骨科結核感染T細胞斑點檢測SPOT

關于骨科結核感染T細胞斑點檢測SPOT第一頁，共三十六頁，2022年，8月28日肺外結核病占全部結核病的15%-20%死亡人數(shù)占全部結核病死亡數(shù)14.1%-17.6%上升趨勢結核病……你真正了解嗎？第二頁，共三十六頁，2022年，8月28日新疆結核病疫情我區(qū)仍然是全國結核病高發(fā)省區(qū)之一，每年報告肺結核發(fā)病人數(shù)近5萬例。根據(jù)2010年結核病流行病學調(diào)查結果，我區(qū)活動性肺結核患病率、涂陽肺結核患病率、菌陽肺結核患病率分別為全國平均水平的3.3倍、3倍和3.6倍。關于印發(fā)新疆維吾爾自治區(qū)結核病防治規(guī)劃（2011-2015年）的通知第三頁，共三十六頁，2022年，8月28日WHO潛伏結核感染管理指南(2014)定義(LTBI)機體對結核分枝桿菌抗原刺激產(chǎn)生的持久性的免疫反應，臨床上沒有任何活動性結核的征象.高風險人群HIV感染者、實體器官移植者、接受TNF-a抑制劑指治療的患者和免疫介導的炎癥性疾?。≧A/SLE和其他自身免疫?。⑼肝龌颊?、血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者，包括HSCT者CDC指南高?；颊呖紤]TST和IGRA任何陽性結果應該被認為LTBI的證據(jù)第四頁，共三十六頁，2022年，8月28日使用抗TNF-a治療前的抗結核治療(北京胸科醫(yī)院）僅僅T-SPOT結果陽性，無其它結核表現(xiàn)，可預防性抗結核治療3-6個月?；煼桨福?/p>

三聯(lián)方案：異煙肼：0.3/日

利福平0.45/日

乙胺丁醇0.75/日兩聯(lián)方案：異煙肼：0.3/日利福平0.45/日用藥前查肝、腎功能、血、尿常規(guī)，用藥后2W、4W，以后每4W復查一次。療程3-6個月?？菇Y核治療4W后開始抗TNF-a治療。第五頁，共三十六頁，2022年，8月28日結核病診斷技術分子生物學介入診斷影像學結核病診斷細菌學病理學免疫學第六頁，共三十六頁，2022年，8月28日1.結核抗原、抗體診斷—簡便、快速，可以作為結核病的輔助診斷方法之一，但診斷價值有限。2011年WHO正式公告禁止2.PPD（TST）試驗—傳統(tǒng)的結核感染檢測方法易受BCG接種史和非結核分枝桿菌干擾，特異性低免疫低下患者中，診斷敏感性低

需要2-3天等待時間免疫學檢測手段第七頁，共三十六頁，2022年，8月28日列入美國、英國等歐美20多個國家結核診療指南；美國CDC推薦：BCG接種人群結核感染檢測首選；國內(nèi)專家指南CFDA批準的使用范圍：檢測血液樣本中效應T細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力，用于診斷結核桿菌感染。適應癥：結核感染的診斷和活動性結核病的輔助診斷T-SPOT.TB(酶聯(lián)免疫斑點法ELISPOT)第八頁，共三十六頁，2022年，8月28日1.特異性好，不受卡介苗（BCG）接種與環(huán)境分枝桿菌影響；2.靈敏度高，幾乎不受個體免疫功能低下影響；3.快速，24h報告結果；4.對肺外結核的診斷尤其有幫助；5.降低醫(yī)療事故風險，減少帶藥診斷的醫(yī)患糾紛風險。方法學優(yōu)點T-SPOT?.TB診斷性能第九頁，共三十六頁，2022年，8月28日

T-SPOT?.TB臨床性能指標特異性只針對結核分枝桿菌復合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無交叉反應。

美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508)靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺結核與肺外結核患者中均有很高的檢出率。

