第三組-筒箭毒

筒箭毒對神經(jīng)——肌接頭的興奮傳遞的影響

第三組員：呂青，石徑，蘇萌，任燕北，牛亞蒙，王創(chuàng)威指導(dǎo)老師：趙文超Page

2當(dāng)神經(jīng)纖維傳來的動(dòng)作電位到達(dá)神經(jīng)末梢時(shí)，接頭前膜首先發(fā)生去極化，膜的去極化引起該處膜上存在的電壓門控鈣通道開放，鈣離子內(nèi)流，鈣離子濃度增高，促使突觸小泡向接頭前膜內(nèi)側(cè)移動(dòng)，經(jīng)出胞過程釋放ACh至接頭間隙，與終板膜上的受體結(jié)合，引起膜通透性改變,離子通道開放，使終板膜發(fā)生去極化，產(chǎn)生終板電位，觸發(fā)收縮偶聯(lián)，引起肌肉收縮。其后ACh極迅速被突觸間隙的膽堿脂酶水解滅活。

實(shí)驗(yàn)的原理：Page

3新斯的明又名普洛色林、普洛斯的明，是擬膽堿藥中的抗膽堿酯酶藥之一，是毒扁豆堿的人工合成代用品，有甲基硫酸新斯的明和溴化新斯的明兩種，均為白色結(jié)晶性粉末，無臭，味苦，極易溶于水，易溶于乙醇，幾乎不溶于乙醚。新斯的明進(jìn)入機(jī)體后，通過可逆性抑制膽堿酯酶活性，使乙酰膽堿不能水解，從而提高體內(nèi)受體部位的乙酰膽堿濃度，加強(qiáng)和延長乙酰膽堿的作用，呈現(xiàn)出全部膽堿能神經(jīng)興奮的效應(yīng)。Page

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筒箭毒屬于非去極化肌松藥，又稱競爭型肌松藥(competitivemuscularrelaxants)，右旋體具藥理活性。此類藥物與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)終板膜上的N2膽堿受體結(jié)合，能競爭性地阻斷ACh的除極化作用，不引起膜通透性改變，致使離子通道關(guān)閉，終板膜不能去極化產(chǎn)生動(dòng)作電位，使骨骼肌松弛。新斯的明抑制膽堿酯酶，使神經(jīng)未梢釋放的ACh不被破壞。ACh濃度升高而競爭性地對抗筒箭毒堿的肌松作用。5通過觀察神經(jīng)電、肌電與肌肉收縮，了解筒箭毒堿的對于骨骼肌神經(jīng)—肌肉接頭處興奮傳遞的影響，并分析其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)的目的：6實(shí)驗(yàn)對象：蟾蜍

蛙類的一些基本生理活動(dòng)規(guī)律與溫血?jiǎng)游锵嗨?，而維持其離體組織正常活動(dòng)所需的理化條件比較簡單，易于建立和控制。因此在實(shí)驗(yàn)中常用蟾蜍或蛙的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本來觀察興奮。為什么老是我？Page

7實(shí)驗(yàn)的儀器與試劑：蛙類手術(shù)器械一套、0.01％筒箭毒堿(任氏液配制)、0.05％新斯的明(任氏液配制)、任氏液、細(xì)線保護(hù)刺激電極2支、開放刺激電極2支、雙向電路開關(guān)、電子刺激器、隔離器、張力換能器、計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)記錄分析系統(tǒng)Page

8實(shí)驗(yàn)的儀器與試劑：蛙類手術(shù)器械一套、0.01％筒箭毒堿(任氏液配制)、0.05％新斯的明(任氏液配制)、任氏液、細(xì)線

保護(hù)刺激電極2支、開放刺激電極2支、雙向電路開關(guān)、電子刺激器、隔離器、張力換能器、計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)記錄分析系統(tǒng)Page

