(tài)環(huán)境和人密切接觸的物質(zhì)，特別是新化學(xué)物，均需對其進(jìn)行一般毒性作用的觀察和評價(jià)。包括新的食品、藥品、農(nóng)藥、化妝品、工業(yè)化學(xué)品（消毒劑）等。8化學(xué)毒物一般毒性作用的研究對防治外源化學(xué)物所致急慢性中毒，對毒理學(xué)安全性評價(jià)和危險(xiǎn)度評定，制訂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)以及管理毒理學(xué)的決策方面均具有十分重要的意義。9第一節(jié)急性毒性作用

（acutetoxicity)10一般毒性評價(jià)方法以哺乳動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)為主。急性毒性作用是毒理學(xué)研究中最基礎(chǔ)的工作，是了解外源化學(xué)物對機(jī)體產(chǎn)生急性毒性的主要依據(jù)，急性毒性試驗(yàn)是毒理學(xué)安全性評價(jià)的第一步。在不同類型化學(xué)品的法規(guī)程序中通常是必做試驗(yàn)。11急性毒性：是指機(jī)體(人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物)一次或24小時(shí)內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后在短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)包括一般行為、外觀改變、大體改變及死亡效應(yīng)，最主要觀察指標(biāo)是LD50

一、急性毒性的概念12中毒效應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間：化學(xué)物使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生中毒效應(yīng)的快慢和劇烈的程度，可因所接觸的化學(xué)物的質(zhì)與量不同而異有的化學(xué)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸致死劑量的幾分鐘之內(nèi)，就可發(fā)生中毒癥狀，甚至死亡而有的化學(xué)物則在幾天后才顯現(xiàn)中毒癥狀和死亡，即遲發(fā)死亡13二、急性毒性試驗(yàn)的目的1.測試和求出受試化學(xué)物的致死劑量(通常以LD50為主要參數(shù))，并對該外源化學(xué)物進(jìn)行急性毒性分級142.通過觀察動(dòng)物中毒作用表現(xiàn)、毒作用強(qiáng)度和死亡情況，初步評價(jià)毒物對機(jī)體的毒效應(yīng)特征、靶器官、劑量－反應(yīng)關(guān)系和對人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性3.為后續(xù)的重復(fù)劑量、亞慢性及慢性毒性試驗(yàn)研究以及其他毒理試驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)選擇的依據(jù)154.為毒作用機(jī)理研究提供線索，了解中毒效應(yīng)的特征（包括癥狀的，生理的，生化與組織病理損傷）5.研究化學(xué)物急性中毒診斷、預(yù)防和急救治療措施16三、經(jīng)典的急性毒性試驗(yàn)方法要點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒途徑染毒劑量觀察周期觀察指標(biāo)的選擇計(jì)算方法和評價(jià)經(jīng)典的急性毒性試驗(yàn)以死亡為其觀察終點(diǎn)，如概率單位法、改進(jìn)寇氏法和霍恩法17盡量選擇對化合物毒性反應(yīng)與人近似的動(dòng)物；易于飼養(yǎng)管理，試驗(yàn)操作方便；繁殖生育力較強(qiáng)，數(shù)量較大能夠保障供應(yīng)；易于獲得、品系純化，且價(jià)格較低的動(dòng)物。為了有利于預(yù)測化合物對人的危害，要求選擇兩種以上的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，最好一種為嚙齒類，一種為非嚙齒類，分別求出其急性毒性參數(shù)。在幾種常用的哺乳動(dòng)物中，大鼠為首選的嚙齒類動(dòng)物。(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇181.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇研究內(nèi)容實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性毒性免疫毒性放射病吸入性粉塵藥物對皮膚局部作用實(shí)質(zhì)性臟器的毒作用遲發(fā)性神經(jīng)毒慢性毒性致畸性致突變性、致癌性大、小鼠大、小鼠、最常用C57BL/6狗、大、小鼠，不宜用兔大鼠家兔、豚鼠小鼠來亨雞大鼠、狗大、小鼠、家兔大、小鼠19昆明小鼠NIH小鼠ICR小鼠BALB/c小鼠BALB/c-nu裸小鼠20金黃倉鼠豚鼠Wistar大鼠21新西蘭兔Beagle犬來亨雞巴馬香豬22恒河猴23動(dòng)物種類成年體重選擇范圍(g)生活年限(年)時(shí)間（月）體重(g)急性試驗(yàn)慢性試驗(yàn)小鼠1.5～221518～2510～15大鼠2～2.53150180～24050～100豚鼠6～83250200～250150～200兔4～93～415002000～25001200～1500貓10～123～415001500～25001000～1500狗15～203～4100008000～150004000～80002.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生活年限及體重選擇243.性別急性毒性試驗(yàn)所用的動(dòng)物應(yīng)當(dāng)是雌、雄各半如果在研究中發(fā)現(xiàn)待測化學(xué)物對雌、雄動(dòng)物的毒性大小有明顯差異時(shí)，應(yīng)分別求出雌性與雄性動(dòng)物各自的LD50值如果試驗(yàn)是為致畸試驗(yàn)作劑量準(zhǔn)備，也可僅做雌性動(dòng)物的LD50試驗(yàn)25在利用不同的方法測定化學(xué)物L(fēng)D50時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中對動(dòng)物數(shù)的要求不同4．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和數(shù)量霍恩氏法測LD50時(shí)要求有4個(gè)劑量組，每組5只動(dòng)物，雌雄各半

