實驗動物標準化

實驗動物標準化第一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物標準化的研究內(nèi)容一、實驗動物微生物學的控制二、實驗動物遺傳質(zhì)量的控制三、實驗動物環(huán)境的控制四、實驗動物營養(yǎng)的控制第二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物標準化的意義生物學實驗研究的四個基本條件

Animal，Equipment，Information，Reagent，簡稱AEIR四要素這4個要素在整個實驗研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏廢。事實上，實驗動物質(zhì)量往往成為制約性要素，影響整個實驗的質(zhì)量和水平使用標準的實驗動物并在標準的環(huán)境條件下進行實驗是保證醫(yī)學研究質(zhì)量的重要條件第三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗、工作人員的健康和生命的保證

常見的人畜共患?。毫餍行猿鲅獰?、狂犬病、猴B病毒、淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒、利什曼原蟲等第四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日動物生產(chǎn)和繁殖的保證動物一旦染上傳染病，則種群難以凈化，一些烈性傳染病如鼠痘、兔病毒性出血癥等可導致動物全軍覆沒，造成巨大的經(jīng)濟損失。第五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗結(jié)果準確性、規(guī)律性、重復性的保證隱性感染，不表現(xiàn)臨床癥狀。但改變動物生物學參數(shù)，影響實驗準確性、規(guī)律性、重復性。實驗刺激下感染顯性化，得病、死亡，實驗終止。第六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日按工作程序?qū)嶒瀯游飿藴驶瘎澐譃椋簩嶒瀯游锷a(chǎn)條件標準化實驗動物質(zhì)量標準化動物實驗條件標準化對應三種合格證第七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日一、實驗動物質(zhì)量標準化微生物質(zhì)量標準化遺傳學質(zhì)量標準化

第八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日

按微生物學控制標準，實驗動物在我國分為四級一級動物普通動物二級動物清潔動物三級動物SPF動物四級動物無菌動物第九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物遺傳學質(zhì)量的影響

動物實驗結(jié)果的重復性取決于動物個體差異，而動物個體特征主要受遺傳基因控制，故實驗動物的遺傳學質(zhì)量對動物實驗結(jié)果有重要影響。不同基因型動物，生物學特性有明顯差異，對實驗刺激有不同反應。第十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日BALB/c對放射線比其他品系更為敏感。C57BL/6腫瘤發(fā)生率低，A系高。DMBA可致BALB/c產(chǎn)生白血病，對A系卻產(chǎn)生皮膚潰瘍BALB/c和C3H小鼠對鼠傷寒沙門氏菌的敏感性存在顯著差異SHR為自發(fā)性高血壓大鼠，心血管疾病發(fā)生率高

