臨床PCR檢驗的質(zhì)量保證

臨床PCR檢驗的質(zhì)量保證定義質(zhì)量保證(QualityAssurance,QA)

為一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統(tǒng)的措施。

定義室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)

由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者：實驗室技術(shù)人員；(2)目的：監(jiān)測實驗室測定的重復(fù)性；(3)功能：決定了當(dāng)批測定的有效性，報告可否發(fā)出。是對實驗室測定的即時性評價。

定義室間質(zhì)量評價（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結(jié)果的可接受性。當(dāng)EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒炇艺J(rèn)證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力驗證（Proficiencytesting,PT）。在以前的文獻(xiàn)中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。定義批(Run)在相同條件下所獲得的一組測定。（5個相同：地點、儀器、試劑、人員、時間）定義正態(tài)分布(Gaussiandistribution)

當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時間重復(fù)多次測定，當(dāng)測定數(shù)據(jù)足夠多時，如以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應(yīng)測定值的個數(shù)，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。定義正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學(xué)含義可用均數(shù)（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S或SD）和概率來說明。定義正態(tài)曲線以下的面積稱概率，常用樣本的均數(shù)（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）來表示，其計算公式：均值、標(biāo)準(zhǔn)差和概率的關(guān)系如下：

X±1SD，概率0.68；X±2SD，概率0.95；X±3SD，概率0.99臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室

常規(guī)測定步驟標(biāo)本收集：選擇測定項目、標(biāo)本收集和保存。實驗室測定：標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。報告和解釋：結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評之間的關(guān)系臨床基因擴(kuò)增檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制測定前的質(zhì)量控制核酸樣本的制備及其質(zhì)量控制統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制質(zhì)量控制的評價測定前質(zhì)量控制實驗室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓(xùn)實驗室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室應(yīng)有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備；實驗室儀器設(shè)備應(yīng)保養(yǎng)良好，實驗用品要達(dá)到相應(yīng)的要求。加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心管的質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？實驗室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理

混樣儀：維護(hù)、校準(zhǔn)加樣器：維護(hù)、校準(zhǔn)核酸提取儀：維護(hù)、校準(zhǔn)擴(kuò)增儀：維護(hù)、校準(zhǔn)恒溫干浴儀或水浴箱：維護(hù)、校準(zhǔn)離心機(jī)：維護(hù)生物安全柜：維護(hù)冰箱：維護(hù)基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控

離心管、吸頭等的質(zhì)檢

帶濾芯吸頭的密封性離心管PCR抑制物質(zhì)檢

擴(kuò)增儀的擴(kuò)增功能檢測

目的：通過擴(kuò)增功能來間接獲知孔間的均一性。方法：即將加有一已知的含一定濃度的陽性質(zhì)控樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管置于擴(kuò)增儀各孔中按常規(guī)進(jìn)行擴(kuò)增檢測，觀察結(jié)果的一致性程度，如果有某一個或幾個孔結(jié)果有問題，則應(yīng)確定這一個或幾個孔是否會重復(fù)性地得到假陰性結(jié)果，如果是，則表明相應(yīng)孔的熱傳導(dǎo)有損壞。理想的試劑和操作方法應(yīng)對試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出“標(biāo)準(zhǔn)操作程序”(SOP：包括文件資料、實驗室臺前)理想的操作方法按照試劑盒說明書操作即可嗎?操作中影響測定結(jié)果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)寫出具有可操作性的SOP質(zhì)量管理的內(nèi)涵寫你所做的做你所寫的記錄你已做的分析你已做的XXX單位XXX實驗室XXX標(biāo)準(zhǔn)操作程序編號：啟用日期：版本：第頁共頁一目的：適用范圍：職責(zé)或責(zé)任人：（方法原理）（檢測設(shè)備和試劑）（所需的環(huán)境條件）操作步驟：

1．

2．

3．

五、本操作程序變動程序：六、相關(guān)的文件七、相關(guān)的記錄表格和報告編寫人審核人批準(zhǔn)人怎樣編寫SOP？SOP（5W和1H）誰來做(Who)：責(zé)任人做什么(What)：適用范圍何時（When）：適用范圍何地（Where）：適用范圍為什么做（Why）：目的如何做（How）：操作步驟可移動紫外燈的操作SOP（5W1H）誰來做(Who)具體的實驗人員。（責(zé)任人）做什么(What)操作可移動紫外燈，用于實驗臺面、空間或儀器照射。（適用范圍）何時（When）每次實驗后。（適用范圍）何地（Where）在PCR實驗室每區(qū)內(nèi)。（適用范圍）為什么做（Why）消除或減少實驗室核酸或擴(kuò)增產(chǎn)物污染。（目的）如何做（How）即如何打開可移動紫外燈、調(diào)節(jié)到距被照射物的適當(dāng)距離（60-90cm）、照射多長時間等。（操作步驟）