26概率單位法、Bliss法測定則要求5—7個(gè)劑量組，每組10只動(dòng)物或10只以上

對于不同的化學(xué)物測定應(yīng)根據(jù)其相應(yīng)的試驗(yàn)規(guī)程確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量27動(dòng)物分組：均衡性和隨機(jī)性均衡性：要求各組動(dòng)物的平均體重及體重的離散度盡可能一致。具體來說是（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重不應(yīng)超過全體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平均體重的20％---控制離散度（2）每組之間的平均體重相差不應(yīng)超過10％---控制均衡性285.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的預(yù)檢：適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，選擇健康的動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境篩檢動(dòng)物隨機(jī)性：（隨機(jī)分組）每只動(dòng)物分散到各組去的機(jī)會是均等的，以避免成見或系統(tǒng)誤差29實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)室室溫應(yīng)控制在223℃，家兔可控制在203℃，相對濕度30%～73%，無對流風(fēng)。每籠動(dòng)物數(shù)以不干擾動(dòng)物個(gè)體活動(dòng)及不影響試驗(yàn)觀察為度，必要時(shí)需單籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)室采用人工晝夜為好，早6點(diǎn)至晚6點(diǎn)進(jìn)行12小時(shí)光照，其余12小時(shí)黑暗，一般食用常規(guī)試驗(yàn)室飼料，自由飲水。306.給藥前禁食處理凡經(jīng)口染毒時(shí)，要求試驗(yàn)前要對動(dòng)物禁食，以保證胃內(nèi)無食物，減少食物對化學(xué)物毒性的干擾禁食時(shí)間:隔夜禁食禁食不禁水經(jīng)口多次可不禁食31

(二)受試物及處理受試物的接受、分樣、保管、稱重、配制以及在此過程中嚴(yán)格的質(zhì)量保證影響急性毒性試驗(yàn)受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、雜質(zhì)、理化性質(zhì)特別是揮發(fā)、溶解性等。受試物一般應(yīng)臨用前新鮮配制，除非已證明溶液貯存是穩(wěn)定的。

受試物劑型：水溶液、混懸液、油溶液32

(三)染毒方法模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際接觸該受試物的途徑和方式工業(yè)化學(xué)毒物：經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮農(nóng)用化學(xué)物：經(jīng)口、經(jīng)皮、經(jīng)呼吸道藥品：經(jīng)口、經(jīng)注射食品：經(jīng)口環(huán)境污染物：經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮吸收速率：靜脈注射>吸入>肌注>腹注>皮下注射>經(jīng)口>皮內(nèi)注射>經(jīng)皮331.經(jīng)口(胃腸道)染毒(灌胃，喂食，膠囊）（1）灌胃（等容量灌胃法）狗的灌胃3435空腹灌胃后2-3h復(fù)食灌胃的體積不超過體重的1-2％：小鼠為0.21.0ml/只或0.10.5ml/10g較合適