必須推廣應用標準品系動物，防止各種品系動物發(fā)生遺傳污染、基因型及生物學特性的改變，保證動物的遺傳質(zhì)量第十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日1、實驗動物的遺傳背景是影響實驗動物實驗結(jié)果發(fā)生變異的主要因素2、同基因型動物：品系內(nèi)所有個體的遺傳背景相同或相近。不同基因型動物：品系內(nèi)所有個體的遺傳背景具有較大的差異。3、實驗動物遺傳學質(zhì)量控制是實驗動物標準化的主要內(nèi)容之一。從遺傳學角度講，實驗動物是具有明確遺傳背景并受嚴格遺傳控制的遺傳限定動物。根據(jù)其遺傳特點不同，實驗動物分為近交系、封閉群（遠交群）和雜交一代動物。實驗動物遺傳控制基本概念第十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日4、在動物分類學中，“種“（spcies)是動物分類的基本單位。而實驗動物學品種(stock)、品系(strain)的概念超出了一般動物學分類的概念，把同一種動物中具有不同遺傳特性的動物分成不同的品種、品系，它們各自有其品種品系的特征。品種、品系才是實驗動物分類的基本單位。第十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日遺傳限定的動物相同基因類型不同基因類型近交系封閉群同源突變近交系同源導入近交系分離近交系重組近交系雜交F1代遠交種突變種品系品種第十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日5、實驗動物品種品系應具備的四個基本條件：A:相似的外貌特征；B：獨特的生物學特性；C：穩(wěn)定的遺傳性能；D：具有共同的遺傳來源和一定的遺傳結(jié)構(gòu)。第十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日交配制度是動物不同代之間以某種特定的交配方式相互發(fā)生聯(lián)系，其預期的基因傳遞結(jié)果是通過遺傳學和概率的知識來分析表達。交配型是不同基因型之間通過動物交配實現(xiàn)交流的方式。分為：近交（Incross）、雜交（Cross）、間交（Intercross）和回交（Backcross）交配制度和交配型第十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日近交（Inbreeding）：即近親繁殖，是指血緣關(guān)系極為相近的個體之間或遺傳組成極相似的個體之間進行的交配繁殖。雜交（crossing）：通過不同的基因型的個體之間的交配而取得某些雙親基因重新組合的個體的方法?；亟唬╞ackcross）：子一代和兩個親本的任一個進行雜交的方法叫做回交。在育種工作中，常利用回交的方法來加強雜種個體中某一親本的性狀表現(xiàn)。間交：自交或稱互交（Intercrosses）：親代為兩個雜合子交配。第十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日概念：近交系動物也叫純系動物，是相同基因類型動物中最主要的一種。它是經(jīng)連續(xù)20代以上的全同胞兄妹或親子交配培育而成，且品系內(nèi)所有個體都可追溯到起源于20代或以后的一對共同祖先的遺傳群體。從遺傳上來說，近交系的培育是從群體多態(tài)雜合的遺傳組成中，選擇保留一小部分，淘汰其它大部分的一個過程。經(jīng)過20代近交后，近交系的個體有98.6%的遺傳位點是純合的，因此個體間的遺傳差異很小。然而，不同近交系之間由于近交而固定的基因不同，遺傳差異很大。近交系Inbredstrain第十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日

通常禽類和兔類等實驗動物的血緣系數(shù)達到80％以上時(相當于親兄妹交配4代)，即可稱為近交系第二十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第二十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日近交系數(shù)（CoefficientofInbreeding,F):即動物個體的基因組成中，純合子基因的出現(xiàn)率。又可稱為后代個體基因位點固定同一祖先基因的比率。血緣系數(shù)（CoefficientofRelationship，R）：是兩個個體間的遺傳學相似性。第二十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日優(yōu)點：純合性；同源性；均一性；長期的遺傳穩(wěn)定性；可分辨性；個體性；分布的廣泛性；背景資料和數(shù)據(jù)較為完整缺點：近交系的主要缺點在于近交形成的近交衰退現(xiàn)象，表現(xiàn)在其生活力和生育力降低，對外界環(huán)境的變化較為敏感，抗病和適應環(huán)境等能力減退。這就增加了近交系動物飼養(yǎng)繁殖的難度。第二十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日近交系動物的命名一般以大寫英文字母命名，亦可以用大寫英文字母加阿拉伯數(shù)字命名，符號應盡量簡短。如A系，TA1系等。例如：C3hC3HC3HBalb/c,129,A,C57BL/6第二十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日近交系動物的特性1、基因純合性在一個近交系內(nèi)所有動物的所有基因位點都是純合子、個體之間、祖代個體與后代個體之間都是純合子。這樣的個體與品系內(nèi)任何一個動物交配所產(chǎn)生的后代，也應是純合子。因此，同一近交系動物的基因是一致的，沒有暗藏的隱性基因。2、同基因性同一個近交品系中所有個體在遺傳上是同源的，個體間極為相似，具有基本相同的遺傳組成和遺傳特點，也就是基因型相同。因此，同品系個體間可進行組織或腫瘤移植，也可用一只動物檢測該品系的基因型。第二十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日3、表現(xiàn)型的均一性同一近交系動物，在相同環(huán)境因素的作用下，由于同基因性，其表現(xiàn)型是均一的，如血型、組織型、體重、毛色、可遺傳疾病的發(fā)病率、對藥物的反應、甚至行為的類型等。因此,使用較少量的近交系動物可達到生物統(tǒng)計需要的精密度。4、長期的遺傳穩(wěn)定性近交系動物的基因高度純合，堅持近親交配則增加其在特定部位純合子，減少了遺傳變異，使動物的基因型可長期處于穩(wěn)定狀態(tài)，導致近交系動物長期遺傳穩(wěn)定性。近交系動物的遺傳變異僅發(fā)生在少量殘留雜合基因，或基因的突變，而這種機率非常低。

