水處理生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

水處理生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)要求上課準(zhǔn)時(shí)、不得無故缺席，實(shí)驗(yàn)報(bào)告要及時(shí)上交。實(shí)驗(yàn)期間不得大聲喧嘩、服從老師的安排、注意安全。實(shí)驗(yàn)器材專人專用，對儀器要愛護(hù)，損壞實(shí)行賠償制度。維護(hù)好實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境衛(wèi)生，實(shí)行值日生制度。實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求統(tǒng)一用A4紙手寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告封面格式

1、實(shí)驗(yàn)課程名稱

2、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱

3、學(xué)生所在的專業(yè)、班級、姓名、學(xué)號

4、實(shí)驗(yàn)日期

5、同組者姓名實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

2、實(shí)驗(yàn)原理

3、實(shí)驗(yàn)儀器、溶液試劑

4、實(shí)驗(yàn)步驟

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如繪圖、列表等）

6、思考題實(shí)

驗(yàn)

內(nèi)

容顯微鏡的使用及酵母菌、曝氣池中微生物等形態(tài)觀察放線菌、霉菌的形態(tài)觀察油鏡的使用、細(xì)菌的單染色和革蘭氏染色微生物大小測定、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法培養(yǎng)基的制備及滅菌水體中細(xì)菌總數(shù)測定與大腸菌群生理生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一（一）顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法一、目的要求了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用方法二、顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)（一）機(jī)械裝置鏡座鏡臂鏡筒：單筒和雙筒兩種物鏡轉(zhuǎn)換器載物臺載物臺轉(zhuǎn)移器調(diào)焦裝置粗調(diào)節(jié)器細(xì)調(diào)節(jié)器（二）光學(xué)系統(tǒng)接目鏡（目鏡）接物鏡（物鏡）低倍鏡（10×）高倍鏡（40×）油鏡（100×）聚光鏡虹彩光圈反光鏡增加顯微鏡的分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)顯微鏡的分辨率：顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力。

D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2)D：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值：可見光的波長（平均0.55m)n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）四、顯微鏡的使用方法觀察前的準(zhǔn)備顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)根據(jù)個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡右眼看清調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈扳動鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察（同焦現(xiàn)象）油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在鏡油中。顯微鏡用畢后的處理上升鏡筒，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；將鏡體各部分復(fù)原。

五、思考題使用顯微鏡時(shí)哪些地方須特別？二、酵母菌、曝氣池中微生物等形態(tài)觀察

目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式；學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法；觀察曝氣池中的微生物形態(tài)基本原理美藍(lán)是一種無毒性染料.氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色,還原型呈現(xiàn)無色.用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色,代謝活力強(qiáng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型.因此,具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無色,死細(xì)胞或代謝能力弱的衰老細(xì)胞為藍(lán)色.實(shí)驗(yàn)器材菌種紅酵母啤酒酵母曝氣池活性污泥混合液溶液或試劑

0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。（一）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別制片在載玻片中央加一滴0.1%美藍(lán)→取菌少許→混勻→蓋上蓋玻片→靜置3min或0.5h觀察用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖根據(jù)顏色鑒別死活細(xì)胞活細(xì)胞：無色；死細(xì)胞：藍(lán)色（二）曝氣池中微生物的形態(tài)觀察在載玻片中央加一滴活性污泥曝氣池混合液→打散混勻→蓋上蓋玻片→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察→繪出所觀察到的微生物形態(tài)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征。分別繪出你在低倍鏡、高倍鏡觀察到的菌膠團(tuán)、原生動物、藻類等的基本形態(tài)。呂氏堿性美藍(lán)染色液作用時(shí)間不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。思考題實(shí)驗(yàn)二、放線菌、霉菌的形態(tài)觀察目的要求學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法；初步了解放線菌的形態(tài)特征；了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。實(shí)驗(yàn)器材菌種細(xì)黃鏈霉菌，曲霉、青霉、根霉、毛霉培養(yǎng)基高氏Ⅰ號瓊脂培養(yǎng)基察氏瓊脂培養(yǎng)基溶液或試劑0.1%美藍(lán)染色液，乳酸石碳酸棉藍(lán)染色液,50%乙醇儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，接種環(huán)，解剖針等。扦片法倒平板→取孢子劃線接種→無菌操作將滅菌的蓋玻片以大約45℃扦在接種線上→28℃倒置培養(yǎng)3-5d→取培養(yǎng)后的蓋玻片直接鏡檢或用0.1%美藍(lán)對蓋玻片染色后觀察觀察基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲的卷曲狀況，以及分生孢子的形狀，并繪圖說明。（一）放線菌的形態(tài)觀察（二）霉菌的形態(tài)觀察直接制片觀察法在載玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液；用解剖針挑取少量已產(chǎn)孢子的霉菌菌絲，先用50％乙醇洗去脫落的孢子，再放在載玻片的染液中(青霉、曲霉取菌絲時(shí)需連同培養(yǎng)基一起挑取)；用解剖針小心分散菌絲，蓋上蓋玻片；置低倍鏡或高倍鏡下觀察。繪圖說明四種霉菌的形態(tài)特征(有無橫隔)。根霉：假根、匍匐菌絲、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子毛霉：菌絲、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子青霉：菌絲、分生孢子梗、帚狀分支小梗及分生孢子曲霉：菌絲、足細(xì)胞、分生孢子梗、初生小梗、次生小梗、頂囊、分生孢子實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖說明你所觀察到的放線菌和霉菌的形態(tài)特征。思考題鏡檢時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來區(qū)分四種不同的霉菌？實(shí)驗(yàn)三油鏡的使用、細(xì)菌的單染色及革蘭氏染色（一)、油鏡的工作原理增加照明強(qiáng)度當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，有些光線會因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，降低了視野的照明度；若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。增加顯微鏡的分辨率：

