標準解讀
《GB/T 35342-2017 松材線蟲分子檢測鑒定技術規(guī)程》是一項國家標準,旨在為松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)的分子生物學檢測提供一套標準化的操作流程。該標準詳細規(guī)定了從樣本采集、DNA提取到PCR擴增及結果分析等一系列步驟的具體方法和技術要求。
首先,在樣品采集方面,標準明確了不同類型的植物材料如何進行正確采集,并強調了采集過程中需要注意的問題以保證樣本的質量和代表性。例如,對于疑似感染松材線蟲的樹木或木材,應選取典型病斑部位作為取樣點;同時,還提出了關于樣本保存條件的要求,如使用干燥劑保持樣品干燥等措施來防止DNA降解。
其次,關于DNA提取過程,《GB/T 35342-2017》推薦了幾種適用于不同類型植物組織的高效DNA提取方法,并對每一步驟所需試劑及其濃度、操作溫度與時間等參數進行了具體說明。此外,也提到了如何通過電泳或其他方式評估所提取DNA的質量和純度。
接下來是PCR反應體系構建部分,本標準給出了推薦使用的引物序列以及針對松材線蟲特異性靶標區(qū)域設計的擴增條件,包括退火溫度、循環(huán)次數等關鍵參數。為了確保實驗結果準確可靠,還特別強調了設置陽性對照和陰性對照的重要性。
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....
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- 現行
- 正在執(zhí)行有效
- 2017-12-29 頒布
- 2018-07-01 實施
文檔簡介
ICS65020
B16.
中華人民共和國國家標準
GB/T35342—2017
松材線蟲分子檢測鑒定技術規(guī)程
TechnicalregulationformoleculardetectionofBursaphelenchusxylophilus
SteinerandBuhrerNickle
()
2017-12-29發(fā)布2018-07-01實施
中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布
中國國家標準化管理委員會
GB/T35342—2017
前言
本標準按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口
(SAC/TC271)。
本標準起草單位南京林業(yè)大學中國檢驗檢疫科學研究院
:、。
本標準主要起草人葉建仁吳小芹陳鳳毛葛建軍黃麟孫波
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T35342—2017
引言
本文件的發(fā)布機構提請注意聲明符合本文件時可能涉及和中有關松材線蟲分子檢
,,5.1.25.3.2
測引物的相關專利的使用
。
本文件的發(fā)布機構對于該專利的真實性有效性和范圍無任何立場
、。
該專利持有人已向本文件的發(fā)布機構保證他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下
,,
就專利授權許可進行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機構備案相關信息可以通過以下
。。
聯(lián)系方式獲得
:
專利持有人姓名葉建仁
:
地址南京市龍蟠路號南京林業(yè)大學
:159,(210037)
請注意除上述專利外本文件的某些內容仍可能涉及專利本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專
,。
利的責任
。
Ⅱ
GB/T35342—2017
松材線蟲分子檢測鑒定技術規(guī)程
1范圍
本標準規(guī)定了松材線蟲分子檢測鑒定的技術規(guī)程
。
本標準適用于進出境植物檢疫國內植物檢疫以及林業(yè)有害生物調查中松材線蟲及其寄主植物和
、
制品攜帶松材線蟲的分子檢測鑒定工作
。
2術語和定義
下列術語和定義適用于本文件
。
21
.
松材線蟲pinewoodnematodeBursaphelenchusxylophilusSteineretBuhrerNickle
[()]
一種無脊椎動物屬于線蟲門側尾腺綱滑刃目滑刃
,(Nematoda)、(Secernentea)、(Aphelenchida)、
總科滑刃科傘滑刃亞科傘滑刃屬
(Aphelenchoidoidea)、(Aphelenchoididae)、(Bursaphelenchinae)、
Bursahelenchus的植物寄生線蟲
(p)。
22
.
松材線蟲病pinewiltdiseasecausedbypinewoodnematode
又名松樹萎蔫病是由松材線蟲寄生在松樹體內所引起的一種松樹毀滅性森林病害
,。
23
.
分子檢測moleculardetection
以功能基因核糖體等區(qū)域為靶標采用分子生物學的方法在基因水平上對物種進行鑒定
、ITS,。
24
.
寄主植物及其制品pinewoodandwoodproducts
松材線蟲寄主植物及其原木鋸材和用于承載包裝鋪墊支撐加固貨物的木質材料如木板箱
、、、、、,、
木條箱木托盤木框木桶木軸木楔墊木枕木和襯木等經人工合成或經加熱加壓等深度加工的
、、、、、、、。、
包裝木質材料如膠合板纖維板等除外
,、。
25
.
引物primer
一段短核苷酸序列其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點在聚合反應時引導合成一條與模板
。,,
互補的的序列
DNA。
26
.
TaqMan探針TaqManprobe
一段寡核苷酸序列兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團探針完整時報告基團
,。,
發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收擴增時酶的外切酶活性將探針酶切降解使報告熒光
;PCR,Taq5'-3',
基團和淬滅熒光基團分離從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號即每擴增一條鏈就有一個熒
,,DNA,
光分子形成熒光信號與擴增的拷貝數具有一一對應的關系
,。
27
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