生物選修1知識(shí)點(diǎn)

生物選修1知識(shí)點(diǎn)生物選修1知識(shí)點(diǎn)15/15生物選修1知識(shí)點(diǎn)高中生物選修一知識(shí)點(diǎn)專(zhuān)題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題1果酒和果醋的制作一,果酒的制作原理1,酵母菌屬于真核生物，新陳代謝類(lèi)型異養(yǎng)兼性厭氧型。酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要),分裂生殖,孢子生殖。2,在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O3,在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C6H12O6→2C2H5OH＋6CO24．酵母菌發(fā)酵的最佳環(huán)境在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無(wú)菌空氣，有利于酵母菌生長(zhǎng),繁殖，再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵。20℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵的最佳溫度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性（5,傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所運(yùn)用的酵母菌的來(lái)源：附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。為提高果酒的品質(zhì)，更好地抑制其它微生物的生長(zhǎng)，可以直接在果汁中加入人工培育的酵母菌。6,在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.7,簡(jiǎn)易制作法（果酒試驗(yàn)流程示意圖）選擇葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒留意：（1）,沖洗葡萄時(shí)應(yīng)先沖洗，后除去枝梗，以避開(kāi)除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。（2）防止發(fā)酵液被污染的措施：①榨汁機(jī),要清洗干凈，并晾干；②發(fā)酵裝置要清洗干凈，并用70%酒精消毒，或用洗潔精洗滌；③裝入葡萄汁后，封閉沖氣口，每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開(kāi)瓶蓋等。二,果醋的制作原理1,醋酸菌屬于原核生物,代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型,繁殖方式為二分裂2,若氧氣,糖源足夠時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反應(yīng)式：C6H12O6→3CH3COOH（醋酸）3,若缺少糖源，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?，其反?yīng)式：2C2H5OH+O2→2CH3CHO（乙醛）+2H2O2CH3CHO+O2→2CH3COOH（醋酸）4,果醋試驗(yàn)流程示意圖。選擇葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→果醋（1）,最佳培育溫度：30—350C（2）,培育時(shí)間：7—8d三,試驗(yàn)步驟留意事項(xiàng)1.制作果醋時(shí)，也可以在果酒中加入醋酸菌。2.葡萄汁裝入發(fā)酵瓶中要留1∕3的空間，目的是:讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，有利于酵母菌生長(zhǎng),繁殖，耗盡氧氣后進(jìn)行酒精發(fā)酵，每隔一段時(shí)間擰松瓶蓋一下，防止發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生CO2，造成發(fā)酵液的溢出。3,酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下，重鉻酸鉀及酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。四,留意事項(xiàng)1,充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；2,排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出CO2的；3,出料口是用來(lái)取樣的。4,排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管及瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。5,運(yùn)用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)當(dāng)關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。6,制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度限制在18～25℃？制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度限制在30～3520℃左右最適合酵母菌的繁殖。醋酸菌是嗜溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃。課題2腐乳的制作試驗(yàn)原理1．參及豆腐發(fā)酵的微生物有青霉,酵母,曲霉,毛霉等多種，其中起主要作用的是毛霉。2．毛霉屬于真核生物，代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是孢子生殖。3.原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。4,試驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制二,試驗(yàn)步驟（留意事項(xiàng)）1.豆腐的含水量為70％左右，水分過(guò)多則腐乳不易成形。2.粽葉的作用：供應(yīng)菌種和保溫作用。氣候干燥時(shí)，將平盤(pán)用保鮮膜包袱，但不要封嚴(yán)，以免濕度太高，不利于毛霉的生長(zhǎng)。3.溫度保持在15～18