大鼠為5ml/只(通常用0.51.0ml/100g）

家兔為10ml/2kg體重，狗不超過50ml/10kg362.經(jīng)呼吸道接觸在常溫、常壓下為氣態(tài)，或在生產(chǎn)過程中和生活過程中以蒸氣、氣溶膠、煙、粉塵狀態(tài)污染生產(chǎn)與生活環(huán)境空氣，此時(shí)就有可能經(jīng)呼吸道吸入靜式吸入：將動(dòng)物置于一定體積的密閉容器內(nèi)，加入定量的易揮發(fā)的液態(tài)化合物或一定體積的氣態(tài)化合物，在容器內(nèi)形成所需要的受試化合物濃度的空氣環(huán)境。

動(dòng)式吸入：動(dòng)物處于空氣流動(dòng)的染毒柜中，染毒柜裝置備有新鮮空氣補(bǔ)入與含受試化合物空氣排出的動(dòng)力系統(tǒng)和隨時(shí)補(bǔ)充受試化合物的配氣系統(tǒng)。373.經(jīng)皮膚染毒

研究外源化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收應(yīng)當(dāng)盡量選擇皮膚解剖、生理與人類較近似的動(dòng)物為對象，目前多選用家兔和豚鼠但由于研究化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收的毒性(求經(jīng)皮LD50)所需的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較多，使用家兔、豚鼠不夠經(jīng)濟(jì)，也常用大鼠代替38經(jīng)皮膚染毒程序給予受試物前24h，確定受試部位機(jī)械或化學(xué)脫毛面積10%～15%體表面積檢查去毛部位有無異常現(xiàn)象單位體重相同容積染毒，接觸時(shí)間與人實(shí)際接觸該化學(xué)物的時(shí)間相仿394.經(jīng)注射染毒常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予受試物的體積(ml)注射方式小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～1040外源化學(xué)物L(fēng)D50時(shí)設(shè)置幾個(gè)劑量組較為合適，應(yīng)依預(yù)試驗(yàn)結(jié)果而定一般設(shè)置57個(gè)劑量組即可，它即符合統(tǒng)計(jì)計(jì)算要求又可節(jié)省人力和財(cái)力。每個(gè)劑量組的動(dòng)物數(shù)，小鼠不少于10只、大鼠68只、家兔46只最大劑量法：以最大容積最高濃度給予動(dòng)物后未見死亡，可不進(jìn)一步試驗(yàn)求出LD50值。41（五）毒性作用觀察1.中毒體癥和發(fā)生過程觀察（P123）很多化學(xué)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸的初期往往先出現(xiàn)興奮現(xiàn)象，有的化學(xué)物在動(dòng)物接觸的初期首先表現(xiàn)為抑制現(xiàn)象

通過毒性表現(xiàn)可初步確定急性毒性靶器官422.死亡情況和時(shí)間分布：計(jì)算LD503.體重：在觀察期間應(yīng)注意觀察其體重變化。這有助于了解受試化學(xué)物所致的中毒效應(yīng)是短暫的或較長期的效應(yīng)434.病理檢查和其它指標(biāo)觀察應(yīng)當(dāng)重視病理組織學(xué)檢查凡中毒死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)解剖做病理學(xué)檢查，檢查器官有無充血、出血、水腫或其它改變，并對有變化的臟器作病理組織學(xué)檢查對存活動(dòng)物于觀察期結(jié)束后應(yīng)做病理學(xué)檢查

