維生素c含量測定方法

維生素C含量測定方法綜述

摘要

目前研究維生素C測定方法的報道較多，如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點。特別是高效液相色譜法是近年來發(fā)展較快的一種方法。關(guān)鍵詞維生素C滴定法高效液相色譜法

概述

維生素C是可溶于水的無色結(jié)晶，是一種分子結(jié)構(gòu)最簡單的維生素。維生素C有防治壞血病的功能，所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸。維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài)，起解毒作用等。其廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量尤為豐富。準確測定維生素C的含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都具有十分重要的意義。

測定維生素C常用的方法有2,6-二氯靛酚滴定法、苯肼比色法、熒光法及高效液相色譜法等。2,6-二氯靛酚滴定法測定的是還原型抗壞血酸，該法簡便，也較靈敏，但特異性差，樣品中的其他還原性物質(zhì)會干擾測定，使測定值偏高，且對深色樣液滴定終點不易辨別。苯肼比色法和熒光法測得的都是抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。高效液相色譜法可以同時測得抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的含量，具有干擾少、準確度高、重現(xiàn)性好、靈敏、簡便、快速等優(yōu)點，是上述幾種方法中最先進、最可靠的方法。維生素C的結(jié)構(gòu)式

維生素C：六碳的多羥基內(nèi)酯

原理染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉紅色（在中性或堿性溶液中呈藍色），被還原型抗壞血酸還原后顏色消失。還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時，一定量的樣品提取液還原標準染料液的量，與樣品中還原型抗壞血酸含量成正比。

1滴定法測定維生素C2，6一二氯靛酚法

2，6一二氯靛酚法試劑

1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化鉀溶液。抗壞血酸標準溶液：準確稱取20mg抗壞血酸，溶于1%的乙二酸中，并稀釋至100mL，置冰箱中保存。用時取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的標準溶液。標定：吸取此標準液5mL于三角瓶中，加入6%碘化鉀溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/L碘酸鉀標準溶液滴定，終點為淡藍色。

2，6一二氯靛酚法計算：式中：c——抗壞血酸標準溶液的濃度mg/mL；

V1——滴定時消耗0.001mol/L碘酸鉀標準溶液的體積，mL；

V2——滴定時所取抗壞血酸的體積，mL；

0.088——1mL0.001mol/L碘酸鉀標準溶液相當于抗壞血酸的量，mg/mL。

2，6一二氯靛酚法試劑

0.000167mol/L碘酸鉀標準溶液：精確稱取干燥的碘酸鉀0.3567g，用水稀釋至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相當于抗壞血酸0.088mg。

2,6-二氯靛酚溶液：稱取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氫鈉的熱水中，待冷，置于冰箱中過夜。次日過濾于250mL棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。每周標定1次。標定：取5mL已知濃度的抗壞血酸標準溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，搖勻，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色，在15s內(nèi)不褪色即為終點。

2，6一二氯靛酚法計算：式中：T——每毫升染料溶液相當于抗壞血酸的毫克數(shù)，mg/mL；

c——抗壞血酸的濃度，mg/mL；

V1——抗壞血酸標準溶液的體積，mL；

V2——消耗2,6-二氯靛酚的體積，mL。

2，6一二氯靛酚法測定步驟提取鮮樣制備：稱100g鮮樣，加等量的2%乙二酸溶液，倒入組織搗碎機中打成勻漿。取10~40g勻漿（含抗壞血酸1~2mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度，混合均勻。干樣制備：稱1~4g干樣（含1~2mg抗壞血酸）放入研缽內(nèi)，加1%乙二酸溶液磨成勻漿，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度。過濾上述樣液，不易過濾的可用離心機沉淀后，傾出上清液，過濾備用。

2，6一二氯靛酚法測定步驟滴定吸取5~10mL濾液，置于50mL三角瓶中，快速用2，6-二氯靛酚溶液滴定，直到紅色不能立即消失，而后再盡快地一滴一滴地加入（樣品中可能存在其他還原性雜質(zhì)，但一般雜質(zhì)還原染料的速度均比抗壞血酸慢），以呈現(xiàn)的粉紅色在15s內(nèi)不消失為終點。同時做空白實驗。

