細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒

細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑盒（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“試劑盒”）的術(shù)語(yǔ)和定義、要求、試驗(yàn)方法、標(biāo)簽和使用說(shuō)明書(shū)、包裝、運(yùn)輸和貯存等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)人體樣本（包括血液、腦脊液和糞便等）或其培養(yǎng)物進(jìn)行單次檢測(cè)可報(bào)告三種及以上細(xì)菌和真菌（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“病原菌”,不包括支原體和衣原體）的試劑盒的質(zhì)量控制。適用于檢測(cè)原理為聚合酶鏈反應(yīng)等溫?cái)U(kuò)增以及第二代測(cè)序等技術(shù)的試劑盒。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的不同基因的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T29791.2體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息（標(biāo)示）第2部分：專(zhuān)業(yè)用體外診斷試劑3術(shù)語(yǔ)和定義以下術(shù)語(yǔ)與定義適用于本文件。3.1核酸nucleicacid由核苷酸或脫氧核苷酸通過(guò)3’，5’-磷酸二酯鍵連接而成的一類(lèi)生物大分子。注：具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。包括核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）兩類(lèi)。4要求外觀外觀應(yīng)符合但不限于以下要求：a）試劑盒各組分應(yīng)齊全、完整，液體無(wú)滲漏;b）中文包裝標(biāo)簽應(yīng)清晰，無(wú)磨損。核酸提取功能核酸提取功能應(yīng)符合如下要求：

a）b）料；a）b）料；c）內(nèi)標(biāo)和（或）對(duì)照制造商宜根據(jù)其產(chǎn)品工藝特點(diǎn)，在反應(yīng)體系中合理設(shè)置內(nèi)標(biāo)和（或）對(duì)照，內(nèi)標(biāo)和（或）對(duì)照宜與樣本同等對(duì)待。陰性參考品符合率對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的陰性參考品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性參考品設(shè)置宜參考如下要求：a）包含一定數(shù)量的非目標(biāo)病原菌，可以是獨(dú)立或混合樣本；b）包含與目標(biāo)病原菌種屬相近、感染部位相同或感染癥狀相似的非目標(biāo)病原菌。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A。陽(yáng)性參考品符合率對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的陽(yáng)性參考品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性且與已知病原體種類(lèi)相符。陽(yáng)性參考品設(shè)置宜參考如下要求：a）包含全部目標(biāo)病原菌，可以是獨(dú)立或混合樣本；b）可以每種目標(biāo)病原菌只選擇一株具有代表性的菌株；c）對(duì)于難以獲得標(biāo)準(zhǔn)株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A。檢出限對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的檢出限參考品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)要求。制造商應(yīng)規(guī)定并提供試劑盒對(duì)于每種目標(biāo)病原菌的檢出限。宜優(yōu)先選擇感染性單位，如菌落形成單位每毫升（CFU/mL）；如難以獲得感染性單位，可以選擇非感染性單位，如拷貝數(shù)每毫升（copies/mL）等。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A。重復(fù)性對(duì)國(guó)家參考品或企業(yè)參考品中的重復(fù)性參考品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)滿足：a）對(duì)于報(bào)告Ct值的試劑盒，對(duì)同一份樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)均為陽(yáng)性且與已知病原體種類(lèi)相符，目標(biāo)病原菌Ct值的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5.0%；或b）對(duì)于不報(bào)告Ct值的試劑盒，對(duì)同一份樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)均為陽(yáng)性且與已知病原體種類(lèi)相符。重復(fù)性參考品應(yīng)包括高、低兩個(gè)濃度，具體設(shè)置宜參考如下要求：a）可以使用包含目標(biāo)病原菌的混合樣本進(jìn)行驗(yàn)證，覆蓋全部目標(biāo)病原菌；或b）可以使用包含代表性的目標(biāo)病原菌的獨(dú)立或混合樣本進(jìn)行驗(yàn)證，覆蓋有限數(shù)量目標(biāo)病原菌；c）對(duì)于難以獲得標(biāo)準(zhǔn)株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的國(guó)家參考品信息可參見(jiàn)附錄A。穩(wěn)定性可對(duì)效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證：a）效期穩(wěn)定性：制造商應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到效期后一定時(shí)間內(nèi)的產(chǎn)品檢測(cè)陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限、重復(fù)性，應(yīng)符合4.4?4.7項(xiàng)要求。效期穩(wěn)定性試驗(yàn)，一般情況下效期為1年時(shí)選擇不超過(guò)1個(gè)月的產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，效期為半年時(shí)選擇不超過(guò)半個(gè)月的產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，以此類(lèi)推。但如超過(guò)規(guī)定時(shí)間，產(chǎn)品符合要求時(shí)也可以接受；b）熱穩(wěn)定性：取有效期內(nèi)的試劑盒在制造商規(guī)定的溫度放置規(guī)定時(shí)間，檢測(cè)陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限、重復(fù)性，應(yīng)符合4?4.7項(xiàng)要求。注1：熱穩(wěn)定性試驗(yàn)不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇），^方法的組合，但所選用方法宜能驗(yàn)證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。以保證在效期內(nèi)產(chǎn)品性能符合標(biāo)準(zhǔn)要求。試驗(yàn)方法外觀在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查。