Her2 蛋白定量測(cè)定試劑盒(ELISA)20160612

北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司天津勝發(fā)生物技術(shù)有限公司（研發(fā)部）乳癌檢測(cè)新時(shí)代---------

腫瘤標(biāo)志物HER2/neu-ECD蛋白的臨床應(yīng)用1一、乳腺癌與HER2ECD概述二、HER2ECD的臨床應(yīng)用三、血清HER2ECD檢測(cè)與其他檢測(cè)相輔相成四、試劑盒簡況及對(duì)比實(shí)驗(yàn)（臨床實(shí)驗(yàn)）五、常見問題2

一、乳腺癌與HER2ECD概述1.乳腺癌

1.1我國乳腺癌發(fā)病率

1.2乳腺癌的分子分型2.HER2/neu的結(jié)構(gòu)與功能3.乳腺癌與HER23.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度3.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度

3

1.1我國乳腺癌發(fā)病率41.腔型A---luminalA(ER+and/orPR+,HER2-

）2.腔型B--luminalB(ER+and/orPR+,HER2+)3.HER2過表達(dá)型---(ER-,PR-,HER2+)惡性程度高4.正常乳腺樣型---normalbreast-like5.基底細(xì)胞樣型---basal-like(ER-,PR-,HER2-,CK5/6+)1.2乳腺癌的分子分型5

2.HER2/neu的結(jié)構(gòu)與功能屬表皮生長因子受體家族，包括信號(hào)肽，胞外區(qū)（ECD），跨膜區(qū)和胞漿區(qū)；胞漿區(qū)具受體酪氨酸激酶活性；

ECD為配體結(jié)合域，與受體結(jié)合后使Her2受體自身磷酸化并激活其酪氨酸激酶活性，最終促進(jìn)細(xì)胞增殖；Her2基因過度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖和表型惡性轉(zhuǎn)化，因而與腫瘤形成密切相關(guān)；

在乳腺癌患者中，約有1/4-1/3病人的腫瘤組織為Her2表達(dá)陽性。Her2陽性的乳腺癌疾病進(jìn)展速度快、惡性程度更高，對(duì)化療耐藥、化療緩解期縮短，更容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后也差。HER-2/neu在正常人體腔上皮、腺上皮和胚胎中均有表達(dá)，但無基因擴(kuò)增。特異性較高。

乳腺癌腫瘤細(xì)胞HER2/neu

腫瘤蛋白（p185）增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲力HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER2/neu

細(xì)胞膜外區(qū)域

20-30%初發(fā)性乳腺癌HER2/neu陽性3.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度轉(zhuǎn)移性乳腺癌HER2/neu陽性高達(dá)90%來源：美國腫瘤協(xié)會(huì)；200783.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度HER2ECD陽性18.5%初發(fā)的乳腺癌43%轉(zhuǎn)移性乳腺癌HER2ECD陽性WalterPCarney,etal.ClinicalChemistry.1579-1598(2003)43%9復(fù)發(fā)的乳腺癌患者中HER2ECD陽性率25％50％19％68％局部復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移34％IHC陰性的初發(fā)乳腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移時(shí)HER2ECD轉(zhuǎn)為陽性的比率來源：美國腫瘤協(xié)會(huì)；200710HER2/neu檢測(cè)應(yīng)用指南ArchivesofPathologyandLaboratoryMedicine:2007,Jan(131),18–43.

美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)：……對(duì)于所有的浸潤性乳腺癌患者，HER2/neu都應(yīng)該推薦作為常規(guī)檢測(cè)……11...…12二、HER2-ECD的臨床應(yīng)用判定值：15ng/mL（15ug/L）

疾病范圍：乳腺癌，胃癌，腸癌，膀胱癌，肺癌等

評(píng)估預(yù)后（腫瘤分型、預(yù)示生存期等）

預(yù)測(cè)療效（指導(dǎo)用藥，激素、化療或Herceptin）

監(jiān)測(cè)病程（藥效評(píng)估、監(jiān)測(cè)進(jìn)展、提示復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等）

篩查指標(biāo)（結(jié)合其他標(biāo)志物）13早期篩查：臨床治療方案的制定：Her2陽性乳腺癌患者對(duì)蒽環(huán)類抗生素和紫杉醇有良好的效果，尤其對(duì)于赫賽汀有非常好的治療效果。治療過程中病程監(jiān)測(cè)：預(yù)后的觀察：