2，6一二氯靛酚法結(jié)果計算式中：X——樣品中抗壞血酸含量，mg/100g；

m——滴定時所取溶液中含有樣品的質(zhì)量，g；

T——1mL染料溶液相當于抗壞血酸標準溶液的量，mg/mL；

V——滴定樣液時消耗染料的體積，mL；

V0——滴定空白時消耗染料的體積，mL。

2，6一二氯靛酚法注意事項（1）所有試劑最好用重蒸餾水配制。（2）樣品采取后，應浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防止維生素C氧化損失。測定時整個操作過程要迅速，防止抗壞血酸被氧化。（3）若測動物性樣品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取維生素C。（4）若樣品濾液顏色較深，影響滴定終點觀察，可加入白陶土脫色后再過濾。白陶土使用前應測定回收率。

2，6一二氯靛酚法注意事項（5）若樣品中含有Fe2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等還原性雜質(zhì)時，會使結(jié)果偏高；Cu2+可與抗壞血酸反應，也干擾測定。有無這些干擾離子可用以下方法檢驗：取樣品提取液、偏磷酸-乙酸溶液各5mL混合均勻，加入0.05%亞甲基藍水溶液2滴。如亞甲基藍顏色在5~10s消失，即證明有干擾物存在；此檢驗對Sn2+無反應，可在另一份10mL的樣品溶液中加入1：3鹽酸溶液10mL，加0.05%靛胭脂紅水溶液5滴，若顏色在5~10s消失；證明有Sn2+或其他干擾性物質(zhì)存在。為消除上述雜質(zhì)帶來的誤差，可采取以下測定方法：取10mL提取液兩份，各加入0.1mL10%硫酸銅溶液，在110℃加熱10min，冷卻后在用染料滴定。有銅存在時，抗壞血酸完全被破壞，從樣品滴定值中扣除校正值，即得抗壞血酸含量。

維生素C2,6-二氯酚靛酚維生素C2,6-二氯酚靛酚（還原型）（氧化型，粉紅色）（氧化型）（還原型）++====2,6-二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。2高效液相色譜法測定維生素C原理樣品中的維生素C經(jīng)乙二酸溶液（1g/L）迅速提取后，在反相色譜柱上分離測定。

主要儀器及試劑高效液相色譜儀，紫外檢測器等。乙二酸溶液（1g/L）。維生素C標準溶液：準確稱取維生素C樣本2mg與50ml容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）溶解、定容，搖勻備用，用前配制。2高效液相色譜法測定維生素C樣品處理液體樣品：取原液5mL與25mL容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）定容，搖勻后經(jīng)0.45μm濾膜過濾后待測。固體樣本：稱1g樣品于研缽中，用5mL乙二醇溶液（1g/L）迅速研磨，過濾，殘渣用乙二醇溶液（1g/L）洗滌，合并提取液于25mL容量瓶中，蒸餾水定容，搖勻后經(jīng)0.45μm濾膜過濾后待測。2高效液相色譜法測定維生素C測定取5μm標準溶液進行色譜分析，重復進樣3次，取標樣峰面積的平均值。然后在相同條件下，取5μL樣品液進行分析，以相應峰面積計算含量。

色譜條件

色譜柱，μ-BondapakC18（直徑3.9mm*300mm）；流動相，H2C2O4（1g/L）；流速，1.0mL/min；檢測器，紫外245nm；進樣量，5μL。

2高效液相色譜法測定維生素C計算結(jié)果式中：X―樣品中維生素C的含量，mg/100g或mg/100mL；

m1―標樣進樣體積中維生素C含量，μg；

m2―樣品質(zhì)量（或體積），g或mL；

A1―標樣峰面積平均值；

A2―樣品峰面積；

V1―