核酸提取及純化按照制造商提供的方法進(jìn)行試驗(yàn)。內(nèi)標(biāo)和對(duì)照按照制造商提供的方法進(jìn)行試驗(yàn)。陰性參考品符合率參考國(guó)家或企業(yè)參考品說(shuō)明書(shū)并按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的陰性參考品進(jìn)行檢測(cè)。陽(yáng)性參考品符合率參考國(guó)家或企業(yè)參考品說(shuō)明書(shū)并按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的陽(yáng)性參考品進(jìn)行檢測(cè)。檢出限參考國(guó)家或企業(yè)參考品說(shuō)明書(shū)并按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的檢出限參考品進(jìn)行檢測(cè)。重復(fù)性參考國(guó)家或企業(yè)參考品說(shuō)明書(shū)并按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，對(duì)國(guó)家或企業(yè)參考品中的重復(fù)性參考品重復(fù)檢測(cè)10次。穩(wěn)定性效期穩(wěn)定性取到效期后一定時(shí)間內(nèi)的試劑盒，按照5.4?5.7方法進(jìn)行檢測(cè)。熱穩(wěn)定性取有效期內(nèi)的試劑盒在制造商規(guī)定的溫度放置規(guī)定時(shí)間，按照5.4?5.7方法進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)簽和使用說(shuō)明書(shū)應(yīng)符合GB/T29791.2的規(guī)定。包裝、運(yùn)輸和貯存包裝包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。包裝容器應(yīng)保證密封性良好，完整，無(wú)泄漏，無(wú)破損。運(yùn)輸試劑盒應(yīng)按制造商的要求運(yùn)輸。在運(yùn)輸過(guò)程中，應(yīng)防潮，防止重物堆壓，避免陽(yáng)光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質(zhì)接觸，防止內(nèi)外包裝破損。貯存試劑盒應(yīng)在制造商規(guī)定條件下保存。A.6A.6規(guī)格和組成A.6A.6規(guī)格和組成附錄A（資料性附錄）34種細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑國(guó)家參考品說(shuō)明書(shū)A.1總則附錄A給出了本標(biāo)準(zhǔn)“4要求”項(xiàng)中適用的國(guó)家參考品信息，該國(guó)家參考品為“34種細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑國(guó)家參考品（參考品批號(hào)：370026-201801）”。A.2類(lèi)別體外診斷試劑參考品。A.3批號(hào)370026-201801。A.4性狀液體。A.5用途本參考品為首批研制，參考品原料系34種可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液、呼吸道、腸道以及生殖道感染的致病性細(xì)菌或真菌（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“病原菌”，不包括支原體和衣原體）的培養(yǎng)物。本參考品適用于對(duì)人體樣本或其培養(yǎng)物進(jìn)行單次檢測(cè)可報(bào)告3種及以上病原菌檢測(cè)結(jié)果的多重核酸檢測(cè)試劑盒（聚合酶鏈反應(yīng)法、恒溫?cái)U(kuò)增法以及第二代測(cè)序法）部分性能要求的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)：陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復(fù)性及最低檢出限。本參考品不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告1種或2種病原菌的不同靶基因的試劑盒。不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告1種或2種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。A.7A.7使用方法本品由7支混合參考品組成。參考品規(guī)格見(jiàn)表A.1,混合參考品詳細(xì)組成見(jiàn)梃.2表A.1參考品規(guī)格類(lèi)型編號(hào)規(guī)格支數(shù)混合參考品M10.2mL/支1M20.2mL/支1M30.2mL/支1M40.2mL/支1M50.2mL/支1M60.2mL/支1M70.2mL/支1■■本品規(guī)格均不少于0.2ml/支。表A.2混合參考品M1?M7詳細(xì)組成編號(hào)細(xì)菌和真菌及其耐藥基因細(xì)菌或真菌英文濃度CFU/mLM1屎腸球菌[vanA]Enterococcusfaecium4.9X108肺炎鏈球菌Streptococcuspneumoniae1.0X107粘質(zhì)沙雷氏菌Serratiamarcescens1.0X109大腸埃希氏菌Escherichiacoli7.8X108表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis2.9X108M2鮑曼不動(dòng)桿菌Acinetobacterbaumannii2.7X108肺炎克雷伯菌[KPC]Klebsiellapneumoniae1.8X108熱帶念珠菌Candidatropicalis1.8X106克柔念珠菌Candidakrusei2.3X106緩癥鏈球菌Streptococcusmitis2.1X108M3糞腸球菌[vanB]Enterococcusfaecalis1.8X108白色念珠菌Candidaalbicans4.0X106產(chǎn)酸克雷伯菌Klebsiellaoxytoca3.2X108化膿鏈球菌Streptococcuspyogenes2.2X108M4流感嗜血桿菌Haemophilusinfluenzae5.0X108光滑念珠菌Candidaglabrata9.6X106金黃色葡萄球菌[mecA]Staphylococcusaureus2.3X109奇異變形桿菌Proteusmirabilis1.1X108無(wú)乳鏈球菌Streptococcusagalactiae1.6X108M5單核細(xì)胞增多性李斯特菌Listeriamonocytogenes1.6X109陰溝腸桿菌Enterobactercloacae4.8X109銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa5.4X108近平滑念珠菌Candidaparapsilosis1.7X107腦膜炎奈瑟菌Neisseriameningitidis5.5X108M6滕黃微球菌Micrococcusluteus8.0X107馬紅球菌Rhodococcusequi7.2X108格氏李斯特菌Listeriagrayi2.0X109瓊氏不動(dòng)桿菌Acinetobacterjunii1.1X109副流感嗜血桿菌Haemophilusparainfluenzae1.5X109M7干燥奈瑟氏菌Neisseriasicca6.9X108熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens6.9X108嗜水氣單胞菌Aeromonoashydrophila7.6X108葡萄牙念珠菌Candidalusitaniae2.1X107嗜肺軍團(tuán)菌Legionellapneumophila5.4X108注：本參考品中的大腸埃希氏菌屬于O157：H7血清型。注：vanA/B,萬(wàn)古霉素耐藥基因；KPC,碳青酶烯耐藥基因；mecA,甲氧西林耐藥基因。參考品稀釋?zhuān)核谢旌蠀⒖计窂?fù)融至室溫后，用無(wú)核