℃。留意：1,毛霉的來(lái)源：（1）.來(lái)自空氣中的毛霉孢子，（2）.直接接種優(yōu)良毛霉菌種2,加鹽腌制：將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。3,食鹽的作用：（1）.抑制微生物的生長(zhǎng)，避開(kāi)腐敗變質(zhì)。（2）.析出水分，使豆腐變硬，在后期制作過(guò)程中不易酥爛留意限制鹽的用量：鹽的濃度過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高，會(huì)影響腐乳的口味。4,配制鹵湯：鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般限制在12%左右。5,酒的作用：（1）.防止雜菌污染以防腐（2）.及有機(jī)酸結(jié)合形成酯，給予腐乳風(fēng)味留意：酒精含量過(guò)高，腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)。6,香辛料的作用：（1）.調(diào)味作用（2）.殺菌防腐作用（3）.參及并促進(jìn)發(fā)酵過(guò)程7,防止雜菌污染：①用來(lái)腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②豆腐裝瓶加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。8,豆腐生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說(shuō)是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。9,腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的匍匐菌絲，對(duì)人體無(wú)害。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。課題三制作泡菜1,制作泡菜所用微生物是：乳酸菌，其代謝類(lèi)型是：異養(yǎng)厭氧型。在無(wú)氧條件下，將糖分解為乳酸。分裂方式是：二分裂。反應(yīng)式為：C6H12O62C3H6O3+能量常見(jiàn)的乳酸菌有：乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于：生產(chǎn)酸奶。3,亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。4,膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康，亞硝酸鹽被汲取后隨尿液排出體外，但在相宜pH,溫度和肯定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。亞硝酸鹽含量發(fā)酵時(shí)間（d）5,亞硝酸鹽含量發(fā)酵時(shí)間（d）6,制作泡菜時(shí)，清水及鹽的質(zhì)量比為4:1。6,泡菜中亞硝酸鹽含量的測(cè)定（1）方法：比色法（2）原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽及對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，及N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，及已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。7,泡菜制作過(guò)程中影響亞硝酸鹽含量的因素有溫度,腌制時(shí)間,食鹽用量。專(zhuān)題二微生物的培育及應(yīng)用課題一微生物的試驗(yàn)室培育一,培育基：1,概念：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的養(yǎng)分基質(zhì)。2,培育基的類(lèi)型：分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)培育基種類(lèi)特點(diǎn)用途依據(jù)物理性質(zhì)分液體培育基不加凝固劑用于：工業(yè)生產(chǎn)半固體培育基加凝固劑如：瓊脂用于：視察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。固體培育基用于：微生物的分別和鑒定，按化學(xué)成分分合成培育基用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分的種類(lèi)比例明確用于:微生物的分別鑒定自然培育基用化學(xué)成分不明的自然物質(zhì)配制而成用于:工業(yè)生產(chǎn)。按培育基的用途分選擇培育基指在培育基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不須要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所須要的微生物的生長(zhǎng)。例如，培育基中不加入有機(jī)物可以選擇培育自養(yǎng)微生物；培育基中不加入氮元素，可以選擇培育能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培育金黃色葡萄球菌等。鑒定培育基依據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培育基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類(lèi)別的微生物。用伊紅—美籃培育基鑒定水中是否含有大腸桿菌，如有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。二,培育基的化學(xué)成分包括：水,無(wú)機(jī)鹽,碳源,氮源等。1,碳源：能為微生物的代謝供應(yīng)碳元素的物質(zhì)。如CO2,NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源；糖類(lèi),石油,花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。2,氮源：能為微生物的代謝供應(yīng)氮元素的物質(zhì)。如N2,NH3,NO3-,NH4+（無(wú)機(jī)氮源）蛋白質(zhì),氨基酸,尿素,牛肉膏,蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。3,培育基還要滿意微生物生長(zhǎng)對(duì)PH,特殊養(yǎng)分物質(zhì)以及氧氣的要求。例如：培育乳酸桿菌時(shí)須要在培育基中添加維生素；培育霉菌時(shí)須將培育基的pH調(diào)至酸性；培育細(xì)菌是須要將pH調(diào)至中性或微堿性，培育厭氧型微生物是則須要供應(yīng)無(wú)氧的條件三,無(wú)菌技術(shù)：獲得純凈培育物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，要留意以下幾個(gè)方面：①對(duì)試驗(yàn)操作的空間,操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培育的器皿,接種用具和培育基等器具進(jìn)行滅菌。③為避開(kāi)四周環(huán)境中微生物的污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。④試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開(kāi)已經(jīng)滅菌處理的材料用具及四周的物品相接觸。1,無(wú)菌技術(shù)的目的：防止試驗(yàn)室的培育物被其他外來(lái)微生物污染,有效避開(kāi)操作者自身被微生物感染。2,消毒及滅菌的區(qū)分（1）消毒指運(yùn)用較為溫柔的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒精,氯氣,石炭酸等）消毒,紫外線消毒。（2）滅菌則是指運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌,干熱滅菌,高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：①接種環(huán),接種針,試管口等運(yùn)用灼燒滅菌法；②玻璃器皿,金屬用具等運(yùn)用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培育基,無(wú)菌水等運(yùn)用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等運(yùn)用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。四,制作牛肉膏蛋白胨固體培育基方法步驟：計(jì)算,稱(chēng)量,溶化,滅菌,倒平板。五,倒平板操作的探討1.培育基滅菌后，須要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么方法來(lái)估計(jì)培育基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.接種須要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰，目的：防止瓶口的微生物污染培育基。