美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655)第十頁，共三十六頁，2022年，8月28日實驗效果圖陰性結果陽性結果空白對照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽性對照（PHA）24小時報告結果陰性結果：A抗原或B抗原斑點數(shù)均小于6陽性結果：A抗原或B抗原斑點數(shù)任意一個大于等于6，第十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日實驗結果解釋陰性結果意義提示患者體內(nèi)不存在針對結核桿菌特異的效應T細胞。排除結核感染——排除結核病——幫助臨床鑒別診斷陽性結果意義提示患者體內(nèi)存在針對結核桿菌特異的效應T細胞，患者存在結核感染。但是否是活動性結核病，需結合臨床癥狀和其它檢測指標綜合判斷。結核感染——結合臨床綜合判斷——懷疑第十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日檢測結果判讀第十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日182名ATB疑似患者中，71名分作肺部疾病組，111名分作肺外疾病組（包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周淋巴結、胸膜、骨骼、生殖泌尿系統(tǒng)等）T-SPOT.TB在肺疾病組和肺外疾病組中的靈敏度分別為95.6%和93.3%，特異性分別為69.2%和88.9%。馮云,張文宏等.PLOSONE,2012（IF=3.53）T-SPOT.TB臨床數(shù)據(jù)第十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日Cho

等在

368

例疑診肺外結核的患者中研究顯示，T-SPOT.TB在診斷淋巴結核和骨結核的敏感性為

93%

，在診斷急性肺外結核(結核性腦膜炎和粟粒性肺結核)的敏感性為

79%

。ChoOH,KimSH,etal.JInfect,2011（IF=4.073）T-SPOT.TB臨床數(shù)據(jù)第十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日骨結核的輔助診斷和鑒別診斷

如脊柱結核與強直性脊柱炎、化膿性脊柱炎、腰椎間盤突出、脊柱腫瘤、退行性脊柱骨關節(jié)病等的鑒別診斷結核感染篩查大劑量激素使用抗TNF-a、生物制劑使用前后不明原因發(fā)熱患者的結核排篩骨科——適應范圍T-SPOT.TB在骨科的應用第十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日賈紅彥,張宗德等，北京胸科醫(yī)院，DiagnMicrobiolInfectDis,2013γ干擾素釋放試驗在骨關節(jié)結核病診斷中的

應用價值研究骨科臨床應用（一）第十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日特點結核n(%)非結核n(%)n=86n=24合并其他部位結核肺結核11（12.8）0腎臟結核4（4.7）0病灶位置脊柱59(68.6)14(58.3)髖關節(jié)8(9.3)2(8.3)膝關節(jié)6(7.0)2(8.3)肘關節(jié)3(3.5)3(12.5)手關節(jié)1（1.2）1（4.2）踝關節(jié)3(3.5)0骶髂關節(jié)2（2.3）0肩關節(jié)2（2.3）0肋骨1（1.2）0股骨1（1.2）2（8.3）確診骨關節(jié)結核病非活動性結核病例數(shù)8624分類細菌培養(yǎng)確診疑似結核病2660確診病例（培養(yǎng)陽性者）、疑似結核?。ńM織活檢或發(fā)現(xiàn)干酪性肉芽腫并且抗結核治療有效）和非活動性結核病患者（確診為其他疾病、未抗結核治療而病情好轉）H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,2013第十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,2013將86名骨關節(jié)結核病患者根據(jù)其病程，即住院前出現(xiàn)癥狀的時間，將研究對象分為四組：﹤6月、6-12月、12-24月、﹥24月，T-SPOT.TB試驗在上述四組中的敏感度無統(tǒng)計學差異。T-SPOT.TB試驗在確診110名懷疑骨關節(jié)結核病患者中的診斷準確性類型（n)細菌培養(yǎng)確診（26）疑似結核?。?0）脊柱結核（59）四肢關節(jié)結核（27）敏感度%100%91.7%98.3%85.2%P﹤0.05P﹤0.05第十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,2013T-SPOT試驗的敏感度遠高于痰涂片抗酸染色、結核分枝桿菌培養(yǎng)和實時熒光定量PCR（P﹤0.05）。