近交系動物的特性第二十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日5、個體性

每個品系在遺傳上都是獨特的，有些品系可能發(fā)生一些疾病，成為研究人類疾病理想的模型。品系間的差別顯示在量上，而不是在質(zhì)上，在研究上非常有用：可在眾多的近交系中，篩選出對某些因子敏感，和不敏感的品系，以達到不同的研究目的。近交系動物的特性第二十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日6、分布廣泛性近交系動物個體具備品系的全能性，任何個體均可攜帶該品系全部基因庫，引種僅需1-2對動物。不少近交系動物已分布在世界各地，意味著：不同地區(qū)，不同國家的科學家有可能重復或驗證已取得的理論和數(shù)據(jù)。近交系動物的特性第二十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日7、

背景資料和數(shù)據(jù)完整性近交系動物在培育和保種過程中都有詳細記錄，一些常用品系具有相當數(shù)量的背景資料；有大量文獻記載了各種品系的生物學特性。這些有關(guān)品系的特征、壽命和自發(fā)性疾病等資料，對今后的研究工作的設計和動物實驗結(jié)果的解釋提供便利條件。

8、可分辨性每個近交系都有自己獨特的生化標志基因。研究者在掌握了遺傳質(zhì)量監(jiān)測方法后，通過建立品系的遺傳概貌，和定期的遺傳檢測，可以分辨混雜在一起的兩個，或兩以上外貌近似的品系動物。近交系動物的特性第二十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日固定基因時，有害的隱性基因也會純合，出現(xiàn)不利的性狀而造成育種失?。唤贿€可能導致多基因之間喪失平衡，從而使高度純化的動物對不良環(huán)境的調(diào)節(jié)適應能力降低；近交使動物失去為保持足夠生物適合度所必需的最低水平的基因雜合性，從而影響動物生長率，壽命，對疾病的感受性，生活力，體力及繁殖能力。近親交配的弊端第三十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日鑒于近交系動物具備上述特性，其應用首推遺傳學研究，可消除雜合遺傳背景的影響，以較少的動物取得較一致的動物實驗結(jié)果。近交系動物在腫瘤研究工作中應用最廣泛，被培養(yǎng)的品系也最多；對腫瘤的病因?qū)W、發(fā)病學、實驗治療和新抗癌藥物的研究等都作出重大貢獻。近交系的應用第三十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日在某些涉及組織細胞或腫瘤移植的實驗中，個體間組織相容性一致與否，是實驗成敗的關(guān)鍵。因此，近交系動物成為不可缺少的實驗動物。隨著生物醫(yī)學科學研究的發(fā)展，已培育成功各種人類疾病的動物模型，如：高血壓大鼠、癲癇大鼠、糖尿病小鼠、白血病小鼠，白內(nèi)障小鼠、先天性肌萎縮小鼠、免疫缺陷型小鼠等等。這些近交系動物家系清楚，取材方便，是進行基因連鎖分析，比較理想的實驗材料。近交系的應用第三十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日概念：Closedcolonyoroutbredstock

以非近交交配方式進行繁殖生產(chǎn)的一個實驗動物種群，在不從其外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，稱為一個封閉群，或叫遠交群。封閉群（遠交群）第三十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日封閉群可分為起源于近交系,但并不進行全同胞交配的維持群;和起源于非近交系,亦不進行全同胞交配的維持群兩類。群體世代間近交系數(shù)上升率必須低于1%。這類動物和近交系不同，在動物群體內(nèi)的個體之間，具有某種程度的遺傳學差異。例如ddN小鼠，Wistar大鼠、我國各研究單位長期自行繁殖的KM小鼠、青紫蘭兔、新西蘭白兔、大耳白兔等均屬此類。第三十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日1、基因庫大，雜合率高