3.倒平板的目的：使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上的冷凝水落入培育基，造成污染。4.在倒平板的過(guò)程中，不當(dāng)心將培育基濺在皿蓋及皿底之間的部位，這個(gè)平板不能用來(lái)培育微生物，緣由：空氣中的微生物可能在皿蓋及皿底之間的培育基上滋生，污染培育基。六,純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作。在數(shù)次劃線后培育，可以分別到單細(xì)胞菌落。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培育基的表面，進(jìn)行培育。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。七,平板劃線操作1.操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍舊須要灼燒接種環(huán)的目的是：答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。答：線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。八,涂布平板操作涂布平板的全部操作都應(yīng)在火焰旁邊進(jìn)行。同時(shí)操作的各個(gè)細(xì)微環(huán)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈及培育皿的距離要合適,吸管頭不要接觸任何其他物體,吸管要在酒精燈火焰四周。九,菌種的保存（1）對(duì)于頻繁運(yùn)用的菌種，采納臨時(shí)保藏的方法。①臨時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培育基上，在合適的溫度下培育。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培育基上轉(zhuǎn)移到簇新的培育基上。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種簡(jiǎn)單被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于須要長(zhǎng)期保存的菌種，采納甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培育的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，及甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別及計(jì)數(shù)尿素：尿素不能直接被農(nóng)作物汲取。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕敢?篩選菌株（1）試驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為供應(yīng)有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括養(yǎng)分,溫度,pH等），同時(shí)抑制或阻擋其他微生物生長(zhǎng)。（2）選擇性培育基：在選擇性培育基配方中，把尿素作為培育基中唯一的氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能生長(zhǎng)。二,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法（1）常用方法：稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。為了保證結(jié)果精確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。采納此方法的留意事項(xiàng)：①一般選取菌落數(shù)在30--300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)②本法僅限于形成菌落的微生物三,設(shè)置比照設(shè)置比照的主要目的是解除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度。四,試驗(yàn)設(shè)計(jì)流程：土壤取樣→樣品的稀釋→取樣涂布→微生物的培育及視察→細(xì)菌計(jì)數(shù)（1）土壤取樣：從富含有機(jī)物,潮濕,pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，距地表3～8cm的土壤層取樣。（2）樣品的稀釋?zhuān)簶悠返南♂尦潭葘⒅苯佑绊懫桨迳仙L(zhǎng)的菌落數(shù)目。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104105106測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用103104105測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用102103104（3）微生物的培育及視察不同種類(lèi)的微生物，須要不同的培育溫度和培育時(shí)間細(xì)菌30-37℃1-2天放線菌25-28℃5-7天霉菌25-28℃3-4天每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培育時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。在肯定的培育條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。（4）從平板上的菌落數(shù)推想出每克樣品中的菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)（5）在以尿素為唯一的氮源的培育基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說(shuō)明該細(xì)菌為分解尿素的細(xì)菌。課題三分解纖維素的微生物的分別一,纖維素及纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶,CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)供應(yīng)養(yǎng)分。二,纖維素分解菌的篩選1,（1）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅及纖維素形成紅色復(fù)合物，不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。在含有纖維素的培育基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能及培育基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素復(fù)合物就無(wú)法形成，培育基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透亮圈。可以通過(guò)是否產(chǎn)生透亮圈來(lái)篩選纖維素分解菌。2,分別分解纖維素的微生物的試驗(yàn)流程土壤取樣→選擇培育→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上→選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落留意:剛果紅染色法的種類(lèi)種類(lèi)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)先培育微生物，再加入剛果紅操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。在倒平板時(shí)就加入剛果紅1.由于纖維素和瓊脂,土豆汁都含有淀粉類(lèi)物質(zhì)，使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。2.有些微生物具有降解色素的實(shí)力，在長(zhǎng)時(shí)間培育過(guò)程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透亮圈，及纖維素分解菌不易區(qū)分。操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，3,課題延長(zhǎng)（1）檢驗(yàn)纖維素酶對(duì)纖維素的分解方法：常用濾紙崩潰法。（2）對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行初步篩選，只是分別純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還須要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的試驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法：是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定。