44(六)觀察時(shí)間和周期

測定外源化學(xué)物的LD50(LC50)，一般要求計(jì)算實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸化學(xué)物之后兩周（14天）內(nèi)的總死亡數(shù)對于一些速死性化學(xué)物求其LD50(LC50)也可僅計(jì)算24小時(shí)的死亡率45四、急性毒性分級和評價(jià)急性毒性試驗(yàn)主要目的之一是對化學(xué)物的急性毒性進(jìn)行分級，評價(jià)化學(xué)物的急性毒性強(qiáng)弱，用于比較其急性毒性大小。WHO于2003年公布《全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度》（GHS），2005年修訂，2008年GHS將全面實(shí)施。GHS對急性毒性分級以LD50/LC50值為依據(jù)劃分。46WHO急性毒性分級毒性分級大鼠一次經(jīng)口LD50（mg/kg）劇毒<1高毒1~中等毒50~低毒500~實(shí)際無毒5000~47五、急性毒性替代試驗(yàn)固定劑量法Fixeddoseprocedure不以動(dòng)物死亡作為觀察終點(diǎn)急性毒性分級法Acutetoxicclassmethod以死亡為終點(diǎn)的分階段試驗(yàn)法上-下移動(dòng)法Up/downmethod以死亡為終點(diǎn)但也可用于觀察不同的終點(diǎn)48第二節(jié)局部刺激試驗(yàn)49局部刺激試驗(yàn)（localirritationtest)目的是了解外源化學(xué)物對皮膚、眼睛的局部刺激性和腐蝕性，包括眼刺激、皮膚刺激試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果可為制定化學(xué)物對眼睛和皮膚防護(hù)措施提供依據(jù)。我國農(nóng)藥、化妝品和消毒劑毒理學(xué)試驗(yàn)程序均規(guī)定局部刺激試驗(yàn)為必做項(xiàng)目。局部刺激試驗(yàn)50一、眼刺激試驗(yàn)眼原發(fā)性刺激試驗(yàn)觀察終點(diǎn)為眼刺激和眼腐蝕。眼刺激試驗(yàn)推薦方法是Draize試驗(yàn)。使用家兔4只，滴眼后觀察結(jié)膜、角膜和虹膜的反應(yīng)，按規(guī)定的分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分，一般觀察期為7天。51二、皮膚原發(fā)性刺激試驗(yàn)皮膚原發(fā)性刺激試驗(yàn)包括單次和多次皮膚刺激試驗(yàn)，完整皮膚和破損皮膚刺激試驗(yàn)等。觀察終點(diǎn)為皮膚刺激和皮膚腐蝕。皮膚刺激評價(jià)方法稱Draize試驗(yàn)。皮膚刺激試驗(yàn)常用動(dòng)物為家兔和豚鼠。在不同時(shí)間里觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，皮膚反應(yīng)的表現(xiàn)為紅斑，損傷最重的可形成焦痂，一般按紅斑和水腫的嚴(yán)重程度評分。觀察時(shí)間的長短應(yīng)足以觀察到可逆或不可逆刺激作用，一般不超過14天。52三、皮膚致敏試驗(yàn)皮膚致敏：又稱致敏性接觸性皮炎，是一種化學(xué)物免疫介導(dǎo)的皮膚反應(yīng)，人體反應(yīng)的特點(diǎn)為瘙癢、紅斑、水腫、丘疹、水皰等。皮膚致敏試驗(yàn)的目的是通過動(dòng)物試驗(yàn)預(yù)測化學(xué)品經(jīng)皮膚接觸對人類引起皮膚致敏反應(yīng)的危害。53皮膚第一次接觸外源化學(xué)物產(chǎn)生較輕的反應(yīng)或無明顯反應(yīng)，經(jīng)過一段時(shí)間（幾周或幾年）再次接觸，會引起遲發(fā)性超敏反應(yīng)（接觸性皮炎），且在最初染毒部位以外的皮膚均可發(fā)生。皮膚超敏反應(yīng)試驗(yàn)常選擇豚鼠，試驗(yàn)分誘導(dǎo)接觸（inductionexposure)和激發(fā)接觸（challengeexposure）。54誘導(dǎo)接觸是以較低或中等濃度受試物對皮膚重復(fù)染毒（涂皮或皮下注射），一般需14天。間隔10-14天后，到激發(fā)階段，用激發(fā)劑量（低于誘導(dǎo)劑量）受試物未染過毒的皮膚部位，觀察24、48和72小時(shí)后有無皮膚反應(yīng)，以皮膚反應(yīng)的嚴(yán)重程度來評分。55第三節(jié)短期、亞慢性

