高效液相常遇到問題及解決對(duì)策

渦流集中〔Eddydiffusion〕，裝柱要松緊均一，這樣渦流集中小，柱效率高。分子集中〔Moleculardiffusion〕慢，被分別物質(zhì)停留時(shí)間長，則集中嚴(yán)峻。質(zhì)量轉(zhuǎn)移〔Masstransfer〕的非平衡移動(dòng)，使區(qū)帶變寬。動(dòng)相流速影響大，流速咖大會(huì)降低柱效率。固定相顆粒大小。1、開泵后壓力即上升至最高限度，經(jīng)過對(duì)色譜柱前，色譜柱，色譜柱后的分段測試，確定為檢測池堵塞。2、換檢測波長后，色譜峰面積比以前做的小很多，疑心進(jìn)樣環(huán)或管路漏夜，經(jīng)由氣味、景象和聲音可以覺察的問題A、溶劑的氣味1、漏液1、見前2、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味1abc查找修理手冊(cè)C、讀數(shù)不正常1、壓力不正常1、見前2、柱溫箱問題2、a、檢查并調(diào)整設(shè)定b、參照用戶手冊(cè)3、檢測器燈失效3、更換燈D、燈警告1、壓力超出極限值1、a、檢查是否堵塞b、檢查并調(diào)整極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見用戶手冊(cè)E、警告音1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見用戶手冊(cè)F、刺耳的短音或長音1、軸承失效1、見用戶手冊(cè)2、潤滑不夠2、進(jìn)展恰當(dāng)?shù)臐櫥?、機(jī)械故障3、見用戶手冊(cè)進(jìn)樣閥可能發(fā)生的問題A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈:1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難：1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)，重安裝2、定量環(huán)堵塞，清34管路1、無壓力〔或電源：供給恰當(dāng)?shù)膲毫Α搽娫?、轉(zhuǎn)子太緊：調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)：重安裝D、自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問題：1、堵塞，清洗或更換堵塞部件2、機(jī)械故障，見隨機(jī)修理手冊(cè)3、掌握器故障，修理或更換掌握器液相色譜系統(tǒng)的很多問題都能在譜圖上反映出來到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾1、篩板堵塞：a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷：填充色譜柱3、干擾峰：a、使用更長的色譜柱b、轉(zhuǎn)變流淌相或更換色譜柱4PHPHPH值更有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料外表的溶化點(diǎn)發(fā)生反響：a、參加離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更改色譜柱B、峰前延1、柱溫低：上升柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：使用流淌相作為樣品溶劑3、樣品過載：降低樣品含量4A1、A2C、峰分叉1、保護(hù)柱或分析柱污染能被堵塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流淌相：轉(zhuǎn)變樣品溶劑。假設(shè)可能實(shí)行流淌相作為樣品溶劑。D、峰變形1、樣品過載：削減樣品載量E、早出的峰變形1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：a、削減進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效應(yīng)：a、調(diào)整系統(tǒng)連接〔使用更短、內(nèi)徑更小的管路〕b、使用小體積的流通池G、K增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)峻1、二級(jí)保存效應(yīng)，反相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕c、參加鹽或緩沖劑〔或離子化樣品〕d、更換一支柱子2、二級(jí)保存效應(yīng)，正相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕c、參加水〔或多官能團(tuán)化合物〕d、試用另一種方法3、二級(jí)保存效應(yīng)，離子對(duì)參加三乙胺〔或堿性樣品〕H、酸性或堿性化合物的峰拖尾1、緩沖不適宜：a50-100mM的緩沖液bPkaPH值的緩沖液I、額外的峰1、樣品中有其他組份：正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰：a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰：a、檢查流淌相是否純潔b、使用流淌相作為樣品溶劑c、削減進(jìn)樣體積J、保存時(shí)間波動(dòng)12、流淌相組分變化，防止變化〔蒸發(fā)、反響等。3、色譜柱沒有平衡，在每一次運(yùn)行之前賜予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保存時(shí)間不斷變化1、流速變化，重設(shè)定流速；2、泵中有氣泡，從泵中除去氣泡；3、流淌相選擇不恰當(dāng)a、更換適宜的流淌相b、選擇適宜的混合流淌相L、基線漂移1、柱溫波動(dòng)〔測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器〕掌握好柱子和流淌相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2〔：使用級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流淌相在使用前進(jìn)展脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N〔不要用鹽酸〕4〔高壓造成流通池窗口裂開，產(chǎn)生噪音基線取出堵塞物或更換管子。參考檢測器手冊(cè)更換流通池窗。5及流速。6、柱平衡慢，特別是流淌相發(fā)生變化時(shí)：用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)展沖洗，更改流淌相時(shí)，在10-20倍體積的流淌相對(duì)柱子進(jìn)展沖洗。7、流淌相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成：檢查流淌相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保存的物質(zhì)〔高K值〕線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。重設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用的流淌相。10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸取波特長：將波長調(diào)整至最大吸取波特長M、基線噪音〔規(guī)章的〕1、在流淌相、檢測器或泵中有空氣：流淌相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。2更換泵密封。3、流淌相混合不完全：用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響〔柱溫過高，檢測器未加熱：削減差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備：斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)：在系統(tǒng)中參加脈沖阻尼器N、基線噪音〔不規(guī)章的〕1、漏液：檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流淌相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流淌相的組成。3、流淌相各溶劑不相溶：選擇互溶的流淌相4、檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測器內(nèi)有氣泡：清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)整器7、流通池污染〔即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音：用N的硝酸〔不能用磷酸〕清洗流通池8、檢測器燈能量缺乏：更換燈9、色譜柱填料流失或堵塞：更換色譜柱10、流淌相混合不均勻或混合器工作不正常：修理或更換混合器，在流淌相不走梯度時(shí)議不使用泵的混合裝置O、寬峰1、流淌相組成變化：重制備的流淌相2、流淌相流速太低：調(diào)整流速3、漏液〔特別是在柱子和檢測器之間：以及不正常的噪音。假設(shè)必要更換密封。4、檢測器設(shè)定不正確：調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過載b、檢測器對(duì)反響時(shí)間或池體積響應(yīng)過大c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長5、a、小體積進(jìn)樣〔例如：10ul100ul〕以1：10或1：100bc、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、削減響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低：增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效：更換保護(hù)柱8色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷：翻開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分別的物質(zhì)的峰：選擇其它類型的色譜柱以改善分別效果11、柱溫過低：提高柱溫。除非特別狀況，溫度不宜超過75℃12、檢測器時(shí)間常數(shù)太大：使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分別度降低1、流淌相污染或變質(zhì)〔引起保存時(shí)間變化：重配置流淌相2生程序。假設(shè)問題仍舊存在，進(jìn)口可能堵塞了，更換入口