（3）在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)高，因此從這種土樣中纖維素分解菌的幾率高。（3）選擇培育能夠“濃縮”所需的微生物的緣由：在選擇培育的條件下，可以使能夠適應(yīng)這種養(yǎng)分條件的微生物得到快速繁殖，而不適應(yīng)這種養(yǎng)分條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。專(zhuān)題三植物的組織培育技術(shù)課題一菊花的組織培育一,植物組織培育1,植物組織培育的原理：細(xì)胞的全能性:2,過(guò)程：脫分化再分化外植體→愈傷組織→幼苗→移植①脫分化：是由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，②再分化：愈傷組織接著進(jìn)行培育，又可以重新分化成根或芽等器官的過(guò)程。③愈傷組織的特點(diǎn)：細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形態(tài)態(tài)的薄壁細(xì)胞。二,影響植物組織培育的因素1,材料：不同的植物組織，培育的難易程度差別很大。植物的種類(lèi),材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培育一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。（易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物簡(jiǎn)單進(jìn)行組織培育。）選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，簡(jiǎn)單誘導(dǎo)脫分化和再分化。2,養(yǎng)分：常用的培育基是MS培育基。無(wú)機(jī)養(yǎng)分：大量元素是N,P,S,K,Ca,Mg，微量元素是Fe,Mn,B,Zn,Cu,Mo,I,Co，有機(jī)養(yǎng)分：甘氨酸,煙酸,肌醇,維生素,蔗糖等。3,植物激素：植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂,脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在培育基中須要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度,運(yùn)用的先后依次,用量的比例等都影響結(jié)果。運(yùn)用依次試驗(yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)運(yùn)用分化頻率提高生長(zhǎng)素／細(xì)胞分裂素比值及結(jié)果比值高時(shí)促進(jìn)根分化，抑制芽形成比值低時(shí)促進(jìn)芽分化，抑制根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)4,環(huán)境條件：PH,溫度,光等環(huán)境條件。進(jìn)行菊花的組織培育，一般將pH限制在5.8左右，溫度限制在18-22℃，并且每日用日光燈照耀12h.三,操作流程配制MS固體培育基→外植體的消毒→接種→培育→移栽→栽培1,配制MS固體培育基：(1)配制培育基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂,蔗糖,大量元素,微量元素,有機(jī)物和植物激素的母液。配制培育基母液時(shí)，大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，激素類(lèi),維生素類(lèi)按1mg∕mL配制成母液。(2)在菊花組織培育中，可以不添加植物激素.緣由:是菊花莖段組織培育比較簡(jiǎn)單。(3)及肉湯培育基相比，MS培育基有哪些特點(diǎn)？肉湯培育基(即微生物培育基)以有機(jī)養(yǎng)分為主，MS培育基則需供應(yīng)大量無(wú)機(jī)養(yǎng)分。2,外植體的消毒：主要消毒劑：70%的酒精,0.1%的氯化汞外植體:先用流水沖洗→加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗→流水沖洗→70%的酒精消毒6--7s，→無(wú)菌水清洗→0.1%的氯化汞溶液中消毒1--2min?！鸁o(wú)菌水漂洗。3,接種操作的關(guān)鍵：無(wú)菌操作。4,無(wú)菌技術(shù)包括：培育基滅菌和植物材料（外植體）滅菌。5,在移栽生根的菊花試管苗之前，先打開(kāi)培育瓶的封口膜幾日，然后用流水清洗根部的培育基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍寶巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間，幼苗長(zhǎng)狀后再移栽到土壤中。專(zhuān)題二月季的花藥培育一,花藥組織培育1,花粉發(fā)育過(guò)程：花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。2,被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)驗(yàn)：小孢子四分體時(shí)期,單核期和雙核期等階段。減數(shù)分裂3,1花粉母細(xì)胞→4個(gè)小孢子有絲分裂1個(gè)花粉管細(xì)胞核有絲分裂1個(gè)養(yǎng)分細(xì)胞每1個(gè)小孢子→1個(gè)生殖細(xì)胞核→1個(gè)精子留意：①成熟的花粉粒有兩類(lèi)：二核花粉粒：花粉粒中含1個(gè)花粉管細(xì)胞核和1個(gè)生殖細(xì)胞核，（在花粉管中形成的）三核花粉粒：花粉粒中含1個(gè)花粉管細(xì)胞核和2個(gè)精子二,產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑：通過(guò)花藥培育產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑。1,是花粉通過(guò)胚狀體階段發(fā)育為植物，2,是花粉在誘導(dǎo)培育基上先形成愈傷組織，再誘導(dǎo)分化成植株。脫分化再分化誘導(dǎo)其過(guò)程：(1)花藥中的花粉→胚狀體→叢芽→生根→移栽脫分化再分化誘導(dǎo)(2)花藥中的花粉→胚狀體→叢芽→生根→移栽留意：這兩種途徑之間并沒(méi)有肯定的界限，主要取決于培育基中激素的種類(lèi)及其濃度配比。三,影響花藥培育的因素1,主要的影響因素：材料的選擇及培育基的組成（1）,材料的選擇①不同植物誘導(dǎo)勝利率不同。②同一植物的不同生理狀況（花粉早期是的花藥比后期的簡(jiǎn)單產(chǎn)生花粉植株）③合適的花粉發(fā)育期花粉：選擇初花期的花粉；花藥：選擇單核期花藥培育勝利率高，花蕾：選擇完全未開(kāi)放的花蕾培育勝利率高）④植株生長(zhǎng)條件,材料低溫預(yù)處理,接種密度等。2,材料的選取：（1）選擇花藥時(shí)，一般要通過(guò)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于相宜的發(fā)育期。（2）最常用的方法是：醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采納焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色留意事項(xiàng)：1,剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥（否則接種后簡(jiǎn)單從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織），同時(shí)徹底去除花絲，因?yàn)榧盎ńz相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。2,培育溫度限制在25℃左右,不須要光照.幼小植株形成后才須要光照。3,植物組織培育技術(shù)及花藥培育技術(shù)的相同之處是：培育基配制方法,無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于：花藥培育的選材先需摸索時(shí)期相宜的花蕾；花藥裂開(kāi)后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培育基；花藥培育對(duì)培育基配方的要求更為嚴(yán)格。4,在花藥培育中，特殊是通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株，常發(fā)生染色體組的數(shù)目倍增，須要對(duì)培育出來(lái)的植株作進(jìn)一步鑒定和篩選。專(zhuān)題六,植物體中有效成分的提取課題1,植物芳香油的提取一,植物芳香油的來(lái)源：1．自然香料的主要來(lái)源：動(dòng)物和植物，還有真菌。2．植物芳香油的特點(diǎn)：揮發(fā)性強(qiáng)，易溶于有機(jī)溶劑，化學(xué)成分：以萜類(lèi)化合物及其衍生物為主。二,植物芳香油的提取方法：1,植物芳香油的提取方法：蒸餾,壓榨,萃取等，詳細(xì)采納哪種提取方法要依據(jù)植物原料的特點(diǎn)來(lái)確定。2,植物芳香油提取三種方法的比較提取方法水蒸氣蒸餾法萃取法壓榨法試驗(yàn)原理

