第三章 多標記分析儀

2023/2/5現代儀器分析

modern

InstrumentalAnalysis

2023/2/52023/2/5第三章

多標記分析儀PEVictorTMX4

2023/2/5第三章多標記分析儀功能：比色讀數功能化學發(fā)光功能熒光讀數功能時間分辨熒光讀數功能第一節(jié)、多標記分析儀原理2023/2/5一、比色讀數功能2023/2/5酶聯(lián)免疫檢測ELISA2023/2/5二、化學發(fā)光功能Luminescence=theemissionoflightfromanysubstanceoccursfromelectronicallyexcitedstatesChemiluminescence=lightemittedbyachemicalreactionBioluminescence=typeofchemiluminescencechemicalreactioniscatalyzedbyanenzymeimportantinstudiesofgeneexpressionandgeneregulation2023/2/5三、熒光讀數功能分子熒光：基態(tài)(S0)→激發(fā)態(tài)(S1、S2激發(fā)態(tài)振動能級)：吸收特定頻率的輻射。符合什么公式？激發(fā)態(tài)→基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢。符合什么公式？分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。濃度很低時，熒光強度

If

=2.3I0lc

=Kc

2023/2/5

鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經紫外光激發(fā)后不僅熒光強度高，而且其衰變時間也長，可達幾百個s，而樣品中蛋白質天然本底熒光的衰變時間為1-10ns，相差5-6個數量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除了非特異干擾的影響。

四、時間分辨熒光讀數功能2023/2/5背景熒光激發(fā)周期超長衰減時間發(fā)射光強度時間檢測窗口四、時間分辨熒光讀數功能2023/2/52023/2/5第二節(jié)多標記分析儀的光學系統(tǒng)2023/2/5Photodiode一光吸收模塊光路圖2023/2/5二化學發(fā)光模塊光路圖2023/2/5三熒光檢測模塊光路圖2023/2/5激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒光單色器及設有門控的檢測器四時間分辨熒光模塊光路圖2023/2/5五與分光光度計不同之處1、光路不同2、樣品池不同3、單色器不同4、通量不同5、樣品量不同6、應用學科不同2023/2/52023/2/5第三節(jié)多標記分析儀的應用2023/2/5核酸和蛋白質的光吸收檢測酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）細胞活性檢測（MTT）酶動力學分析細菌內毒素檢測濃度測定乙酰膽堿脂酶檢測環(huán)境監(jiān)測一、光吸收主要應用2023/2/5報告基因基因檢測化學發(fā)光免疫分析核酸定量(PCRQuantification)酶活分析活性氧分析二、發(fā)光主要應用2023/2/5濃度檢測活性分析熒光ELISA酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）研究分子之間相互作用三、熒光主要應用2023/2/5時間分辨熒光免疫激素：甲狀腺激素、甾體類激素。病毒性肝炎標志物。腫瘤相關抗原。藥物。多肽類。四、時間分辨熒光主要應用2023/2/5

更廣的動力學范圍更強的靈敏度每孔更少的試劑更少的實驗步驟信號穩(wěn)定性超過