聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳分離血清蛋白

聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳分離血清蛋白【實驗目的】

1.學習聚丙烯酰胺凝膠電泳原理

2.掌握聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳的操作技術【實驗原理】

聚丙烯酰胺是由單體丙烯酰胺（簡稱Acr）和交聯(lián)劑N,N’-甲叉雙丙烯酰胺（簡稱Bis）在催化劑過硫酸銨（簡稱AP）和加速劑N,N,N’N’-四甲基乙二胺(簡稱TEMED)的作用下,聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。

2021/4/261聚丙烯酰胺凝膠電泳分離原理分子篩效應：分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過一定孔徑分離膠時，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應。電荷效應：電荷量不同，遷移率不同。濃縮效應2021/4/262【實驗器材】樣品：血清凝膠儲備液：1號液：pH8.9Tris~HCl緩沖液+TEMED2號液：Acr+Bis3號液：AP電泳緩沖液：pH8.3的Tris-Gly緩沖液染色液：氨基黑溶液脫色劑：冰乙酸2021/4/263【實驗器材】電泳儀、圓盤電泳槽、電泳玻璃管、青霉素小瓶蓋、微量注射器、長針頭注射器、燒杯、移液管、ParaFilm膜。2021/4/264【實驗步驟】1.凝膠的制備

（1）準備工作：用ParaFilm膜密封細橡皮塞的一端，塞入放到木質(zhì)試管架上的小瓶塞中；2021/4/265（2）制備小孔膠（分離膠）凝膠濃度:7.5%試劑用量蒸餾水1號液2號液

1mL1mL2mL混勻3號液4mL2021/4/2662.灌膠，裝膠用滴管吸取凝膠沿管壁裝入玻璃管中，檢查管內(nèi)無氣泡，加完凝膠后沿管壁緩緩注入幾滴蒸餾水，聚合約40-60分鐘；時間到后，輕輕取下管底部的橡皮塞和ParaFilm膜，用濾紙吸取凝膠上方水層，將凝膠管垂直插入電泳槽圓孔中并盡量使各管高度一致，其余孔用膠塞堵住，電泳槽內(nèi)加注電泳液；2021/4/2673.加樣：

用微量注射器吸取20/50ml

的樣品（含溴酚藍），沿內(nèi)壁緩慢加入，注意觀察樣品的狀態(tài)變化；4.電泳：負極在上，正極在下，電流調(diào)節(jié)到2mA/管，開通電源；2min后，電流調(diào)節(jié)到5mA/管，電泳約1h左右，直到溴酚藍跑到凝膠底部。2021/4/2685.剝膠

2021/4/2696.固定與染色：將取下的膠條放入染色液中，在室溫下，固定染色10min。7.脫色：將染色完畢的膠條用自來水沖洗后浸泡在脫色液中；8.觀察并圖示記錄實驗結(jié)果。2021/4/26109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:01PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/39、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20234:39:01PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。**2/3/202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。***03-2月-23謝謝大家2021/4/26129、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:02PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32