利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來(lái)

使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)后得到芳香油

通過(guò)機(jī)械加壓，壓榨出果皮中的芳香油方法步驟

①水蒸汽蒸餾②分別油層③除水過(guò)濾

①粉碎,干燥②萃取,過(guò)濾③濃縮

①石灰水浸泡,漂洗②壓榨過(guò)濾靜置③再次過(guò)濾適用范圍

提取玫瑰油,薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油

原料顆粒盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶劑中

適用于柑橘,檸檬等易焦糊原料的提取優(yōu)點(diǎn)

簡(jiǎn)單易行，便于分別

出油率高，易于分別

生產(chǎn)成本低，能保持原料原來(lái)的結(jié)構(gòu)和功能，常溫下不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，質(zhì)量提高不足

水中蒸餾會(huì)導(dǎo)致原料焦糊和有效成分部分水解等問(wèn)題

運(yùn)用有機(jī)溶劑處理不當(dāng)會(huì)影響芳香油的質(zhì)量

分別較為困難，出油率相對(duì)較低三,玫瑰精油的提?。?,提取方法：水蒸氣蒸餾法2,試驗(yàn)提取裝置：（1）安裝蒸餾裝置：依據(jù)從左向右,自下到上的次序安裝水蒸氣蒸餾裝置。（2）蒸餾時(shí)間不能過(guò)短，溫度不能過(guò)高。（3）溫度計(jì)的水銀球應(yīng)位于蒸餾燒瓶的支管處。（4）應(yīng)采集盛花期的玫瑰花3,試驗(yàn)流程：加NaCl加無(wú)水Na2SO4鮮玫瑰花+清水→水蒸氣蒸餾→油水混合物-→油水分別→除水→玫瑰油留意：氯化鈉和無(wú)水硫酸鈉的作用：氯化鈉：促使油水混合物（乳濁液中油和水)分別。無(wú)水硫酸鈉：汲取油層中的水分。四,橘皮精油的提取：1,提取方法：壓榨法2,原理：通過(guò)機(jī)械加壓，壓榨出果皮中的芳香油3,試驗(yàn)流程：石灰水浸泡→漂洗--→壓榨--→過(guò)濾（用布袋過(guò)濾）→靜置→再次過(guò)濾（用濾紙過(guò)濾）--→橘皮油留意：簇新的橘皮中含有大量的果蠟,果膠和水分，直接壓榨，出油率較低。為了提高出油率，須要將橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。石灰水的作用：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率。降低壓榨液黏稠度，過(guò)濾不堵塞篩眼。3,為了使橘皮油易于水分別，還要加入相當(dāng)于橘皮質(zhì)量的0.25％小蘇打和5％硫酸鈉，并調(diào)整PH至7—8.0.25％小蘇打和5％硫酸鈉的作用：促進(jìn)油和水的分別4,壓榨液的處理：壓榨液中含有橘皮精油和大量的水分及殘雜，先用布袋過(guò)濾除去固體物和殘雜，然后離心進(jìn)一步除去質(zhì)量較小的殘留固體物，再用分液漏斗或吸管將上層的橘皮油分別出來(lái)，然后靜置5-7d，使雜質(zhì)沉淀，用吸管吸出上層澄清橘皮油，其余部分通過(guò)濾紙過(guò)濾，濾液及吸出的上層橘油合并，成為橘皮精油。（靜置處理目的：除去果蠟和水分。）5,壓榨是一個(gè)機(jī)械加壓過(guò)程，要求既要將原料壓緊，防止原料滑脫，又要將油分?jǐn)D壓出來(lái)。課題2,胡蘿卜素的提取一,胡蘿卜素基礎(chǔ)知識(shí)1,種類(lèi)：依據(jù)雙鍵數(shù)目胡蘿卜素可分為α,β,γ三類(lèi)。β-胡蘿卜素是其中最主要成分。2,性質(zhì):胡蘿卜素是橘黃色的晶體，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等。3,用途：(1)醫(yī)藥用途：治療缺乏維生素A癥；抗腫瘤,抗蒼老等作用(2)作添加劑（食品,飲料,飼料）：食用色素4,工業(yè)上提取自然β-胡蘿卜素的方法：（1）是從植物中提取，（例：胡蘿卜中含量最豐富）（2）是從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得，（例：螺旋藻含量最豐富）（3）是利用微生物的發(fā)酵產(chǎn)生。（例：三孢布拉霉菌）二,試驗(yàn)設(shè)計(jì)1,提取胡蘿卜素的方法：萃取法2,萃取劑的選擇（1）乙醇和丙酮是水溶性有機(jī)溶劑，萃取時(shí)能及水混溶影響萃取的效果。應(yīng)選擇運(yùn)用水不溶性有機(jī)溶劑。（2）石油醚,醋酸乙酯,乙醚,苯和四氯化碳為水不溶性有機(jī)溶劑，哪種最相宜用來(lái)提取胡蘿卜素？石油醚的沸點(diǎn)最高，在加熱萃取時(shí)不易揮發(fā)，所以石油醚最相宜用作萃取劑。3,提取胡蘿卜素的試驗(yàn)流程胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過(guò)濾→濃縮→胡蘿卜素留意事項(xiàng)：（1）烘干胡蘿卜時(shí)，要限制好溫度和時(shí)間，溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，胡蘿卜素會(huì)分解。（2）冷凝管的作用：防止加熱時(shí)有機(jī)溶劑的揮發(fā)（3）用水浴加熱的目的：避開(kāi)明火加熱引起燃燒,爆炸4.影響萃取的因素（1）主要因素：萃取劑性質(zhì)和運(yùn)用量。（2）次要因素：原料顆粒大小,緊密程度,含水量,溫度,時(shí)間。留意事項(xiàng)：1,原料顆粒小,萃取溫度高,時(shí)間長(zhǎng),須要提取的物質(zhì)就能充分溶解，萃取效果就好。所以萃取前，要將胡蘿卜進(jìn)行粉碎和干燥。粉碎的目的：使原料顆粒變小，增大及萃取劑的接觸面積，提高萃取效率。2,萃取液的濃縮可直接運(yùn)用蒸餾裝置。在萃取之前，還要進(jìn)行過(guò)濾，除去萃取液中的不溶物。