提前2-9個(gè)月提示復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品應(yīng)用：血清HER2-ECD臨床應(yīng)用組織活檢診斷

手術(shù)/

新輔助治療淋巴結(jié)陰性/陽性

輔助治療30%

復(fù)發(fā)率

(轉(zhuǎn)移性乳腺癌)基礎(chǔ)水平

HER2-ECD檢測(cè)結(jié)合組織活檢新輔助治療中檢測(cè)血清HER2-ECD水平結(jié)合血清HER2-ECD

檢測(cè)，影像學(xué)檢查和靶向治療輔助治療中血清HER2-ECD

水平檢測(cè)15HER2ECD監(jiān)測(cè):復(fù)發(fā)(初發(fā)性乳腺癌)28％30％47％76％HER2CEACA15-3HER2+CEA+CA15-3腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)的敏感性比較敏感性200例初發(fā)乳腺癌患者，隨訪1－4年。發(fā)現(xiàn)89例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌，在這89例復(fù)發(fā)患者中HER2ECD敏感性28％，提前4.5月（局部復(fù)發(fā)敏感性低于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，剔除局部復(fù)發(fā)，則HER2ECD敏感性31％），CEA30％，提前4.8月，CA15347％，提前4.9月。三者聯(lián)合檢測(cè)則敏感性上升到76％16HER2ECD監(jiān)測(cè):復(fù)發(fā)(轉(zhuǎn)移性乳腺癌)敏感性腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)的敏感性比較HER2CA15-3CEAHER2+CEA+CA15-367％54％43％76％DnistrianAM,etal.JClinLigandAssay.215-220(2003)17三、血清HER2ECD檢測(cè)與其他檢測(cè)相輔相成1.檢測(cè)方法影像學(xué)：

鉬靶檢測(cè)等

病理：免疫組化（IHC）HER2/neu蛋白原位雜交（FISH,DISH，CISH）HER2/neu基因血清：HER2ECD（HER2蛋白胞外區(qū)）2.血清HER2-ECD檢測(cè)與病理學(xué)檢測(cè)比較

優(yōu)劣勢(shì)&相關(guān)性181.HER2/neu檢測(cè)方法

HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER-2/neu

細(xì)胞膜外區(qū)域1IHC3ELISA2FISHIHC/FISHimagescourtesyofRYOsamura,MD,TokaiUniversitySchoolofMedicine19中醫(yī)：乳腺鉬靶片。大多數(shù)醫(yī)院大夫都選用：大夫手診，乳腺彩超西醫(yī)：乳腺針吸細(xì)胞病理學(xué)：穿刺成功率高達(dá)100%，早期診斷率16.9%，總診斷準(zhǔn)確率高達(dá)98.6%。醫(yī)院里常用的檢測(cè)方法：2.血清HER2-ECD檢測(cè)與其他檢測(cè)比較21存在一些病例，IHC和FISH得出的均為不確定的結(jié)果，無法對(duì)Her2狀態(tài)做出明確判斷，我們的產(chǎn)品為定量檢測(cè)，結(jié)果判定明確。經(jīng)IHC或FISH判斷為Her2陽性的患者未必能從靶向治療中獲益，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因可能是檢測(cè)體系本身所造成的假陽性，也可能是Her2的信號(hào)通路中還存在其他異常位點(diǎn)。腫瘤異質(zhì)性的存在導(dǎo)致IHC和FISH均無法避免假陰性結(jié)果。部分患者無法提供檢測(cè)所需的組織樣本或者組織標(biāo)本無法滿足進(jìn)行檢測(cè)的基本要求。既往的臨床研究表明，患者病情發(fā)展及治療過程中會(huì)發(fā)生Her2狀態(tài)變化，而IHC和FISH均無法對(duì)患者的Her2狀態(tài)進(jìn)行動(dòng)態(tài)、實(shí)時(shí)的檢測(cè)。酶免疫的方法相對(duì)于FISH和IHC的優(yōu)勢(shì)2.血清HER2-ECD檢測(cè)與病理學(xué)檢測(cè)比較之相關(guān)性血清HER2-ECD檢測(cè)與病理學(xué)檢測(cè)互為有益補(bǔ)充，從多維度多方向改善乳腺癌疾病管理。23