9實(shí)驗(yàn)步驟：一、制備脊蛙二、制作坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本，將制作的標(biāo)本與任氏液中浸泡5-10分鐘。三、檢查標(biāo)本的興奮性，用經(jīng)任氏液清潤的鋅銅弓輕輕接觸一下坐骨神經(jīng)，如腓腸肌發(fā)生迅速而明顯的收縮，則表明標(biāo)本興奮性良好，實(shí)驗(yàn)可用。四、將制作的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本安裝刺激電極和記錄電極，并與張力換能器計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)記錄分析系統(tǒng)相連。用改變雙向開關(guān)的方向來控制刺激神經(jīng)或肌肉。將肌腱上的細(xì)線縛于張力換能器，使之與記錄系統(tǒng)相連，以記錄肌肉的收縮。各儀器接地線。Page

10五、1)尋找最適刺激強(qiáng)度將標(biāo)本的股骨殘端固定于肌動(dòng)器的螺絲孔內(nèi)。進(jìn)入“刺激強(qiáng)度與反應(yīng)的關(guān)系”實(shí)驗(yàn)?zāi)K，選擇程控模式，設(shè)置參數(shù)為起始刺激0.02伏，每間隔1秒，刺激強(qiáng)度增加0.01伏。隨著刺激強(qiáng)度增加，肌肉收縮產(chǎn)生的張力不斷增大直至最大值，此時(shí)如果接著增加刺激強(qiáng)度，肌肉收縮產(chǎn)生的張力不會(huì)繼續(xù)增大。肌肉出現(xiàn)最大收縮張力時(shí)所對應(yīng)之最小刺激強(qiáng)度即為最適刺激強(qiáng)度。2)以最適強(qiáng)度刺激坐骨神經(jīng)，連續(xù)測量并記錄乙酰膽堿的濃度變化；觀察并記錄神經(jīng)電位、肌電位及肌肉收縮情況，Page

113)向坐骨神經(jīng)腓腸肌持續(xù)標(biāo)本滴加0.01％筒箭毒堿，當(dāng)肌電消失時(shí)，注意坐骨神經(jīng)電位的變化。放置一段時(shí)間，待標(biāo)本恢復(fù)正常之后，以最適強(qiáng)度刺激坐骨神經(jīng)，再次連續(xù)測量并記錄乙酰膽堿的濃度變化。然后改變雙向開關(guān)方向，用電直接刺激肌肉，觀察肌電活動(dòng)與肌肉的收縮。4)停止刺激肌肉，持續(xù)刺激坐骨神經(jīng)。同時(shí)緩慢滴加0.05％新斯的明0.15ml／100g，觀察神經(jīng)電位、肌電位和肌肉活動(dòng)變化情況。六、再制作兩組蛙的坐骨神經(jīng)肌標(biāo)本，重復(fù)實(shí)驗(yàn)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。Page

12預(yù)期結(jié)果：刺激坐骨神經(jīng)，神經(jīng)動(dòng)作電位出現(xiàn)，肌電位出現(xiàn)，肌肉收縮。當(dāng)?shù)渭油布竞?，刺激坐骨神?jīng)，神經(jīng)動(dòng)作電位正常，但不出現(xiàn)肌電位，肌肉不收縮。直接刺激肌肉，肌電位出現(xiàn)，肌肉正常收縮。在開始測量時(shí)，2）中的測量濃度與3）中的相等，在隨后的測量中，3）中的測量濃度比2）中的高。當(dāng)?shù)渭有滤沟拿骱螅窠?jīng)動(dòng)作電位仍正常，肌電位變?yōu)檎＃∪馐湛s。Page