三,胡蘿卜素的紙層析鑒定：留意事項(xiàng)：1.濾紙條預(yù)先干燥處理；可用吹風(fēng)機(jī)將溶劑吹干，留意保持濾紙干燥。2.點(diǎn)樣時(shí)快速細(xì)致,樣點(diǎn)圓點(diǎn)盡量細(xì)??；3.濾紙筒的豎直邊緣不能接觸；4.石油醚易揮發(fā)，留意層析容器要密封。專(zhuān)題四酶的探討及應(yīng)用課題1果膠酶在果汁生產(chǎn)中的應(yīng)用1,果膠是植物細(xì)胞壁及胞間層的主要組成成分之一，它由半乳糖醛酸聚合而成的高分子化合物，不溶于水。2,破壞植物細(xì)胞壁的方法：用果膠酶處理。3,果膠對(duì)果汁制作的影響：⑴影響果汁的出汁率。⑵使果汁渾濁。4,果膠酶：果膠酶是分解果膠的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，包括半乳糖醛酸酶,果膠分解酶,果膠酯酶等。5,果膠酶在果汁制作中的作用：①分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層；使果膠水解為半乳糖醛酸。②提高水果的出汁率，并使果汁變得澄清。果膠酶果膠→半乳糖醛酸6,酶催化實(shí)力凹凸的衡量標(biāo)準(zhǔn)在肯定的條件下，酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度來(lái)表示。酶反應(yīng)速度:用單位時(shí)間內(nèi),單位體積中反應(yīng)物的削減量或產(chǎn)物的增加量來(lái)表示。7,影響酶活性的因素：①溫度果膠酶的最適溫度為45～500C②pH：課題2探討加酶洗衣粉的洗劑效果一,概念：加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，常用的酶制劑有四類(lèi)：蛋白酶,脂肪酶,淀粉酶和纖維素酶，其中應(yīng)用最廣泛,效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。二,試驗(yàn)原理堿性蛋白酶能將血漬,奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽。脂肪酶,淀粉酶和纖維素酶能分別將大分子的脂肪,淀粉和纖維素水解為小分子物質(zhì)。三,試驗(yàn)步驟（略）四,留意事項(xiàng)1．變量的分析和限制影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素:水溫,水量,水質(zhì),洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料,大小及浸泡時(shí)間和洗滌的時(shí)間等。2．洗滌方式和材料的選擇。在洗滌方式中有機(jī)洗和手洗兩種方式。3．水量,水質(zhì)和洗衣粉用量的問(wèn)題。水的用量和布料的大小是成正比的。做試驗(yàn)用的布料不易過(guò)大，水量不易過(guò)多。課題3酵母細(xì)胞的固定化一,試驗(yàn)原理1．高果糖漿的生產(chǎn)：將葡萄糖異構(gòu)酶固定在一種顆粒狀的載體上，再將這些酶顆粒裝到一個(gè)反應(yīng)柱內(nèi)，柱子底端裝上分布著很多小孔的篩板。酶顆粒無(wú)法通過(guò)篩板的小孔，而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過(guò)程中，將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過(guò)反應(yīng)柱，及固定化葡萄糖異構(gòu)酶接觸，轉(zhuǎn)化成果糖，從反應(yīng)柱的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)運(yùn)用半年，降低了生產(chǎn)成本，提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。2．固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在肯定空間內(nèi)的技術(shù)，包括包埋法,化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。一般來(lái)說(shuō)，酶更適合采納化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采納包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而酶分子很??；個(gè)大的難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶簡(jiǎn)單從包埋材料中漏出。3,固定化酶優(yōu)點(diǎn)：使酶既能及反應(yīng)物接觸，又能及產(chǎn)物分別，還可以被反復(fù)利用。4,固定化細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：成本更低，操作更簡(jiǎn)單，可以催化一系列的化學(xué)反應(yīng)。二,試驗(yàn)步驟1。細(xì)胞的活化【注】活化：讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新復(fù)原正常的生活狀態(tài)2。配制物質(zhì)的量濃度為0.05mo1/L的CaCl2溶液3。配制海藻酸鈉溶液留意：加熱時(shí)要用小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止。假如加熱太快，海藻酸鈉會(huì)發(fā)生焦糊。4。海藻酸鈉溶液及酵母細(xì)胞混合【注】(1)冷卻后再混合，留意混合勻稱(chēng)，不要進(jìn)入氣泡(2)冷卻至室溫的目的：防止殺死酵母菌5。固定化酵母細(xì)胞【注】CaCl2溶液的作用：使膠體聚沉6運(yùn)用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵三,留意事項(xiàng)1．剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaCL2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便Ca2+及Na+充分交換，形成的凝膠珠穩(wěn)定。2,檢驗(yàn)?zāi)z珠是否形成的方法：用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在試驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，假如不簡(jiǎn)單裂開(kāi)，沒(méi)有液體流出就表明勝利地制成了凝膠珠，可以用手將凝膠珠在試驗(yàn)桌上用力摔打，假如凝膠珠很簡(jiǎn)單彈起，表明制備的凝膠珠是勝利的。3．凝膠珠的顏色和形態(tài)假如制作的凝膠珠顏色過(guò)淺,呈白色，說(shuō)明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少；假如形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說(shuō)明海藻酸鈉的濃度偏高，制作失敗，須要再作嘗試。專(zhuān)題五,DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1DNA的粗提取及鑒定一,試驗(yàn)原理1,DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，其中物質(zhì)的量濃度為0.14mol∕L時(shí)最低。2,DNA不溶于酒精溶液，細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可溶于酒精,將DNA及蛋白質(zhì)進(jìn)一步分別3,DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)被染成藍(lán)色，可以用來(lái)鑒定DNA分子。留意：DNA對(duì)酶,高溫柔洗滌劑的耐受性大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80oC的高溫，而DNA在80oC以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒(méi)有影響。二,試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)材料的選取凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是運(yùn)用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，勝利的可能性更大。裂開(kāi)細(xì)胞，獲得含DNA的濾液（1）試驗(yàn)材料是動(dòng)物細(xì)胞：裂開(kāi)比較簡(jiǎn)單，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入肯定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。加入蒸餾水的目的:使血細(xì)胞吸水脹破（2）試驗(yàn)材料是植物細(xì)胞：先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入肯定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液。留意：加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑：能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。①假如研磨不充分，會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響研磨不充分細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響試驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物,用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。②此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？可能含有核蛋白,多糖和RNA等雜質(zhì)。去除濾液中的雜質(zhì)方案1,是利用DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；通過(guò)限制NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)。方案2,是利用蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案3,是利用蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。留意：①為什么反復(fù)地溶解及析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解及析出DNA，就能夠除去及DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。②方案二及方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA及蛋白質(zhì)分開(kāi)；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，及DNA分別。四,試驗(yàn)步驟：1．制備雞血細(xì)胞液：在雞血中加入質(zhì)量濃度為0．1g/mL的檸檬酸鈉溶液，離心處理；2．提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)：向雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，攪拌,過(guò)濾；思索題5：加入蒸餾水的目的是什么？