GB/T 21752-2008化學(xué)品嚙齒動物28天重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗方法

犐犆犛１３．３００；１１．１００

犃８０

中華人民共和國國家標準

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化學(xué)品嚙齒動物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口

毒性試驗方法

犆犺犲犿犻犮犪犾狊—犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳狉犲狆犲犪狋犲犱犱狅狊犲２８犱犪狔狅狉犪犾狋狅狓犻犮犻狋狔狊狋狌犱狔犻狀狉狅犱犲狀狋狊

２００８０５１２發(fā)布２００８０９０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

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前言

本標準等同采用經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（ＯＥＣＤ）化學(xué)品測試指南Ｎｏ．４０７（２００５年）《嚙齒動物２８天

重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗》（英文版）。

本標準作了下列編輯性修改：

———增加了范圍部分；

———計量單位改成我國法定計量單位；

———刪除ＯＥＣＤ的參考文獻部分。

本標準附錄Ａ為資料性附錄。

本標準由全國危險化學(xué)品管理標準化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ２５１）提出并歸口。

本標準負責(zé)起草單位：中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所。

本標準參加起草單位：廣東出入境檢驗檢疫局、深圳出入境檢驗檢疫局。

本標準主要起草人：許崇輝、侯粉霞、謝建軍、劉麗。

Ⅰ

書

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犗犈犆犇引言

１．１９９８年，ＯＥＣＤ啟動了一項具有高度優(yōu)先權(quán)的活動，即，修訂現(xiàn)存指南、建立用于篩查和檢測潛

在內(nèi)分泌干擾物的新指南。其中一項工作就是修訂嚙齒動物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗（ＯＥＣＤ

ＴＧ４０７），在其中增添適用于檢測受試物內(nèi)分泌活性的評價指標。為了驗證所增添的這些新指標與內(nèi)

分泌的相關(guān)性及其可操作性，在國際范圍內(nèi)開展了廣泛的驗證性研究。選用一些具有雌激素、抗雌激

素、雄激素、抗雄激素、甲狀腺素、抗甲狀腺素活性的化學(xué)品進行試驗，測定這些新指標，證明這些指標與

內(nèi)分泌功能的相關(guān)性，比較測定結(jié)果在實驗室內(nèi)和實驗室間的可重復(fù)性，說明修訂前的ＯＥＣＤ４０７中要

求測定的指標對新增添的指標的影響。在上述研究中使用的化學(xué)品包括炔雌醇（ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、金

雀異黃酮（ｇｅｎｉｓｅｉｎ）、壬基苯酚（ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ）、它莫西芬（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ＣＧＳ１８３２０Ｂ、甲基睪酮（ｍｅｔｈｙｌ

ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、氟他胺（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）、丙硫氧嘧啶（ｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）和

１甲狀腺素（１ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ）。所獲得的大量研究數(shù)據(jù)已經(jīng)被匯總到一起、ＯＥＣＤ的一份綜合性報告對這

些研究結(jié)果進行了詳細的評價。該修訂后的ＴＧ４０７是上述國際范圍內(nèi)驗證試驗得出的經(jīng)驗和結(jié)果的

結(jié)晶。新ＴＧ４０７允許在評價其他毒理學(xué)效應(yīng)時同時評價內(nèi)分泌介導(dǎo)的毒性效應(yīng)。

２．在ＯＥＣＤＴＧ４０７中增添用于檢測內(nèi)分泌介導(dǎo)的毒性效應(yīng)指標的合理性在ＯＥＣＤ專論中進行

了論述。該專論中列出了主要的修訂內(nèi)容，其中大部分修訂內(nèi)容的合理性在國際性驗證研究的第一階

段使用氟他胺和丙硫氧嘧啶進行了驗證。在第一階段還使用了更多的化合物進行了驗證，但是后來開

展的這些研究沒有對前版本ＴＧ４０７要求的所有觀察終點進行觀察，比如ＦＯＢ或運動功能評價，有些

研究也沒有很充分地報道，有些與前版本ＴＧ４０７的要求相比使用劑量太低。根據(jù)第一階段驗證試驗

對新增添評價指標測定時所獲得的有關(guān)其測定的可操作性、重復(fù)性和靈敏性等方面的資料，來決定應(yīng)選

擇其中的哪些評價指標進行國際范圍內(nèi)的第二階段驗證試驗?，F(xiàn)行ＴＧ４０７是在第二階段驗證試驗結(jié)