四、勝發(fā)興生物Her2試劑盒臨床研究

1.試劑盒檢測(cè)原理24252.試劑盒性能指標(biāo)線性范圍：0.16-20ng/mL檢測(cè)范圍：0-400ng/mL準(zhǔn)確度：85%-115%孔間差：±10%批間差：±10%樣本數(shù)：48孔試劑盒-32-40份

96孔試劑盒-80-88份26

3.臨床研究注：臨床試驗(yàn)樣品的選擇27以對(duì)比試劑為標(biāo)準(zhǔn)，得出如下結(jié)果：陽性符合率＝413/（413+16）×100%＝96.27％陰性符合率＝618/（618+3）×100%＝99.52％總符合率＝（413+618）/1050×100%=98.19％Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）勝發(fā)興Her2試劑盒與西門子化學(xué)發(fā)光試劑盒相同樣本結(jié)果比較Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）28勝發(fā)興Her2試劑盒與西門子化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測(cè)相同樣本結(jié)果比較經(jīng)計(jì)算，N=1045次，r=0.9727，P=0.000（P<0.001），根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，兩組數(shù)據(jù)高度相關(guān)29臨床研究結(jié)論

結(jié)果顯示同一份血清標(biāo)本分別用北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的人Her2/neu蛋白定量測(cè)定試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）和已獲得SFDA注冊(cè)證的SiemensHealthcareDiagnosticsInc.生產(chǎn)的HER-2/neu蛋白測(cè)定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)在中國已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定的兩組數(shù)據(jù)的相關(guān)系數(shù)和相關(guān)回歸方程均具有顯著性。

綜上所述，臨床應(yīng)用中兩者之間具有等效性。與對(duì)照試劑相比，二者同樣具有檢測(cè)性能穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，操作簡便，檢測(cè)時(shí)間短等特點(diǎn)，有利于快速及時(shí)地報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。適合在國內(nèi)檢驗(yàn)科或臨床科室的實(shí)驗(yàn)室推廣使用。30五、常見問題病理檢測(cè)為陽性，為何試劑盒檢測(cè)為陰性？陰性結(jié)果意義何在？兩種方法的檢測(cè)對(duì)象分別為組織中的HER2/neu與從細(xì)胞表面脫落至血清中的HER2-ECD，病理檢測(cè)的陽性率較高，特異性則相對(duì)較低。二者結(jié)果不會(huì)完全一致，只具有一定程度的相關(guān)性，在轉(zhuǎn)移型乳癌中相關(guān)性良好。血清HER2-ECD結(jié)果陰性，可作為初始值保存，之后進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)，作為個(gè)體化治療的依據(jù)。病理檢測(cè)為陰性，為何試劑盒檢測(cè)為陽性？血清中的HER2-ECD可以早于病理檢測(cè)幾個(gè)月提示潛在轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)?？煞裼迷噭┖衼碓缙诤Y查？可以結(jié)合其他檢測(cè)手段進(jìn)行早期篩查。與化學(xué)發(fā)光法相比有何優(yōu)勢(shì)？

經(jīng)典方法，價(jià)格較低，且不需要昂貴配套儀器，各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)均可應(yīng)用，便于推廣。有哪些應(yīng)用實(shí)例？海軍總醫(yī)院、上海第一人民醫(yī)院、第二炮兵總醫(yī)院、陜西省腫瘤醫(yī)院、醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院、解放軍307醫(yī)院、北京潞河醫(yī)院、北京海斯特臨床檢驗(yàn)所等。31公司簡介研發(fā)中心：天津勝發(fā)生物技術(shù)有限公司于2011年在天津開發(fā)區(qū)注冊(cè)，入住天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，共享研究院大平臺(tái)研發(fā)設(shè)施，是高科技生物醫(yī)藥產(chǎn)品研發(fā)企業(yè)，2013年認(rèn)定為國家高新技術(shù)企業(yè)。生產(chǎn)車間：2011年在北京平谷區(qū)注冊(cè)成立北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司，新建10萬級(jí)GMP生產(chǎn)車間500平米，廠房1000平米。產(chǎn)品：人表皮生長因子受體2（Her2/neu）檢測(cè)試劑盒，國食藥械（準(zhǔn)）字2014第3400595號(hào)。

人前列腺癌診斷試劑盒、人附睪蛋白4（HE4）檢測(cè)試劑盒（卵巢癌）、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（動(dòng)脈粥樣硬化）、胃蛋白酶原（PGI、PGII）（胃癌）、CEA、AFP、CA125、CA1