封閉群是一種長期與外界隔離，雌雄個體間能夠隨即交配的動物群，其遺傳組成比較接近自然狀態(tài)下的動物群體結(jié)構(gòu)，具有類似于人類群體遺傳異質(zhì)性的遺傳組成。其基因的雜合率較高，個體間的基因型不一致，因此，群體基因庫較近交系大。封閉群動物的遺傳學特性第三十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日2、群體基因頻率基本保持穩(wěn)定封閉群動物不從其外部引入新基因，又堅持隨機交配從而使群體在一定范圍內(nèi)保持相對穩(wěn)定的遺傳特征。群體基因頻率可達到哈迪—溫伯格平衡，封閉群動物的遺傳學特性第三十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日1908年提出，數(shù)學家哈迪（G.H.Hardy）和醫(yī)生溫伯格(W.Weinberg)分別提出關(guān)于基因頻率穩(wěn)定性的見解。在一個有性生殖的自然種群中，在符合以下5個條件的情況下，各等位基因的頻率和等位基因的基因型頻率在一代一代的遺傳中是穩(wěn)定不變的：種群大；種群中個體間的交配是隨機的；沒有突變發(fā)生；沒有新基因加入；沒有自然選擇。哈迪—溫伯格平衡第三十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日3、封閉群內(nèi)的個體差異主要取決于其祖代起源若封閉群祖代起源于同一個近交系動物，其遺傳差異較小。而起源于非近交系的一般封閉群動物，其個體差異較大，且可攜帶隱性的有害基因，或致死基因，易于誘發(fā)突變。封閉群動物的遺傳學特性第三十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日鑒于封閉群動物具備上述特性，在遺傳學研究中，常作為選擇實驗的基礎(chǔ)群體，供作某性狀遺傳力的研究。封閉群動物的應用第三十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日封閉群動物的遺傳組成具有很高的雜合性其繁殖力和生活力較強表現(xiàn)為平均胎產(chǎn)仔數(shù)多，胎間隔短，仔鼠離乳率高，生長快，成熟早，抗病力強，壽命長；生產(chǎn)成本低，可大量供應廣泛用于各種預試驗、學生教學和常規(guī)的藥物篩選和毒性試驗中。第四十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日回交：

一種實驗動物與另一種不同遺傳特性的近交系交配獲得N1，N1帶有1/2近交系的基因組成；N1再與該近交系交配得到N2，N2帶有3/4近交系的基因組成。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日如果就這樣與近交系進行n次回交，按1-（1/2）n的概率替換近交系的基因；經(jīng)7-8次回交，將能得到大體上同近交系具有相同基因組成的新品系。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日雜交就是將不同的群體或品系動物進行交配。假設近交系A(chǔ)的基因型為A1/A1，B1/B1，C1/C1……；近交系B的基因型為A2/A2，B2/B2，C2/C2……。兩種品系內(nèi)的血緣系數(shù)R=1；而兩種品系無共同的祖先R=0。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日把這兩種品系進行雜交，產(chǎn)生F1的基因型是均一的A1/A2，B1/B2，C1/C2……；個體各基因位點均是雜合型，又保持了個體遺傳均一性，即F1的各個體間血緣系數(shù)R=1；還可能出現(xiàn)新的遺傳特性。如近交系NZB和NZW的F1中發(fā)現(xiàn)了自身免疫性疾病鼠。RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日重組近交系：由兩個近交系雜交后，經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。重組同類系：由兩個近交系雜交后，子代與兩個親代中的一個近交系進行數(shù)次回交（通?；亟?次），再經(jīng)無特殊基因選擇的近親交配而育成的近交系。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日重組近交系命名:

由兩個親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X命名。由相同雙親交配育成的一組近交系用阿拉伯數(shù)字予以區(qū)分。如：由BALB/c與C57BL/6雜交育成的一組近交系分別命名為CXB1、CXB2……。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日重組同類系命名：由兩個親代近交系的縮寫名稱中間加小寫英文字母c命名，其中用作回交的親代近交系（稱受體近交系）在前，供體近交系在后。由相同雙親育成的一組同類系用阿拉伯數(shù)字予以區(qū)分。如：由BALB/c為受體近交系，以STS為供體近交系（S），經(jīng)2代回交育成的一組重組同類系分別命名為CcS1、CcS2……。重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日應用：重組近交系是實驗動物近十年來遺傳學的最重要發(fā)展成果之一。以兩個無關(guān)的近交系進行雜交，產(chǎn)生F1后，再兄妹交配連續(xù)20代以上育成一組近交系。該組近交系既有其雙親品系的特性，又有重組后每個重組近交系的特性。重組近交系已廣泛應用于新的多態(tài)性基因位點和新的組織相容性位點的鑒定、多態(tài)性位點的多效性及其連鎖性的研究；還用于動物壽命、自發(fā)性和誘發(fā)性疾病的研究；以及生理學、藥理學、形態(tài)學和行為學等方面的研究重組近交系和重組同類系RecombinantinbredstrainRecombinantcongenicstrain第四十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日隨著生物醫(yī)學科研的發(fā)展及其需要，目前世界上已培育成功數(shù)百種近交品系和封閉群動物，加上不同的亞系和新建的突變?nèi)?，其種（品系）數(shù)量愈千。在各科研或教學單位的實驗動物飼育繁殖部門，一般都保持幾個或幾十近交系。而在多個品系動物生產(chǎn)繁殖過程中，無法確保絕對不發(fā)生計劃外雜交。實驗動物遺傳學質(zhì)量控制第四十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日有必要進行實驗動物的遺傳質(zhì)量控制

科研人員都希望證明各自所得到的品系動物的遺傳背景是符合標準的；

生產(chǎn)繁殖部門希望確證：所提供的實驗動物符合遺傳控制的質(zhì)量。實驗動物遺傳學質(zhì)量控制第五十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日國際實驗動物理事會提出了實驗動物質(zhì)量檢測必須符合“4E原則”。準確

Exact簡便Easy有效Efficient經(jīng)濟Economic實驗動物遺傳學質(zhì)量控制第五十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日目前常用的檢測方法

生化標志基因位點檢測

皮膚移植

下頜骨形態(tài)學分析

毛色基因交配測試等實驗動物遺傳學質(zhì)量控制第五十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物的遺傳質(zhì)量控制的意義

每個品系（或種群）的遺傳概貌；

定期進行常規(guī)質(zhì)量檢測，證明被檢動物質(zhì)量是否符合遺傳概貌；

簽發(fā)品系（種群）的合格證書。實驗動物遺傳學質(zhì)量控制第五十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日近交系遺傳概貌是指一套生化標志基因位點,根據(jù)這些位點可確切無誤地判定品系,并將其同其它近交品系,甚至可能只有1-2個位點不同的亞系區(qū)分開來。從理論上講，遺傳概貌應至少由每條染色體的3個位點組成：每條染色體著絲點相應的近端和遠端各1個位點和中部1個位點。一旦確定了遺傳概貌后，檢測特定的染色體就能夠完成近交系遺傳質(zhì)量的判定。遺傳概貌的確定第五十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日封閉群動物遺傳概貌內(nèi)容

繁殖數(shù)據(jù)整體分析

胎間隔整體脂肪含量成活新生數(shù)整體干物質(zhì)含量

離乳仔數(shù)血液學數(shù)據(jù)

幼仔體重（2周齡）血紅細胞計數(shù)

淘汰種鼠特點血白細胞計數(shù)形態(tài)測定數(shù)據(jù)血紅蛋白含量

體長血細胞比容

體重平均細胞容積

11個下頜骨測量數(shù)據(jù)尺骨長

第五十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日

在實驗動物國家標準《哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制》（GB14923-2001）中規(guī)定：