13實(shí)驗(yàn)分析：

結(jié)果說明箭筒毒對神經(jīng)—肌接頭興奮有抑制作用。直接刺激肌肉，肌電位出現(xiàn)，肌肉正常收縮，說明肌細(xì)胞正常，筒箭毒不是通過損傷肌細(xì)胞來抑制肌肉收縮。由于隨后的測量中，3）中的ACh濃度比2）中的高，說明筒箭毒不是通過直接分解乙酰膽堿或者增強(qiáng)乙酰膽堿酯酶活性來降低乙酰膽堿濃度從而抑制肌肉收縮的。滴加新斯的明后，興奮傳遞恢復(fù)正常，肌肉再次正常收縮，說明筒箭毒沒有破壞乙酰膽堿能受體。并且由于新斯的明可抑制膽堿酯酶，使神經(jīng)末梢釋放ACh不被破壞，ACh濃度升高。ACh濃度升高后，肌肉又恢復(fù)收縮，說明是筒箭毒與ACh競爭性抑制，結(jié)合終板膜的受體而形成的。若滴加筒箭毒后未出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，可能是因?yàn)橥布镜臐舛忍?，達(dá)不到與ACh競爭的濃度，肌肉仍正常興奮，肌肉收縮。若滴加新斯的明后未出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，可能是因?yàn)樾滤沟拿鞯臐舛忍?，達(dá)不到抑制乙酰膽堿酯酶活性的效果，肌肉不收縮。Page

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制備神經(jīng)肌肉標(biāo)本過程中，要不斷滴加任氏液，以防止標(biāo)本干燥，喪失正常生理活性。

滴加筒箭毒堿和新斯的明溶液過程中避免兩刺激電極接觸，發(fā)生短路。

操作過程中應(yīng)避免強(qiáng)力牽拉和手捏神經(jīng)或夾傷神經(jīng)肌肉。

分離神經(jīng)時(shí)注意手和金屬器械不要碰到神經(jīng)。

筒箭毒堿和新斯的明溶液要以任氏液為溶劑。

保持張力轉(zhuǎn)換器與標(biāo)本連線的張力保持不變。15參考文獻(xiàn)：1.人民衛(wèi)生出版社，生理學(xué)（第2版），北京，2012年12月，57頁2.鄭州大學(xué)生理教研室，《生理實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》，2010年十二月3.

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16殺人又救命的箭毒用毒藥殺人是古今中外謀殺案中經(jīng)常采用的方法，在中國有大家熟知的潘金蓮用砒霜毒殺武大郎，楊乃武與小白菜案中用巴豆泄死證人的藥店老板等等。拿破侖的死亡據(jù)說也有毒殺嫌疑。到了近代，發(fā)現(xiàn)了更為陰險(xiǎn)的毒藥，可以做到既看不到明顯的中毒癥狀，也化驗(yàn)不出來，因?yàn)榧具M(jìn)入人體后會(huì)很快分解為對人體無害的物質(zhì)，這給法醫(yī)正確判定死者的死因增加了極大的困難。1994年年初，日本警方相繼接到5名男女失蹤的報(bào)案，正當(dāng)警方為這件渺無頭緒的案件發(fā)愁時(shí)，1月26日突然接到報(bào)告說，在鹽尻市的農(nóng)田里發(fā)現(xiàn)了一具無名女尸，接著警方又在附近搜索，3周內(nèi)又挖掘出一具男尸。次日又在雪下個(gè)不停的凍土中挖出3具尸體。這5具尸體的共同特征是，沒有任何的明顯外傷，而且在進(jìn)一步的驗(yàn)尸中也為發(fā)現(xiàn)任何異常，致使破案工作陷入絕境。但是在尋訪死者家屬中卻意外地收獲了一個(gè)引人注目的線索，即這5人均是愛犬的人，恰好當(dāng)?shù)赜袀€(gè)訓(xùn)犬所，警方沿著這一線索進(jìn)行追蹤，終于將1名自報(bào)在訓(xùn)犬所作訓(xùn)犬員的嫌疑男子抓獲，在警方強(qiáng)大的攻勢下，男子承認(rèn)自己以訓(xùn)犬為誘餌引誘他們落入圈套，然后注射氯化琥珀膽堿骨骼肌松弛劑（箭毒）。

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