病原真菌及檢驗(yàn)技術(shù)

病原真菌及檢驗(yàn)技術(shù)一、感染性病原真菌1、組織胞漿菌屬本屬為典型的雙相型真菌，37C呈酵母樣細(xì)胞，25C培養(yǎng)形成菌絲體。重要的致病菌有莢膜組織胞漿菌及假皮疽組織胞漿菌，分別致犬、貓肉芽腫及馬的淋巴管炎。①莢膜組織胞漿菌引起人獸共患病是致犬、貓和人常發(fā)的高度接觸性傳染性組織胞漿菌病。嚴(yán)重者，可損傷全身器官。淋巴瘤、白血病、霍奇金病、AIDS或用腎上腺皮質(zhì)激素治療者?？筛腥颈揪Ｖ饕址妇W(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，寄生在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，使感染組織形成肉芽腫。奶牛、馬、羊、豬及嚙齒類動(dòng)物也可自然感染，小鼠易感染。微生物特性在巨噬細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞內(nèi)寄生時(shí)呈細(xì)小的、包有莢膜的圓球樣細(xì)胞，直徑I?3卩m。在陳舊的病灶內(nèi)，菌體較大，胞漿濃縮于菌體中央，與細(xì)胞壁之間出現(xiàn)一條空白帶。22?25C培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)基上緩慢形成絲狀菌落，開(kāi)始為白色，逐漸變?yōu)樽攸S色。菌絲分支分隔，寬 2.5卩m產(chǎn)生橢圓形光滑或多刺小分生孢子， 直徑2.5~3卩m隨后可產(chǎn)生圓形或橢圓形大分生孢子，稱棘狀厚壁大孢子，直徑8?15卩m表面光滑、均勻間隔的，像手指一樣凸起，是本菌的特征性形態(tài).在高濕、高濃度的二氧化碳中37C培養(yǎng)時(shí)，在營(yíng)養(yǎng)豐富的血培養(yǎng)基上，可形成濕潤(rùn)、有光澤、表面有皺褶的細(xì)小酵母樣菌落；在肉湯中呈絮團(tuán)狀生長(zhǎng)，鏡檢可見(jiàn)分支分隔的菌絲和少量孢子。鏡檢如發(fā)現(xiàn)特征性的棘厚壁大孢子，可做出診斷

活體病變組織末梢血及骨髓觸片或涂片瑞氏染色，在單活體病變組織末梢血及骨髓觸片或涂片瑞氏染色，在單核細(xì)胞或多形核細(xì)胞中如有小的、 呈洋蔥切面樣卵圓形孢子，亦可做出診斷。病料接種小鼠可引起發(fā)病死亡，并可檢出本菌。補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)一般在發(fā)病后2?3周呈陽(yáng)性反應(yīng)。皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)可用于犬感染的流行病學(xué)調(diào)查。亦可采用PCR和核酸探針技術(shù)鑒定，微生物檢驗(yàn)標(biāo)本直接顯微鏡檢查痰液標(biāo)本涂片后先用甲醇固定 10min，再用姬姆薩染色鏡檢，如巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)卵圓形孢子，直徑 2?4卩的較小，一端有出芽，可疑為莢膜組織胞漿菌?？乖瓩z測(cè)取患者痰液作免疫熒光法染色后鏡檢， 可快速檢測(cè)其抗原，但特異性差，僅作組織胞漿菌初篩試驗(yàn)。(3)分離培養(yǎng)一一兩相型將臨床標(biāo)本接種于含抗生素的沙氏培養(yǎng)基上， 25C培養(yǎng)，生長(zhǎng)緩慢，4?6周才開(kāi)始生長(zhǎng)，逐漸形成白色至棕色絨毛狀菌落。