藥物長期毒性實驗設(shè)計原則

關(guān)于藥物長期毒性實驗設(shè)計原則第一頁，共二十七頁，2022年，8月28日一、毒理學的研究方法急性毒性長期毒性特殊毒理學方法（致突變實驗、生殖毒性試驗、致癌作用試驗）第二頁，共二十七頁，2022年，8月28日長期毒性長期毒性是指以低劑量外來化合物長期給予實驗動物接觸，觀察其對實驗動物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。包括行為改變、血液、生化反應(yīng)以及各器官的損害程度等。長期毒性試驗是確定外來化合物的毒性下限，即長期接觸該化合物可以引起機體危害的閾劑量和無作用劑量。為進行該化合物的危險性評價與制定人接觸該化合物的安全限量標準提供毒理學依據(jù)，如最高容許濃度和每日容許攝入量等。第三頁，共二十七頁，2022年，8月28日1.對照原則在動物實驗中，要求相比較的各組間動物的種類、性別、年齡、體重等盡可能地一致。對照組與實驗組同等重要，兩組的動物數(shù)應(yīng)相等。(1)空白對照：又稱正常對照(2)標準對照：又稱有效對照或陽性對照(3)組間對照：(4)自身對照：一、試驗設(shè)計遵循三原則第四頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.重復(fù)原則(1)足夠的實驗樣本數(shù)：

(2)實驗結(jié)果的可重復(fù)性：3.隨機原則為了減少個體差異這種非處理因素的干擾，應(yīng)于實驗前將實驗動物依統(tǒng)計學原則進行隨機分組，以此達到盡可能降低非處理因素的混雜效應(yīng)，從而提高每組動物間均衡性的目的。第五頁，共二十七頁，2022年，8月28日二、長期毒性試驗的基本目的

1.預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、劑量-反應(yīng)和時間-反應(yīng)關(guān)系、可逆性等

2.預(yù)測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍（下圖）第六頁，共二十七頁，2022年，8月28日Log[Dose]BiologicalResponseNOEL:NoObservableEffectLevelNOAEL:NoObservableAdverseEffectLevelLOEL:LowestObservableEffectLevelLOAEL:LowestObservableAdverseEffectLevelFEL:FrankEffectLevel第七頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.其它毒作用的敏感檢測指標和生物學標志毒作用機制研究受試物的毒物動力學和代謝研究中毒的解救措施3.推測受試物重復(fù)給藥的臨床毒性靶器官或靶組織

4.提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標第八頁，共二十七頁，2022年，8月28日三、長期毒性動物實驗設(shè)計內(nèi)容1.受試物長期毒性試驗的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗受試物和上市藥品，因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標準規(guī)定的樣品，一般用中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等第九頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.實驗動物嚙齒類，常用6-9周齡大鼠；非嚙齒類，常用6-12月齡Beagle犬或猴。健康、體重均一，雌性應(yīng)未孕，動物雌雄各半。當臨床擬用于單性別時，可采用相應(yīng)性別的動物。每組動物的數(shù)量應(yīng)能夠滿足試驗結(jié)果的分析和評價的需要。一般大鼠可為雌、雄各10~30只，犬或者猴可為雌、雄各3~6只。第十頁，共二十七頁，2022年，8月28日3.給藥方式4.給藥頻率原則上應(yīng)每天給藥，且每天給藥時間相同。試驗周期長（3個月或以上）者，也可采取每周給藥6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點和臨床給藥方案等原因，應(yīng)根據(jù)具體藥物的特點設(shè)計給藥頻率原則上應(yīng)與臨床擬用藥途徑相同。如選擇其他的給藥途徑，應(yīng)說明理由第十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.給藥期限根據(jù)藥物的給藥療程確定給藥期限：單次給藥：2周≤2周1個月≤1個月1或3個月≤3個月3或6個月≤6個月6或9個月＞6個月6或9個月第十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日6.給藥劑量

三個劑量組：高、中、低+空白組低劑量組原則上應(yīng)高于動物藥效學試驗的等效劑量或預(yù)期的臨床治療劑量的等效劑量。高劑量組原則上應(yīng)使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至可引起少量動物死亡（對于毒性較小的中藥，可盡量采用最大給藥量）。在高、低劑量之間至少應(yīng)再設(shè)一個中劑量組。第十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日Log[Dose]BiologicalResponse低劑量組：NOAEL中劑量組：LOAEL高劑量組第十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日