T-SPOT.TB可作為骨關節(jié)結核病診斷的重要輔助工具。T-SPOT.TB試驗和其他診斷方法在110名懷疑骨關節(jié)結核病患者診斷中的準確性比較方法敏感度,%(n)特異度,%(n)痰涂片抗酸染色19.7(15/76)100(16/16)結核分枝桿菌培養(yǎng)34.2(26/76)100(16/16)實時熒光定量PCR36.8(28/76)93.8(15/16)T-SPOT.TB試驗94.2(81/86)*70.8(17/24)第二十頁，共三十六頁，2022年，8月28日討論骨關節(jié)結核病的診斷仍然是一個難以解決的問題在炎癥部位進行組織和滑膜活檢是最快捷的診斷方法，但該方法有創(chuàng)傷性痰涂片抗酸染色的敏感度為19.7%，原因在于骨關節(jié)結核病患者所檢測的樣本中細菌載量低結核分枝桿菌培養(yǎng)的敏感度僅為34.2%，且該試驗耗時較長，大約需要4-8周時間才能得到結果實時熒光定量PCR檢測的敏感度為36.8%，在病原學確診的患者中可達61.5%，造成該試驗敏感度低的原因除標本的細菌載量低外，還有可能因為病灶部位細菌分布不均導致檢測標本中無結核分枝桿菌存在T-SPOT.TB試驗敏感度（94.2%）顯著高于痰涂片抗酸染色（19.7%）、結核分枝桿菌培養(yǎng)（34.2%）和實時熒光定量PCR（36.8%）H.Jia,etal.DiagnMicrobiolInfectDis,2013第二十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)檢測在骨結核中的診斷價值骨科臨床應用（二）LaiCC,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,2011第二十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日C.-C.Lai,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,2011結核性骨關節(jié)炎患者ELISPOT檢測結果ELISPOT檢測診斷骨結核(包括確診與臨床診斷)的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為86.7%（13/15），61.9%（13/21），61.9%（13/21），和86.7%（13/15）。患者例數(shù)(%)確診結核(n=12)臨床診斷結核(n=3)確診＋臨床診斷結核(n=15)ELISPOT檢測陽性例數(shù)(%)11(91.6)2(66.7)13(86.7)ELISPOT檢測陰性例數(shù)(%)1(8.4)1(33.3)2(13.3)2007年3月至2010年6月，本研究共納入臺灣一所三級保健醫(yī)院36例疑診骨結核的患者（21例排除結核）第二十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日C.-C.Lai,etal.EurJClinMicrobiolInfectDis,2011敏感性的差異可能由于不同部位結核所致的免疫反應程度不同。ELISPOT檢測可輔助診斷骨結核，陰性結果可排除脊柱結核變量脊柱結核關節(jié)結核確診結核(n=7)臨床診斷結核(n=2)確診+臨床診斷結核(n=9)確診結核(n=5)臨床診斷結核(n=1)確診+臨床診斷結核(n=6)ELISPOT檢測陽性例數(shù)(%)7(100.0)2(100.0)9(100.0)4(80.0)0(0.0)4(66.7)ELISPOT檢測陰性例數(shù)(%)0(0.0)0(0.0)0(0.0)1(20.0)1(100.0)2(33.3)ELISPOT檢測對不同部位結核性骨關節(jié)炎的診斷效能第二十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日對疑似肺外結核患者進行T-SPOT.TB檢測。針對不同感染部位的T-SPOT.TB檢測靈敏性如下表所示：骨科臨床應用（三）Choetal.JournalofInfection(2011)63,362-369作者認為：“這些結果表明，不管免疫狀態(tài)如何和培養(yǎng)陽性與否，T-SPOT.TB檢測有助于排除像淋巴結結核和骨關節(jié)結核一類的慢性結核病。其中15例為脊柱結核第二十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)在非典型脊柱結核感染診斷中的應用評價骨科臨床應用（四）廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院