和慢性毒性作用56人類接觸化學(xué)物的方式往往是長期的、重復(fù)的、低水平的，不會發(fā)生急性毒作用。長期重復(fù)劑量染毒和一次劑量染毒所致毒作用可能完全不同，因此，用急性毒性資料難以預(yù)測慢性毒性。重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)（亞急性）亞慢性毒性試驗(yàn)慢性毒性試驗(yàn)一、概述57蓄積作用（accumulation)：外源化學(xué)物連續(xù)地、反復(fù)地進(jìn)入機(jī)體，而且吸收速度或總量超過代謝轉(zhuǎn)化與排出的速度或總量時(shí)，化學(xué)物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐漸增加并貯留的現(xiàn)象。（一）、蓄積作用58蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)一種外源化學(xué)物有無蓄積作用是評定該化學(xué)物是否可能引起潛在慢性中毒的論據(jù)之一，也是制定衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)安全系數(shù)的一種依據(jù)59物質(zhì)蓄積（materialaccumulation)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物反復(fù)多次接觸化學(xué)物后，用化學(xué)分析方法能夠測得機(jī)體內(nèi)存在該化學(xué)物或其代謝產(chǎn)物功能(機(jī)能)蓄積（functionalaccumulation)：有的化學(xué)物在長期接觸后，機(jī)體內(nèi)雖不能測出其原型或代謝產(chǎn)物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用60（二）短期重復(fù)劑量毒性作用、亞慢性毒性和慢性毒性作用的基本概念短期重復(fù)劑量毒性是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人連續(xù)接觸外源化學(xué)物14-30天所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。亞慢性毒性（subchronictoxicity）是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人連續(xù)較長期（相當(dāng)于生命周期的1/10）接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。慢性毒性（chronictoxicity）是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長期染毒外源化學(xué)物所引起的毒性效應(yīng)。61短期重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)、亞慢性毒性和

慢性毒性作用的目的1.觀察長期接觸受試物的毒性效應(yīng)譜，毒作用特點(diǎn)和靶器官。了解其毒性機(jī)制。2.研究重復(fù)接觸受試物的劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，確定其觀察到有害作用的最低劑量（LOAEL）和未觀察到有害作用的劑量（NOAEL），為制定人類接觸的安全限量參考數(shù)值3.觀察長期接觸受試物毒性作用的可逆性。4.確定不同動(dòng)物對受試物的毒效應(yīng)的差異，為將研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)62二、研究方法重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)、亞慢性毒性試驗(yàn)和慢性毒性試驗(yàn)在設(shè)計(jì)和評價(jià)上有許多共同之處，亞慢性毒性試驗(yàn)是長期重復(fù)試驗(yàn)中最常用的，以該試驗(yàn)為重點(diǎn)介紹其研究方法。631、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇亞慢性毒性作用研究一般要求選擇兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一種為嚙齒類，另一種為非嚙齒類，如大鼠(Wistar,Sprague-Dawley)和狗（Beagle犬），以便全面了解受試物的毒性特征64由于亞慢性毒性試驗(yàn)期較長，所以選擇被動(dòng)物的體重(年齡)應(yīng)較?。x乳不久動(dòng)物），如小鼠應(yīng)為15g左右，大鼠100g左右65實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分四級：普通動(dòng)物（Conventionalanimal,CV）、清潔動(dòng)物（Cleananimal,CLorCleanconventionalanimal，CCV）無特定病原體動(dòng)物（Specificpathogenfreeanimal,SPF）、無菌動(dòng)物（Germfreeanimal,GF），亞慢性毒性試驗(yàn)應(yīng)使用清潔級以上動(dòng)物，并在屏障環(huán)境內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)

66GLP動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺672、染毒途徑亞慢性毒性試驗(yàn)接觸外源化學(xué)物途徑的選擇，應(yīng)考慮兩點(diǎn)：