HBVDNA檢測SOP（5W1H）誰來做(Who)具體的實驗人員。（責(zé)任人）做什么(What)HBVDNA檢測。（適用范圍）何時（When）每天或每周的哪天。（適用范圍）何地（Where）不同的工作（試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和擴(kuò)增檢測）在PCR實驗室不同區(qū)內(nèi)。（適用范圍）為什么做（Why）保證HBVDNA日常檢驗不同技術(shù)人員操作的一致性。（目的）如何做（How）即試劑如何準(zhǔn)備、樣本如何預(yù)處理、核酸如何提取、擴(kuò)增檢測上機(jī)、結(jié)果分析、報告及解釋等。（操作步驟）實驗記錄表格的設(shè)計存在問題表格種類繁多重復(fù)記錄表格無實用性，用于檢查的痕跡很重記錄表格設(shè)計的基本原則信息充分簡單明了臨床標(biāo)本的檢測信息能有機(jī)聯(lián)系起來臨床PCR檢驗流程記錄表檢驗日期

檢驗項目：

擴(kuò)增儀中保存文件名：

使用說明：

1．本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動，嚴(yán)禁逆向移動。

2．各項工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“”內(nèi)打“”。

3．本記錄表最后與相應(yīng)的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。

實驗前準(zhǔn)備試劑在有效期內(nèi)擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計在校準(zhǔn)的有效期內(nèi)生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi)消毒溶液在有效期內(nèi)洗眼器內(nèi)無菌生理鹽水在有效期內(nèi)離心管、帶濾芯吸頭已經(jīng)過質(zhì)檢合格操作者：

試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）

實驗前：打開通風(fēng)設(shè)備實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭）冰箱溫度：冷藏室（2~8℃）

℃；冷凍室（18℃2℃）

℃實驗室溫度：

℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度：

（允許范圍：30%~80%）PCR試劑來源：（可直接列出有關(guān)廠家名稱）批號：XXXXXXX檢驗項目：

本次實驗用量：

人份，剩余量：

人份。其他有關(guān)試劑配制：按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制1%含氯消毒液

毫升；按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制4％NaOH溶液

毫升；按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯

毫升；按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制

毫升；其他：儀器設(shè)備使用：離心機(jī)：正常不正常振蕩器：正常不正常超凈臺：正常不正常實驗后：按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。操作者：標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）

實驗前：打開通風(fēng)設(shè)備實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭）冰箱（柜）溫度：冷藏室（2~8℃）

℃；冷凍室（18℃2℃）

℃實驗室溫度：

℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度：

（允許范圍：30%~70%）陽性室內(nèi)質(zhì)控物來源：

濃度及批號：

擴(kuò)增位置：

陰性室內(nèi)質(zhì)控物來源：

批號：

擴(kuò)增位置：

所取理的標(biāo)本（對應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號）及擬擴(kuò)增位置：1 9 17 2533 41 49…

…2 10 18 2634 42 503 11 19 2735 43 514 12 20 2836 44 525 13 21 2937 45 536 14 22 3038 46547 15 23 31 39 47558 16 24 32 40 4856核酸提取及加樣過程：按XXX（列出編號）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用：生物安全柜：正常不正常恒溫儀溫度校準(zhǔn)：

℃離心機(jī)：正常不正常振蕩器：正常不正常實驗后：按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面及儀器設(shè)備。按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。操作者：

擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（3區(qū)）

實驗前打開通風(fēng)設(shè)備實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭）實驗室溫度：

℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度：

（允許范圍：30%~70%）擴(kuò)增儀操作：開機(jī)自檢及運行正常按XXX（列出編號）SOP進(jìn)行編程、參數(shù)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線計算值：Slope值:

(-3.3~-3.5)Intercept值:

(＞40)r值:

（）室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果：結(jié)果：

□填寫室內(nèi)質(zhì)控記錄、描質(zhì)控圖是否失控：□否□是實驗結(jié)果：見所附擴(kuò)增儀打印結(jié)果實驗后：按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面及儀器設(shè)備。按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。操作者：人員培訓(xùn)培訓(xùn)所涉及的范圍:儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)；試劑、方法原理；質(zhì)量管理體系；相關(guān)法律法規(guī)、相關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)、新理念和新進(jìn)展；實驗操作技能等。如何培訓(xùn)：講座、討論、自學(xué)和參加培訓(xùn)班等。培訓(xùn)的評估：書面考試、實驗考核、討論心得、論文、綜述等。對培訓(xùn)者的評估：培訓(xùn)者的背景、資歷、在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)的成就、所接受過的相關(guān)領(lǐng)域外部培訓(xùn)情況等。人員培訓(xùn)