當(dāng)轉(zhuǎn)種于血瓊脂培養(yǎng)基上， 37C很快形成酵母型菌落。鑒定 生化反應(yīng)取可疑菌落涂片染色鏡檢，并作脲酶試驗(yàn)和明膠液化試驗(yàn)。莢膜組織胞漿菌分解尿素；不能液化明膠。藥物敏感試驗(yàn)組織胞漿菌對(duì)兩性霉素B、酮康唑、伊曲康唑敏感。抗體檢測(cè)檢測(cè)血清中組織胞漿菌抗體，以補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的敏感性和特異性最高，發(fā)病2-3周陽(yáng)性率可達(dá)90%，有判定價(jià)值。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的抗體效價(jià)在1： 32以上為陽(yáng)性，抗體效價(jià)4倍增長(zhǎng)，可有助于確診。乳膠凝集試驗(yàn)時(shí)，抗體效價(jià)為 1:32時(shí)可確診。②假皮疽組織胞漿菌馬屬動(dòng)物流行性淋巴管炎的病原， 特征為皮下淋巴管和淋巴結(jié)發(fā)炎、腫脹和皮膚潰瘍。在自然情況下，馬、 騾最易感，驢次之；人、犬、駱駝、牛、豬很少感染；家兔、豚鼠人工感染可引起局部膿腫。微生物特性在膿汁中該菌呈卵圓形或瓜子形， 是具有雙層膜的酵母樣細(xì)胞。大小為2?3卩mK3?5卩m一端或兩端較尖，多單在或2~3個(gè)排列，菌體胞漿均勻，可見(jiàn)2~4個(gè)圓形、呈回旋運(yùn)動(dòng)的小顆粒。在培養(yǎng)物中呈菌絲狀，分支分隔、粗細(xì)不勻，菌絲末端形成瓶狀假分生孢子。本菌為需氧菌，最適生長(zhǎng)溫度25~30C,最適生長(zhǎng)pH5?9,常用培養(yǎng)基有1%葡萄糖甘露醇甘油瓊脂、2%葡萄糖甘油瓊脂等。不發(fā)酵多種糖類，不產(chǎn)生靛基質(zhì)和 H2S,VP試驗(yàn)陰性，能凝固石蕊牛乳，液化明膠。取膿汁或分泌物，適當(dāng)稀釋、鏡檢，或取痂皮，加10%KOH處理透明后，制片鏡檢。必要時(shí)可進(jìn)行分離培養(yǎng)，病料應(yīng)先用青、鏈霉素處理12h后再接種。長(zhǎng)出典型菌落時(shí)，用生理鹽水制成懸液，接種家兔或豚鼠，觀察有否膿腫，作為診斷參考?？筛鶕?jù)是否產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)做出診斷。 方法是用該菌的培養(yǎng)物頸部皮內(nèi)注射，48?72h后測(cè)定皮膚增厚及腫脹性質(zhì)，如注射局部發(fā)生硬固的熱痛腫脹，皮膚增厚超過(guò)5mm即為陽(yáng)性。此法特異性強(qiáng)，檢出率高達(dá) 80%以上。應(yīng)用經(jīng)高壓后酒精或乙醚提取的抗原進(jìn)行沉淀反應(yīng)、 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)檢查馬血清中的抗體，也是有效的診斷方法。2、念珠菌屬該菌屬半知菌綱的酵母菌念珠菌屬有150多個(gè)種，僅白色念珠菌是常見(jiàn)的病原，致人和動(dòng)物的念珠菌病。白色念珠菌存在于人和動(dòng)物消化道、 呼吸道和泌尿生殖道的黏膜，是機(jī)會(huì)致病菌，患念珠菌病的動(dòng)物多在消化道黏膜形成乳白色偽膜斑壞死物，主要侵害家禽，特別是雛雞。牛、豬、犬和嚙齒動(dòng)物也可能感染。白色念珠菌致病性條件致病皮膚粘膜感染鵝口瘡，陰道炎內(nèi)臟感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、膀胱炎，腎盂腎