實(shí)驗(yàn)反應(yīng)和反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)反應(yīng)和反應(yīng)第一頁，共二十四頁，2022年，8月28日一、多糖的顯示——PAS反應(yīng)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)用品（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果（六）注意事項(xiàng)（七）作業(yè)第二頁，共二十四頁，2022年，8月28日（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細(xì)胞中的分布。第三頁，共二十四頁，2022年，8月28日（二）實(shí)驗(yàn)原理PAS反應(yīng)是顯示多糖的最經(jīng)典、也是最直接的細(xì)胞化學(xué)方法。用具有強(qiáng)氧化作用的過碘酸處理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成兩個游離的醛基，醛基與Schiff試劑結(jié)合可形成紫紅色的化合物，顏色深淺與多糖含量成正比。單糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纖維素。第四頁，共二十四頁，2022年，8月28日

堿性品紅為紅色，與能產(chǎn)生SO2的試劑作用后（如偏重亞硫酸鈉與鹽酸作用，還原出SO2），成為無色的Schiff試劑,再與醛基結(jié)合呈紫紅色。第五頁，共二十四頁，2022年，8月28日第六頁，共二十四頁，2022年，8月28日第七頁，共二十四頁，2022年，8月28日（三）實(shí)驗(yàn)用品1.材料：馬鈴薯塊莖2.試劑：0.5%高碘酸、schiff試劑、亞硫酸水、70％酒精3.器材：顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋第八頁，共二十四頁，2022年，8月28日（四）實(shí)驗(yàn)方法1、取馬鈴薯塊莖切成薄片，浸入過碘酸溶液10分鐘；2、用70％的酒精沖洗1次；3、將薄片放入Schiff試劑中20－25分鐘；4、在新配亞硫酸水中洗3次，每次1min；5、蒸餾水洗片刻；6、將薄片放在載玻片上吸去水分，加上蓋玻片，鏡下觀察。第九頁，共二十四頁，2022年，8月28日PAS反應(yīng)結(jié)果（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果馬鈴薯塊莖組織細(xì)胞內(nèi)可見到紫紅色或深紅色淀粉顆粒。

第十頁，共二十四頁，2022年，8月28日（六）注意事項(xiàng)

按上述操作，細(xì)胞中水溶性糖類已喪失，被染色的是不溶性的碳水化合物。第十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日（七）作業(yè)

1、繪制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并描述。第十二頁，共二十四頁，2022年，8月28日（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)用品（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果（六）注意事項(xiàng)（七）作業(yè)二、DNA的顯示——Feulgen反應(yīng)第十三頁，共二十四頁，2022年，8月28日1.了解Feulgen染色反應(yīng)原理；2.掌握Feulgen染色的方法，觀察染色結(jié)果。（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡谑捻?，共二十四頁?022年，8月28日（二）實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)DNA經(jīng)鹽酸水解后，打開了嘌呤堿基和脫氧核糖連接的鍵，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈現(xiàn)為紫紅色。第十五頁，共二十四頁，2022年，8月28日圖Feulgen反應(yīng)的染色原理第十六頁，共二十四頁，2022年，8月28日DNA染色后，除形成紫紅色化合物外，必然有多余的A和B分子，B分子很容易被氧化轉(zhuǎn)變?yōu)锳有色分子，從而造成偽差。因此必須迅速地多次用現(xiàn)配的SO2水清洗，使A分子轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的B分子，消除染色的偽差。第十七頁，共二十四頁，2022年，8月28日Feulgen反應(yīng)是特異性顯示DNA的最經(jīng)典方法，即可進(jìn)行DNA定位顯示，又可用顯微分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析。Feulgen反應(yīng)對組織中DNA的檢測具有高度專一性。組織中除DNA外還有多糖、RNA和其他自由醛基可以被鹽酸酸解掉。第十八頁，共二十四頁，2022年，8月28日（三）實(shí)驗(yàn)用品1.材料洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或根尖、小麥根尖2.試劑

1mol/LHCl、Schiff試劑、亞硫酸水溶液(漂白液)3.器材顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋第十九頁，共二十四頁，2022年，8月28日（四）實(shí)驗(yàn)方法①取小麥根尖和洋蔥內(nèi)表皮（綠豆大?。┙腩A(yù)熱至60℃的1NHCl中水解，時間10min。②蒸餾水洗后，轉(zhuǎn)入Schiff液中避光染30min，待根尖變?yōu)樯罴t色；③在新配亞硫酸水中洗3次，每次1min；④自來水洗5min，在載玻片上切下深紅色根尖備用；⑤制片鏡下觀察，根尖鑷子搗碎壓片。第二十頁，共二十四頁，2022年，8月28日（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果第二十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日蠶豆根尖細(xì)胞Feulgen反應(yīng)細(xì)胞核（紫紅色）核仁（