骨科

袁凱TheBrazilianJournalofInfectiousDiseases,2013;17(5):529-537非典型性脊柱結核病情隱蔽，病變緩慢，早期臨床癥狀、影像學診斷不明顯，實驗室檢查成為診斷非典型性脊柱結核必不可少的方法第二十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日患者例數(shù)(%)靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值ELISPOT(%）82.8%、81.3%、80.0%和83.9%PPD(%)病灶抗酸桿菌涂片58.6%、59.4%、56.7%和61.3%37.5%納入65例患者，確診結核(n=18)

臨床診斷結核(n=11)

排除結核(n=32)第二十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日

在脊柱結核病感染的發(fā)展早期，臨床癥狀未能完全表現(xiàn)出來，除了有明顯的骨破壞和椎間隙的變窄，平片的診斷作用非常有限的。

在非典型脊柱結核感染椎體炎癥期（未有明顯骨破壞和椎旁膿腫形成），MRI的診斷價值受到很大限制。3名疑難病例T-SPOT能為非典型性脊柱結核感染患者提供有效的輔助診斷：結核病接觸史合并肺結核結核中毒癥狀PPDMRI和PET-CTT-SPOT術前或術中病灶活檢穿刺無無無陰性考慮脊柱腫瘤可能性大陽性結核改變病理學檢查結果與ELISPOT試驗結果有著較好的一致性（к=0.506）。第二十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日結核感染篩查

抗TNFα治療前篩查指南多個國家指南建議在抗TNF-ɑ治療開始前，應采用T-SPOT.TB方法進行結核感染篩查卡介苗（BCG）接種人群結核感染檢測首選——美國CDC推薦瑞士關于抗TNF-α治療前篩查結核潛伏感染的指南中建議要求所有接受抗TNF-α治療患者在治療前都應該進行結核病檢測和潛伏感染的篩查篩查應該基于既往史，X攝片和γ干擾素釋放實驗（T-SPOT.TB方法）第二十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日《依那西普治療類風濕關節(jié)炎和強直性脊柱炎的專家建議》2010生物制劑使用前，應排除活動性結核病(包括肺結核和肺外結核)及結核潛伏感染者。核)及結核潛伏感染者?！队⒎蚶鲉慰怪委燁愶L濕關節(jié)炎和強直性脊柱炎的參考意見》2012.12可用的輔助診斷方法可考慮用結核抗原特異性IFN-γ釋放試驗(IGRA)。其中以T-SPOT敏感性(88％)和特異性(82％)最高，而TST為65％和75％。對T-SPOT陽性者，高度懷疑結核感染的可能，應予抗結核治療?！比?、結核感染篩查

用藥前篩查相關指南第三十頁，共三十六頁，2022年，8月28日(FUO,feverunknownorigin):①發(fā)熱時間持續(xù)≥3周；②體溫多次＞38.3℃；③經(jīng)≥1周完整的病史詢問、體格檢查和常規(guī)實驗室檢查后仍不能確診北京協(xié)和醫(yī)院感染內(nèi)科2004年至2010年收治的997例不明原因發(fā)熱患者的病因分析顯示，感染性疾病一直是最主要的病因，占479例(48.0%)，其中結核病占45.3%(217/479)侍效春,劉曉清等.ChinMedJ,2013（IF=0.901）三、結核感染篩查

不明原因發(fā)熱篩查第三十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日T-SPOT檢測結果的臨床意義解讀T-SPOT陰性結果：陰性檢測結果代表目前機體沒有

MTB特異抗原致敏的

T淋巴細胞，即受檢者目前未感染

MTB。臨床診斷上首選排除結核病的診斷，尤其是在結核病高發(fā)地區(qū)、免疫功能正常人群及無可靠依據(jù)診斷結核病時，在可能的診斷排序上，結核病應列在其他疾病之后。中華結核和呼吸雜志2014年10月第37卷第10期高孟秋第三十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日

二．T-SPOT陽性結果：