1.盡量模擬人類在環(huán)境中接觸該化合物的途徑或方式

2.應(yīng)與預(yù)期進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)的接觸途徑相一致具體接觸途徑主要有經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚三種68亞慢性試驗(yàn)的上限劑量，需控制在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸受試化合物的整個(gè)過程中，不發(fā)生死亡或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡，但有明顯的中毒效應(yīng)，或靶器官出現(xiàn)典型的損傷。此劑量的確定可參考兩個(gè)數(shù)值，一是以急性毒性的閾劑量為亞慢性試驗(yàn)的最高劑量；二是以此化合物L(fēng)D50的1/201/5為最高劑量。3.劑量選擇與分組694.觀察指標(biāo)

（1）一般性指標(biāo)1）外觀體征、行為活動(dòng)：（時(shí)間順序）2）動(dòng)物體重：體重變化的表示方式，可將接觸組與對照組同期體重絕對增長的重量或體重百分增長率(以接觸化學(xué)物開始時(shí)動(dòng)物體重為100%)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和比較703）食物利用率：是指動(dòng)物每食入100g飼料所增長的體重克數(shù)。分析比較接觸組與對照組食物利用率，有助于分析受試化學(xué)物對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)效應(yīng)4）癥狀實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在接觸外來化合物過程中所出現(xiàn)的中毒癥狀及出現(xiàn)各癥狀的先后次序、時(shí)間均應(yīng)記錄和分析71血液學(xué)指標(biāo)：包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類、血紅蛋白定量、血小板等血液生化指標(biāo)：AST、ALT、ALP（堿性磷酸酶）、BUN、TP、ALB、GLU、T-BIL（膽紅素）、Crea、T-CHO一般為篩檢性和探討性（2）實(shí)驗(yàn)室檢查：72亞慢毒性試驗(yàn)中應(yīng)重視病理學(xué)檢查。凡是在染毒過程中死亡的動(dòng)物均應(yīng)及時(shí)解剖，肉眼檢查后再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。必要時(shí)作組織化學(xué)或電鏡鏡檢

(3)系統(tǒng)尸檢和病理學(xué)檢查731）臟器系數(shù)(稱臟/體比值)：是指某個(gè)臟器的濕重與單位體重的比值，通常以100g體重計(jì)。如肝/體比即(全肝濕重/體重)100此指標(biāo)的意義是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在不同年齡期，其各臟器與體重之間重量比值有一定規(guī)律若受試化學(xué)物使某個(gè)臟器受到損害，則此比值就會發(fā)生改變，可以增大或縮小，如增生、充血、水腫、萎縮等變化。74因此，臟/體比值是一個(gè)靈敏、有效和經(jīng)濟(jì)的指標(biāo)2）病理學(xué)檢查：組織病理學(xué)檢查是亞慢性毒性試驗(yàn)中最重要的檢測指標(biāo)之一?？纱_定化學(xué)物對機(jī)體毒作用的靶部位、損害的性質(zhì)和程度。

（4）其它檢查：生物標(biāo)志物75三、慢性毒性作用（chronictoxicity)慢性毒性：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人長期（甚至終生）反復(fù)接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)76慢性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)期限，應(yīng)依受試物的具體要求和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物種而定如用大鼠試驗(yàn)期限可為1年，用狗則試驗(yàn)期限可1～2年慢性毒性試驗(yàn)應(yīng)終生接觸受試物如果慢性毒性試驗(yàn)與致癌試驗(yàn)結(jié)合進(jìn)行，則實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒時(shí)間最好接近或等于動(dòng)物的預(yù)期壽命77（三）慢性毒性試驗(yàn)方法要點(diǎn)

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇慢性毒性試驗(yàn)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的條件與亞慢性毒性試驗(yàn)相同。但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最好為純系甚至同窩動(dòng)物均勻分布于各劑量組78實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡應(yīng)較小，大鼠和小鼠應(yīng)為初斷奶者，即小鼠出生后3周，體重1012g；大鼠出生后34周，體重50