果的基礎(chǔ)上形成的。

３．本試驗作為一種體內(nèi)試驗方法，可提供關(guān)于多種內(nèi)分泌機制及其效應(yīng)的數(shù)據(jù)，可在“ＯＥＣＤ內(nèi)分

泌干擾物測定與評價的概念框架”（附錄Ａ）中看到。在該概念性框架中，ＴＧ４０７被包含在第４級。該試

驗除了可獲得原版本可能提供的信息外，還提供多種內(nèi)分泌機制及其效應(yīng)的相關(guān)數(shù)據(jù)、并說明這種多種

內(nèi)分泌機制效應(yīng)是否存在劑量反應(yīng)關(guān)系。

４．國際范圍內(nèi)對ＴＧ４０７的驗證研究結(jié)果表明，該ＴＧ４０７在要求的靈敏度范圍內(nèi)，檢測出了已知

的具有強內(nèi)分泌活性作用的化學(xué)品，包括（抗）雌激素類化學(xué)品、（抗）雄激素類化學(xué)品或（抗）甲狀腺素類

化學(xué)品。用甲基睪酮和二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）進行的試驗表明，該試驗程序也可用于檢測對

甲狀腺產(chǎn)生微弱作用的化學(xué)品。關(guān)于金雀異黃酮（植物雌激素）、壬基苯酚（弱雌激素作用）、狆，狆’ＤＤＥ

（弱的抗雄性激素作用）等測試物，其產(chǎn)生的內(nèi)分泌活性作用與其產(chǎn)生的其他毒性效應(yīng)相比太弱了，即使

在高劑量組也檢測不到內(nèi)分泌相關(guān)指標的明顯改變，另一種情況是，各實驗室得出的試驗結(jié)果都具有不

確定性（指異黃酮的試驗結(jié)果）。

５．通過對國際范圍內(nèi)驗證試驗結(jié)果的詳盡分析，認為需要對ＴＧ４０７進行進一步修訂以提高試驗

的靈敏度，特別是檢測弱雌激素類物質(zhì)和（抗）雄性激素類物質(zhì)的靈敏度。推薦在試驗中進行雌性和雄

性動物乳腺的組織病理學(xué)檢查、評價雌性生殖器官的組織病理學(xué)改變（應(yīng)特別注意雌性生殖器官組織結(jié)

構(gòu)與發(fā)情周期（陰道涂片檢查）同步性的改變）。這些方面的測定內(nèi)容未包含在提供給參與驗證實驗室

的研究程序中。

６．國際范圍內(nèi)驗證研究的結(jié)果不能明確說明是否需要在ＴＧ４０７中加入甲狀腺激素的測定，但是

明確提示甲狀腺激素（Ｔ４、Ｔ３）和促甲狀腺素（ＴＳＨ）應(yīng)作為更新指標加入到ＴＧ４０７的試驗程序中。

Ⅱ

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７．國際范圍內(nèi)的驗證研究的結(jié)果表明，ＴＧ４０７驗證試驗中數(shù)據(jù)的質(zhì)量主要依賴于實驗室的經(jīng)驗，

特別是實驗室在檢查雌性生殖器官組織結(jié)構(gòu)周期性改變方面的經(jīng)驗以及在分離和稱量激素依賴性小器

官的重量時所具有的經(jīng)驗。因此，建議各實驗室在按照ＴＧ４０７進行試驗時應(yīng)進行適當?shù)馁|(zhì)量控制。

８．該ＴＧ４０７是經(jīng)過兩次會議討論后的產(chǎn)物，一次是哺乳動物試驗方法確認管理小組／內(nèi)分泌干擾

物測試與評估任務(wù)組于２００６年４月在華盛頓召開的，另一次是ＯＥＣＤ于２００６年４月在斯德哥爾摩召

開的。新版ＴＧ４０７是在國際范圍內(nèi)對其進行方法驗證的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的。