7.觀察指標

1.一般狀況觀察在試驗期間，應(yīng)觀察動物外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便、攝食量、體重、給藥局部反應(yīng)。2.血液學指標至少應(yīng)觀察紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、白細胞計數(shù)及其分類、血小板、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、凝血酶原時間等。當受試物可能對造血系統(tǒng)有影響時，應(yīng)進一步進行骨髓的檢查。見表1第十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日血液學指標●紅細胞計數(shù)●血紅蛋白●紅細胞容積●平均紅細胞容積●平均紅細胞血紅蛋白●平均紅細胞血紅蛋白濃度●網(wǎng)織紅細胞計數(shù)●白細胞計數(shù)及其分類●血小板計數(shù)●凝血酶原時間表1血液學指標第十六頁，共二十七頁，2022年，8月28日

3.血液生化檢查見表2血液生化學指標●天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶●丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶●堿性磷酸酶●γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（非嚙齒類動物）●尿素氮●肌酐●總蛋白●白蛋白●血糖●總膽紅素●總膽固醇●甘油三酯●鈉離子濃度●鉀離子濃度●氯離子濃度●肌酸磷酸激酶表2血液生化學指標第十七頁，共二十七頁，2022年，8月28日4、體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查非嚙齒類動物還應(yīng)進行體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查等。見表3非嚙齒類動物尿液分析指標●尿液外觀●比重●pH值●尿糖●尿蛋白●尿膽紅素●尿膽原●酮體●潛血●白細胞表3非嚙齒類動物尿液分析指標

第十八頁，共二十七頁，2022年，8月28日5、系統(tǒng)尸解和組織病理學檢查5．1臟器系數(shù)應(yīng)對臟器進行稱重，并計算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=臟器濕重/動物總體重，具體見表4長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官●腦●心臟●肝臟●肺臟●脾臟●腎臟●腎上腺●胸腺●睪丸●附睪●子宮●卵巢表4長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官第十九頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.2系統(tǒng)尸解應(yīng)對所有動物進行尸解，尸解應(yīng)全面細致，為組織病理學檢查提供參考。具體臟器、組織參見下。腦（大腦、小腦、腦干），脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、膽囊*腎臟、腎上腺、脾臟、胰腺、氣管、肺、主動脈、心臟、附睪、睪丸、卵巢、子宮、前列腺乳腺、坐骨神經(jīng)、膀胱、眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時）*、視神經(jīng)*、給藥局部、骨髓、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）第二十頁，共二十七頁，2022年，8月28日如有合理的理由說明所申報的中藥、天然藥物復(fù)方制劑有一定的安全性，所檢查的臟器和組織可減少為：心、肝、脾肺、腎、腦、胃、小腸、大腸、垂體、脊髓、骨髓、淋巴結(jié)、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺及給藥局部組織等。第二十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.3病理切片的檢查

取得到的臟器進行病理切片的制作，制作過程包括取材、固定、脫水與透明、浸蠟、包埋、切片、攤片、染色、封片等過程，對病理切片進行分析，觀察藥物對其的毒性反應(yīng)。第二十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日其它的注意事項：1.適應(yīng)期：嚙齒：5-7天，非嚙齒：1-2周2.一般觀察：每周稱量一次大鼠體重和飼料消耗，進行大鼠的一般情況觀察，包括：外觀體征（毛色、皮膚、腹脹、消瘦、）、行為活動（抽搐、共濟失調(diào)、）、腺體分泌（眼、鼻、耳、生殖器）、呼吸（呼吸減慢、呼吸急促）、排泄物（顏色、形狀）和死亡情況（死亡時間、死亡前反應(yīng)）以及死亡時間分布。3.長期毒性試驗應(yīng)在給藥結(jié)束時留存部分動物進行恢復(fù)期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。根據(jù)毒性反應(yīng)的情況確定恢復(fù)期。一般半個月。第二十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日通常實驗記錄的項目和內(nèi)容為：（1）實驗名稱、實驗日期、實驗者；（2）受試對象：動物種類、品系、編號、體重、性別、健康狀況、飼料、離體器官名稱等；（3）實驗藥物或試劑：名稱、來源（生產(chǎn)廠）、劑型、批號、規(guī)格、含量、濃度、給藥體積、給藥劑量、給藥時間、給藥間隔、療程等；（4）實驗儀器：主要儀器名稱、生產(chǎn)廠、型號、規(guī)格等；第二十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日（5）