方法原理核酸擴(kuò)增檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)結(jié)果的分析、報告及進(jìn)一步處理質(zhì)控的分析知其然又知其所以然。

實驗室內(nèi)部培訓(xùn)存在的問題

人員少，實際上沒有內(nèi)部培訓(xùn)形式?jīng)]有年度培訓(xùn)計劃沒有培訓(xùn)記錄

實驗室人員內(nèi)部培訓(xùn)的重要性

外部培訓(xùn)提供的是“理念”，是被動的，更多的是“學(xué)習(xí)”

內(nèi)部培訓(xùn)是主動的，源于實踐，高于實踐，更多的是“思考”

內(nèi)部培訓(xùn)所涉及的范圍

理論

專業(yè)

試劑、方法原理質(zhì)量控制方法相關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)其他

相關(guān)法律法規(guī)質(zhì)量管理體系新理念和新進(jìn)展操作

儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)實驗操作技能

內(nèi)部培訓(xùn)的原動力

基本的工作需要

?儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)?知識更新?基本實驗技能……

分析所做的

?工作程序不到位？?儀器設(shè)備操作、維護(hù)、校準(zhǔn)？?人員操作？?質(zhì)控方法？……

患者或醫(yī)生投訴

?結(jié)果解釋錯誤？?與臨床溝通不夠？?檢測程序、儀器設(shè)備有問題？?質(zhì)控問題？……

室內(nèi)質(zhì)控方法

非統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計質(zhì)控方法

非統(tǒng)計學(xué)方法

已知弱陽性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）：至少帶1份，其最后的檢測結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴(kuò)增檢測的有效性的綜合反映。已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標(biāo)本相同）：至少帶1份，擴(kuò)增測定的結(jié)果可以判斷核酸提取過程中是否發(fā)生污染。統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序

統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點

統(tǒng)計質(zhì)控方法（檢）測室內(nèi)質(zhì)控的SOP：耗品質(zhì)檢試劑質(zhì)檢質(zhì)控方法（糾錯措施）質(zhì)控圖室間質(zhì)評的SOP：糾偏措施室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控目的：假陰性、假陽性，準(zhǔn)確性、精密度質(zhì)控點：樣本質(zhì)量、模板提取、擴(kuò)增效率質(zhì)控物安排：空白、陰對、弱陽對、標(biāo)準(zhǔn)品控制范圍：空白、陰對-------陰性弱陽對-------陽性（上下一次方）標(biāo)準(zhǔn)品-------r值（二個9）斜率（-3.5----4.0）截距（-40左右）點間CT值（3.3左右）理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測樣本一致；所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；穩(wěn)定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；無已知的生物傳染危險性；單批可大量獲得；價廉每次（批）測定質(zhì)控物的數(shù)量及放置標(biāo)本數(shù)量如小于30，弱陽性和陰性質(zhì)控各1份，標(biāo)本數(shù)量增加，質(zhì)控物數(shù)量相應(yīng)按比例增加均勻分散于臨床標(biāo)本中，與臨床標(biāo)本一同處理（核酸提取）擴(kuò)增時的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。但在擴(kuò)增儀中的位置，不應(yīng)永久性的固定的在一個孔，而應(yīng)在每次擴(kuò)增檢測時，進(jìn)行相應(yīng)的順延，以使在一定的時間內(nèi)，可以盡可能的監(jiān)測每一個孔的擴(kuò)增有效性。陰性質(zhì)控樣本的種類陰性原血清樣本實驗過程中帶入的空管僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管陰性原血清樣本的功能監(jiān)測實驗室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染”由實驗操作所致的標(biāo)本間的交叉污染。具體地說，如強陽性標(biāo)本氣溶膠經(jīng)加樣器所致的污染、強陽性標(biāo)本經(jīng)操作者的手所致的污染、使用翻蓋離心管核酸提取時在較高溫孵育時蓋子崩開等擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染。核酸提取過程中帶入的空管監(jiān)測核酸提取過程中的實驗室“污染”的存在（在整個實驗過程中，開口放置于核酸提取的操作臺面區(qū)域內(nèi)，最后以水為基質(zhì)，進(jìn)行擴(kuò)增）僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管監(jiān)測試劑的“污染”實驗室是否發(fā)生污染的鑒別可將一個或多個空管打開靜置于標(biāo)本制備區(qū)30～60分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。室內(nèi)質(zhì)控范圍確定步驟1）最佳條件下的測定誤差。2）已知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。3）未知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差。4）臨床應(yīng)用的要求。對任何一個試驗都應(yīng)確定一個允許的誤差范圍，前提是滿足臨床要求。如允許誤差定得過小，在臨床上不存在任何意義，但為了符合該規(guī)定卻要花費很大人力、物力和時間。相反，如果將允許誤差定得過大，將使監(jiān)測系統(tǒng)察覺不到臨床上要求檢出的誤差，失去質(zhì)控的意義。最佳條件下已知值質(zhì)控血清變異（optimalconditionsvariance,簡稱OCV）在本實驗室最佳條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測質(zhì)控血清20次，測得結(jié)果計算，求出該組數(shù)據(jù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示該實驗室的最佳工作質(zhì)量。