９．由于按照ＴＧ４０７進行試驗需要花費大量動物、很多費用、很長時間，因此，如果對ＴＧ４０７進行

像體外試驗方法驗證要求的那樣進行全面的方法驗證，則無論是過去還是現(xiàn)在看來都不太合適。無論

從動物福利還是從經(jīng)濟方面考慮都不應(yīng)開展這種全面的驗證試驗。根據(jù)對ＴＧ４０７中某些評價指標的

驗證結(jié)果，認識到需要對某些評價指標進行進一步的驗證和優(yōu)化。在新版ＴＧ４０７的應(yīng)用過程中，將會

獲得更多的有關(guān)這些評價指標的經(jīng)驗。

１０．該ＴＧ４０７在今后的幾年里可用于測定受試物重復(fù)經(jīng)口染毒所引起的毒性作用，包括對內(nèi)分泌

系統(tǒng)的作用。在該試驗程序經(jīng)世界范圍內(nèi)的應(yīng)用而進一步取得經(jīng)驗后，應(yīng)召集專家對ＴＧ４０７進行進

一步的修改、提煉和認可。今后在對ＴＧ４０７進行修改時，必要時應(yīng)重點對那些目前尚不能明確其價值

的一些觀察終點進行評價，如，乳腺的組織病理學(xué)檢查、雌性生殖器官組織結(jié)構(gòu)周期性變化與動情周期

的一致性測定、甲狀腺相關(guān)激素的測定等。

１１．對化學(xué)品進行毒性特征評價時，可在獲得最初的急性毒性資料后進行重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗。

該試驗可提供在一個相對有限的時間內(nèi)重復(fù)染毒受試物可能產(chǎn)生的健康危害效應(yīng)資料，包括對內(nèi)分泌

系統(tǒng)的毒性作用。該試驗作為一種重復(fù)劑量毒性試驗，可在未要求進行９０天重復(fù)染毒試驗時（如，受試

物的產(chǎn)量未超過規(guī)定的限值）進行或作為長期毒性試驗的預(yù)試驗來開展。染毒期限應(yīng)為２８天。

１２．該修改后的ＴＧ４０７增加了用于檢測化學(xué)品對甲狀腺生理功能影響和對雄性和（或）雌性生殖

器官影響的評價指標，同時仍然保留修改前的ＴＧ４０７中的所有毒理學(xué)評價指標。根據(jù)驗證試驗的數(shù)

據(jù)資料，必須強調(diào)的是該試驗程序的敏感性尚不足以檢測出所有的（抗）雄激素類物質(zhì)或（抗）雌激素類

物質(zhì)。用于ＴＧ４０７試驗的動物未處于對內(nèi)分泌干擾物最敏感的年齡。該ＴＧ４０７可檢測出強的或中

等程度的內(nèi)分泌活性物質(zhì)，但是，在多數(shù)情況下，檢測不出弱的內(nèi)分泌活性物質(zhì)。因此，不能把該試驗當

作內(nèi)分泌干擾作用的篩選試驗。

１３．因此，未檢測出內(nèi)分泌效應(yīng)時并不能據(jù)此認為化學(xué)品對內(nèi)分泌系統(tǒng)無影響。按照內(nèi)分泌介導(dǎo)

的效應(yīng)對受試物進行分類時，不能僅依賴該ＴＧ４０７的結(jié)果，而是應(yīng)該對現(xiàn)有的可反映受試物潛在內(nèi)分

泌活性的所有資料進行證據(jù)權(quán)重分析后再進行分類。當要制定化學(xué)品內(nèi)分泌活性（化學(xué)品分類）相關(guān)的

管理決策時，應(yīng)依據(jù)上述經(jīng)證據(jù)權(quán)重分析后的結(jié)果，而不是僅僅依賴于該ＴＧ所獲得的結(jié)果。

１４．該ＴＧ４０７是為了根據(jù)試驗所觀察到的毒性效應(yīng)，包括內(nèi)分泌影響效應(yīng)，來檢測受試物可能的

危害作用。也就是說，根據(jù)該ＴＧ４０７的結(jié)果可對受試物進行危害識別和危險度評價。有關(guān)內(nèi)分泌評

價指標的測定結(jié)果可參見“ＯＥＣＤ內(nèi)分泌干擾化學(xué)品測定與評價的概念框架”（附錄Ａ）。

１５．眾所周知，所有涉及到動物的操作都應(yīng)當符合當?shù)氐膭游锉Ｗo標準；下面所述的動物保護和處

理要求是最低要求，當?shù)氐膭游锉Ｗo標準應(yīng)高于此要求。ＯＥＣＤ另外還有一項關(guān)于“人道對待動物”的

規(guī)范。

Ⅲ

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化學(xué)品嚙齒動物２８天重復(fù)劑量經(jīng)口

毒性試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了嚙齒動物２８ｄ重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗的范圍、術(shù)語和定義、試驗基本原則、試驗方