對基礎(chǔ)群，凡在子代留有種鼠的親本動物都應進行檢測；對生產(chǎn)群動物每年至少進行一次遺傳質(zhì)量檢測，每次應采樣≥6只。遺傳質(zhì)量檢測方案的設計第五十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日生化標志基因位點測試法是一種得到廣泛應用的靈敏的遺傳質(zhì)量檢測方法，它能證實近交系和確定亞系間的遺傳關(guān)系，具有較高的應用價值。該方法必須嚴格選擇每一種顯示同功酶的緩沖液，電泳的溫度、時間、電壓和電流的最佳值。使用這種方法需要一定的技術(shù)和設備。生化標志位點測試第五十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗證明動物具有接受或排斥所植皮膚的能力。每個近交系的全部個體在遺傳上高度純合，所以，同品系的個體間能互相接受皮膚移植；而不同品系的個體間植皮就會互相排斥。皮膚移植也是的常用的遺傳質(zhì)量檢測方法，在國家推薦標準（GB/T14927.2-2001）《實驗動物近交系小鼠\大鼠皮膚移植法》中，對該方法的基本操作步驟有詳細的介紹和規(guī)定。皮膚移植第五十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日小鼠和大鼠的檢測中普遍采用的是快速、有效的尾部皮膚移植法。植皮后至少觀察100天，只有在100天以上植皮雙方均不發(fā)生排斥，才能證實待測小鼠或大鼠的遺傳純合性。在對已知品系檢測時，若急性排斥占手術(shù)例數(shù)30%，須重新考慮采樣，以確認是技術(shù)性還是其他原因造成的結(jié)果。皮膚移植第五十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日供體受體移植結(jié)果近交系同品系同性別接受近交系不同品系排斥近交系本品系同其他品系雜交F1接受近交系♀同品系♂接受近交系♂同品系♀排斥雜交F1F1親代品系排斥雜交F1雜交F2接受雜交F2雜交F1排斥（少數(shù)接受）實驗動物皮膚移植規(guī)律第六十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日皮膚移植法優(yōu)點：

易掌握、高度靈敏、經(jīng)濟、不需昂貴設備、對植皮接果的排斥或接受容易判斷。皮膚移植法不足：該方法費時：為檢測非H-2組織相容性基因的差異，需觀察100天后才能作出判斷；飼養(yǎng)植皮動物需一定飼養(yǎng)空間；會出現(xiàn)一些系技術(shù)或其他非免疫因素植皮實驗失敗。該方法不是鑒別新品系的理想方法。皮膚移植第六十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日下頜骨形態(tài)是高度遺傳的性狀，由多態(tài)性位點確定。下頜骨的形態(tài)和大小在小鼠的近交系間存在明顯差異，所以，下頜骨分析是一種合理的方法該方法是一種靈敏和有效的鑒別和檢測亞系變異（源于遺傳混雜和突變）的技術(shù)。正常環(huán)境因素及飼養(yǎng)管理對下頜骨形態(tài)幾乎沒有什么影響，50日齡后下頜骨基本上不再生長，其形態(tài)也不再發(fā)生變化。下頜骨形態(tài)學分析第六十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日檢測前，制作測量用的標準直角坐標底板，在近交系核心群中隨機取60日齡以上的成年雄鼠，每次取樣10只為1組，制備下頜骨標本后，在顯微鏡下，放大10倍測量在直角坐標底板上下頜骨11個形態(tài)特征參考點的距離下頜骨形態(tài)學分析第六十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日將所測量值的平均數(shù)作統(tǒng)計分析，利用判別函數(shù)確定下頜骨形態(tài)。如果測量值集中，則表明在被測小鼠間無顯著的遺傳差異。下頜骨形態(tài)分析是一種靈敏、經(jīng)濟、簡便、可同時檢驗大量的遺傳位點的遺傳監(jiān)測方法。若配以掃描機將下頜骨形態(tài)掃入電腦，經(jīng)電腦測量其形態(tài)特征參考點的距離，并由電腦完成統(tǒng)計分析，既可減少人為誤差，還可加快統(tǒng)計分析的速度。下頜骨形態(tài)學分析第六十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日小鼠毛色主要受A、B、C三個等位基因控制，它們分別在不同的染色體上。cc基因是其他毛色基因的上位基因。白化小鼠cc等位基因是已知的，A，B是待測基因。毛色基因交配測試可把隱性的毛色基因顯示出來。毛色基因交配測試第六十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日A-B-C：為野生色A-bbc：為桂皮色aaB-C：為黑色aabbC：為棕色毛色基因交配測試第六十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日根據(jù)遺傳學原理，被測個體與已知復隱性基因個體交配，可以從F1的毛色判斷待測小鼠基因型；如待測小鼠A、B位點是純合的，則雜交F1的毛色只出現(xiàn)一種顏色。通常將60-70日齡待測小鼠雌鼠與已知毛色基因結(jié)構(gòu)的DBA/2（aabbCC）雄鼠交配，根據(jù)雜交F1的毛色確定待測小鼠主要毛色基因型，鑒定是否純合。毛色基因交配測試第六十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物生產(chǎn)與實驗條件的標準化是對干擾動物實驗的周圍環(huán)境因素進行控制二、實驗動物生產(chǎn)條件和動物實驗條件的標準化