常規(guī)條件下已知值質(zhì)控血清變異（routineconditionsvariance,簡稱RCV）做常規(guī)檢驗的技術(shù)人員，在常規(guī)檢驗的條件下，將質(zhì)控血清放在常規(guī)檢測樣本中，進(jìn)行20次檢驗，結(jié)果計算同OCV法。一般認(rèn)為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內(nèi)可以接受。若太大應(yīng)該查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改進(jìn)實驗室條件后（例如較正加樣器，糾正洗板操作，調(diào)正溫育溫度等），重新進(jìn)行RCV的測定。如果RCV的SD值更小，說明OCV不是最佳條件下測定的，應(yīng)重新再測OCV。基線測定在臨床PCR檢驗中，進(jìn)行基線測定，既可使用質(zhì)控樣本擴(kuò)增后的IU/ml進(jìn)行統(tǒng)計；也可用其對數(shù)值進(jìn)行。使用實時熒光PCR方法，也可采用質(zhì)控樣本的Ct值來進(jìn)行質(zhì)控統(tǒng)計分析。（見P150頁）常用質(zhì)控規(guī)則的符號及定義符號定義12S

一個質(zhì)控測定值超出±2s控制限。13S

一個質(zhì)控測定值超出±3s控制限。22S

兩個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+2s或－2s控制限。R4S

同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的差值超出4s控制限。41S

四個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或－1s控制限。7T

七個連續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變化。10X

十個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。Levey-Jennings質(zhì)控圖方法也稱Shewhart質(zhì)控圖，是由美國的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。二十世紀(jì)五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質(zhì)量控制。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質(zhì)控圖。Levey-Jennings質(zhì)控圖Levey-Jennings質(zhì)控圖

基本的統(tǒng)計學(xué)含義穩(wěn)定條件下，在20個IQC結(jié)果中不應(yīng)有多于1個結(jié)果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%?！凹纯谭ā辟|(zhì)控方法“即刻法”質(zhì)控方法的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法；只要有3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的評價IQC為一集體活動，除實際測定者外，還應(yīng)有另外一人對測定數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)檢。不能將IQC作為一個監(jiān)察方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)一次測定未達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)以建設(shè)性的而非批評的方式去探查失控的原因。除了將IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評價累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測在測定操作中的長期變化趨勢。評價應(yīng)定期進(jìn)行。失控情況處理及原因分析填寫失控報告單上報實驗室負(fù)責(zé)人，由負(fù)責(zé)人作出是否發(fā)報告的決定分析失控原因重做同一質(zhì)控物（人為差錯、偶然誤差）↓新開一瓶質(zhì)控物（質(zhì)控物使用、保管）↓新開另一批號質(zhì)控物（質(zhì)控物使用、保管）↓重新校準(zhǔn)（校準(zhǔn)錯誤）↓進(jìn)行儀器維護(hù)，更換試劑（儀器、試劑）↓請專家?guī)椭瓿墒Э貓蟾鎲钨|(zhì)量審核型式檢查（編號唯一性、項目完整性、書寫完整性）儀器檢查（狀態(tài)、校準(zhǔn)）試劑檢查（效期）質(zhì)控檢查（室內(nèi)、室間）異常值檢查（及時與臨床聯(lián)系）弱陽性質(zhì)控樣本常見的失控原因核酸提取中的隨機(jī)誤差:如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等。儀器的問題:如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。試劑的問題:如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。

室內(nèi)質(zhì)控的局限性IQC可確保每次測定與確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一致，但不能保證在單個的測定樣本中不出現(xiàn)誤差。比如樣本鑒別錯誤、樣本吸取錯誤、結(jié)果記錄錯誤等。此類誤差的發(fā)生率在不同的實驗室有所不同，一般要求小于0.1%，且應(yīng)均勻地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。影響臨床基因擴(kuò)增檢驗結(jié)果的