為什么能達(dá)到此目的？加速了雞血細(xì)胞的裂開(kāi)(細(xì)胞膜和核膜的裂開(kāi))，從而釋放出DNA；蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂。3．溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA：加入2mol/L的氯化鈉溶液，攪拌，使DNA呈溶解狀態(tài)；4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸餾水，用玻璃棒攪拌；思索題6：此時(shí)加入蒸餾水的目的是什么？使氯化鈉溶液濃度接近0．14mol/L，使DNA最大限度地析出。5．濾取含DNA的黏稠物：過(guò)濾；思索題7：這次過(guò)濾及上次過(guò)濾的目的一樣嗎？為什么？不一樣；這次過(guò)濾是為了去除不溶于氯化鈉溶液的雜質(zhì)，而上次過(guò)濾是為了去除裂開(kāi)的細(xì)胞膜等物質(zhì)。6．將DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化鈉溶液，攪拌，使DNA呈溶解狀態(tài)；7．過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液：過(guò)濾；思索題8：這一步驟的目的是什么？除去含有DNA濾液中的雜質(zhì)；思索題9：為什么反復(fù)地溶解及析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解及析出DNA，就能夠除去及DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。8．提取含雜質(zhì)較少的DNA：加入冷卻的95%的酒精，攪拌；思索題10：這一步驟的目的是什么？去除溶于酒精的雜質(zhì)；思索題11：為什么加入的酒精須要冷卻的？可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；降低分子的運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；低溫有利于增加DNA分子柔韌性，削減斷裂。9．DNA的鑒定：取兩支試管，各加入0．015mol/L的氯化鈉溶液5mL，一支加入提取的DNA，兩支各加入4mL的二苯胺試劑。混合勻稱(chēng)后置于沸水中加熱。思索題12：為什么要設(shè)置比照組？試驗(yàn)中能視察到什么現(xiàn)象？確定二苯胺不及氯化鈉發(fā)生顏色反應(yīng)；試驗(yàn)組試管中可看到溶液變藍(lán)色。課題2,多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR技術(shù)）擴(kuò)增DNA片段一,PCR技術(shù)1,概念是一種體外快速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，能以極少量的DNA為模板，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝。2,應(yīng)用應(yīng)用于遺傳疾病的診斷,刑偵破案,古生物學(xué),基因克隆和DNA序列測(cè)定。3,體內(nèi)DNA復(fù)制及PCR的技術(shù)區(qū)分：體內(nèi)復(fù)制PCR技術(shù)解旋在解旋酶作用下，細(xì)胞供應(yīng)ATP，部分解開(kāi)加熱到94oC,雙鏈全部解開(kāi)，不需解旋酶引物一小段RNADNA或RNA（一般用DNA）DNA聚合酶細(xì)胞自身的DNA聚合酶（不耐高溫）TaqDNA聚合酶復(fù)制特點(diǎn)半保留復(fù)制，邊解旋邊復(fù)制，多起點(diǎn)復(fù)制。半保留復(fù)制，完全解旋后復(fù)制，從模板鏈的一端開(kāi)始復(fù)制。復(fù)制的方向子鏈的5’端向3’端延長(zhǎng)子鏈的5’端向3’端延長(zhǎng)留意：PCR的技術(shù)引物有2種。PCR一般經(jīng)驗(yàn)三十多次循環(huán)，4,PCR的反應(yīng)步驟：變性,復(fù)性和延長(zhǎng)①變性：當(dāng)溫度上升到900C以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈。②復(fù)性：當(dāng)溫度下降到500C左右，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)及兩條單鏈DNA結(jié)合③延長(zhǎng)：當(dāng)溫度上升到720C左右，在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA鏈。二,PCR試驗(yàn)操作1,打算:依據(jù)PCR反應(yīng)體系的配方將所需用的試劑擺放在試驗(yàn)桌上。2,移液:用微量移液器依據(jù)PCR反應(yīng)體系配方往微量離心管里面加入各種試劑。3,混合:蓋嚴(yán)微量離心管口的蓋子，用手指輕輕彈擊管壁。留意：A,離心管口的蓋子肯定蓋嚴(yán)，防止試驗(yàn)中脫落或液體外溢。B,手指輕輕彈擊微量離心管的管壁，目的是使反應(yīng)液混合勻稱(chēng)。4,離心:目的：使反應(yīng)液體集中在離心管底部，提高反應(yīng)效果。5,反應(yīng):課題3血紅蛋白的提取和分別一,試驗(yàn)原理蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形態(tài),大小,電荷性質(zhì)和多少,溶解度,吸附性質(zhì),親和力等千差萬(wàn)別，由此提取和分別各種蛋白質(zhì)。1．凝膠色譜法（安排色譜法）：（1）原理：分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流淌快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流淌慢。（2