第六十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日環(huán)境因素包括：氣候因素（溫度、濕度、氣流、風速）理化因素（換氣、粉塵、臭味、噪音、照明）居住條件（籠具、墊料、房舍）營養(yǎng)因素（飼料、水）同種和異種動物之間的關(guān)系第六十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物營養(yǎng)控制飼料中蛋白質(zhì)、脂肪、鈣、磷、氨基酸、維生素等各類營養(yǎng)物質(zhì)含量應符合各種實驗動物品種品系的生理需要，含有的有害物質(zhì)及污染物質(zhì)不能超過最大安全限量標準。清潔級及清潔以上級動物的飼料應作滅菌處理。第七十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第七十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第七十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日按微生物控制程度分類，實驗動物的環(huán)境可分為開放系統(tǒng)屏障系統(tǒng)隔離系統(tǒng)開放環(huán)境：普通動物屏障環(huán)境：清潔動物，SPF動物隔離環(huán)境：無菌動物第七十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日

屏障系統(tǒng)隔離系統(tǒng)開放系統(tǒng)第七十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日屏障環(huán)境特點：恒溫（20～26℃）恒濕（40％～70％）足夠的換氣次數(shù)（10～20次/小時）保證有害氣體濃度降低到最小正向梯度壓差（20～50)使屏障外污染源不能進入萬級空氣潔凈度保證空氣潔凈適合的動物照度和對時明暗交替（12h/12h)符合動物生活習性。隔離環(huán)境特點：百級空氣潔凈度正向梯度壓差（100～150)

換氣次數(shù)（20～50次/小時）人員不與動物直接接觸第七十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日屏障系統(tǒng)第七十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第七十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第七十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物墊料第七十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日屏障系統(tǒng)IVCIndividuallyVentilatedCages第八十頁，共一百零二頁，2022年，8月28日IVC的特點IVC(IndividuallyVentilatedCages)是獨立通風籠盒的簡稱.它的特點是具有一定的密閉性,同時讓經(jīng)HEPA過濾器的潔凈空氣流入盒內(nèi),使盒內(nèi)保持正壓,減少了可能的感染來源,適合于飼養(yǎng)SPF級動物,以及一些免疫缺陷動物第八十一頁，共一百零二頁，2022年，8月28日屏障系統(tǒng)層流架第八十二頁，共一百零二頁，2022年，8月28日隔離系統(tǒng)第八十三頁，共一百零二頁，2022年，8月28日隔離器的基本構(gòu)造示意圖第八十四頁，共一百零二頁，2022年，8月28日實驗動物設施的監(jiān)控監(jiān)控內(nèi)容溫度濕度壓差人員進出情況第八十五頁，共一百零二頁，2022年，8月28日環(huán)境級別和動物級別的對應關(guān)系

動物級別環(huán)境級別(潔凈度，落下菌)普通動物開放系統(tǒng)(___,30)清潔動物屏障系統(tǒng)(萬級，3)SPF動物屏障系統(tǒng)(萬級，3)無菌動物或悉生動物隔離系統(tǒng)(百級，0)第八十六頁，共一百零二頁，2022年，8月28日第八十七頁，共一百零二頁，2022年，8月28日屏障系統(tǒng)管理一、人流路線

第八十八頁，共一百零二頁，2022年，8月28日二、物流路線

第八十九頁，共一百零二頁，2022年，8月28日三、消毒與滅菌高壓鍋：121℃，0.11Mpa，30分鐘

132℃，0.21Mpa，15分鐘傳遞窗：紫外線，表面消毒，30分鐘渡槽：0.1%新潔爾滅浸泡4小時Co60照射2%過氧