最關(guān)鍵因素產(chǎn)物“污染”（Carry-over)測定人員的操作：標(biāo)本混淆；貼錯標(biāo)簽、核酸提取等試劑避免基因擴(kuò)增檢驗假陽性結(jié)果的措施嚴(yán)格的實驗室分區(qū)；使用帶“濾心”的吸頭；設(shè)立“陰性”質(zhì)控（與標(biāo)本同時處理）；使用防“污染”（含UNG）的PCR試劑；臨床“假陽性”問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但PCR仍可為陽性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不宜做PCR檢測。避免基因擴(kuò)增檢驗假陰性結(jié)果的措施避免由于來自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標(biāo)本重復(fù)雙份測定；稀釋標(biāo)本。使用“內(nèi)質(zhì)控”（InternalControl,IC)以避免由于試劑、擴(kuò)增儀或標(biāo)本處理不當(dāng)所致的假陰性；須注意的是，如果靶濃度很高，可致在靶核酸和IC之間產(chǎn)生競爭，而使IC受抑制，此時IC可為陰性。核酸檢測國際標(biāo)準(zhǔn)項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANIBSC199997/746106IU/mlHCVRNANIBSC199796/790105IU/mlNIBSC200596/798105IU/mlHIV-1RNANIBSC199897/656105IU/瓶HAVRNANIBSC200300/560105IU/mlB19DNANIBSC200099/800106IU/ml病毒核酸檢測國家標(biāo)準(zhǔn)

項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANCCL2005GBW(E)0900311.03106IU/mlNCCL2007GBW09151HCVRNANCCL2005GBW(E)0900321.29105IU/mlNCCL2007GBW09152病原體核酸質(zhì)控物HBVDNA液體質(zhì)控物（單位：IU/ml)編號 靶值（對數(shù)值） 范圍HBVDNAS1 5.42×106(6.73) 1.70×106～1.70×107(6.23～7.23)HBVDNAS2 3.19×106(6.50) 1.00×106～1.00×107(6.00～7.00)HBVDNAS3 9.42×105(5.97) 2.95×105～2.95×106(5.47～6.47)HBVDNAS4 2.60×105(5.41) 8.13×104～8.13×105(4.19～5.91)HBVDNAS5 7.66×104(4.88) 2.40×104～2.40×105(4.38～5.38)該質(zhì)控品為液體血清，每支500l，使用時室溫放置15分鐘使其充分復(fù)融，顛倒或漩渦振蕩并瞬時離心后使用。病原體核酸質(zhì)控物HCVRNA凍干質(zhì)控物（單位：IU/ml)編號 靶值（對數(shù)值） 范圍0711 1.32×106(6.12) 4.17×105～1.70×106(5.62～6.62)0712 1.05×106(6.02) 3.31×105～3.31×106(5.52～6.52)0713 5.76×105(5.76) 1.82×105～1.82×106(5.26～6.26)0715 6.61×103(3.82) 2.09×103～2.09×104(3.32～4.32)0716 8.72×104(4.94) 2.75×104～2.75×105(4.44～5.44)該質(zhì)控品為凍干血清，每支300l，使用時用DEPC水復(fù)溶，室溫放置5分鐘，漩渦振蕩使之充分溶解并混勻，瞬時離心后使用。使用注意事項

該質(zhì)控品是具有生物活性的樣品并具有傳染性，請使用務(wù)必按傳染性樣品對待。實驗室收到血清后應(yīng)將血清保存在–18℃以下，保質(zhì)期為1年。定性測定：一份弱陽性（接近測定下限）和一份陰性質(zhì)控(依樣本數(shù)量而定）。定量測定：高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。工作程序的標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)本采集程序的標(biāo)準(zhǔn)化儀器設(shè)備的校準(zhǔn)、維護(hù)和正確使用試劑和消耗品的質(zhì)檢防“污染”措施的實施人員的培訓(xùn)上崗嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制參加室間質(zhì)量評價結(jié)果報告和解釋的標(biāo)準(zhǔn)化工作規(guī)范的制訂室間質(zhì)量評價（EQA）IQC確保實驗室室內(nèi)測定質(zhì)量的一致性，而EQA則提供將實驗室測定情況與室間和客觀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性比較的數(shù)據(jù)。EQA在質(zhì)量保證中對IQC有一補充作用。EQA的程序設(shè)計確定質(zhì)評方案,定期發(fā)放質(zhì)評樣本；要求參加質(zhì)評實驗室報告結(jié)果的單位要一致，以便于統(tǒng)