D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2)D：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值：可見光的波長（平均0.55m)n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在鏡油中。顯微鏡用畢后的處理上升鏡筒，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量乙醇乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的乙醇乙醚洗液；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；將鏡體各部分復(fù)原。

（二）簡單染色法目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法；初步認(rèn)識細(xì)菌的形態(tài)特征；鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術(shù)。基本原理借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：正負(fù)離子之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。實(shí)驗(yàn)器材菌種大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物枯草芽孢桿菌12-18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物藤黃八疊球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液番紅染液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。操作步驟涂片干燥固定染色鏡檢水洗干燥實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。思考題你認(rèn)為在制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)，尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)節(jié)？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？如果你的涂片未經(jīng)加熱固定，將會出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時(shí)間太長，又會怎樣呢？（三）革蘭氏染色法目的要求學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。實(shí)驗(yàn)器材菌種枯草芽孢桿菌12-18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物藤黃八疊球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液盧戈氏碘液95%乙醇番紅染色液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。操作步驟藤黃八疊菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）大腸桿菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表說明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)。思考題你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？現(xiàn)有一株細(xì)菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請你鑒定其革蘭氏染色反應(yīng)。你怎樣運(yùn)用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對照菌株進(jìn)行涂片染色，以證明你的染色結(jié)果正確性。你認(rèn)為革蘭氏染色中，哪一個(gè)步驟可以省去而不影響最終結(jié)果？在什么情況下可以采用？實(shí)驗(yàn)五

微生物大小的測定、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法目的要求學(xué)習(xí)并掌握用測微尺測定微生物大小的方法明確血細(xì)胞球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。實(shí)驗(yàn)原理鏡臺測微尺為中央部分刻有精確等分線的載玻片，將1mm等分100格，每格長0.01mm。只用于校正目鏡測微尺。目鏡測微尺是可放入目鏡內(nèi)的圓形小玻片，精確等分50小格或100小格。由于不同顯微鏡或不同目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，目鏡測微尺每小格所代表的實(shí)際長度也不一樣。因此，測量前需先用鏡臺測微尺進(jìn)行校正。

球菌以直徑表示大小；桿菌用寬×長表示。實(shí)驗(yàn)器材菌種：啤酒酵母儀器：顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球計(jì)數(shù)板（一）酵母菌大小的測定安裝目鏡測微尺校正目鏡測微尺將鏡臺測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上。分別在低、高倍鏡、油鏡下用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺計(jì)算鏡臺測微尺：將1mm等分為100小格，每小格長0.01mm（即10μm）。目鏡測微尺每格長度（μm）=（兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)×10）/兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)菌體大小測定取下鏡臺測微尺，換上酵母菌水浸片，在高倍鏡下測定酵母菌的長和寬。選擇有代表性的10個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測定，取平均值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄1）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表接目鏡放大倍數(shù)：——接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度/um低倍鏡高倍鏡油鏡2）將啤酒酵母測定結(jié)果填入下表測定次數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度/um寬長菌體大小范圍/um目鏡測微尺格數(shù)寬度/um目鏡測微尺格數(shù)長度/um12345678910（二）酵母菌的顯微鏡直接計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由4條槽構(gòu)成3個(gè)平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各有一個(gè)方格網(wǎng)。每個(gè)方格網(wǎng)共分9個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的刻度有兩種規(guī)格：一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但無論哪種規(guī)格，每個(gè)大方格都由400個(gè)小方格組成。每個(gè)大方格邊長為1mm，則每個(gè)大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3。制備適當(dāng)濃度的菌懸液取潔凈的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片靜置5分鐘用高倍鏡計(jì)數(shù)加樣品設(shè)5個(gè)中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B計(jì)數(shù)板為25個(gè)中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×25×104×B計(jì)數(shù)板為16個(gè)中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×16×104×B注意事項(xiàng)取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡；一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5-10個(gè)菌體為宜；每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（4個(gè)角和中央）計(jì)數(shù)；位于格線上的菌體一般數(shù)上不數(shù)下，數(shù)右不數(shù)左；若芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半，則作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。血球計(jì)數(shù)板使用完畢，用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格刻度；洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干。實(shí)驗(yàn)結(jié)果測定你所制備的樣品的含菌量。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)各中格中菌數(shù)

A

B二室平均值菌數(shù)/um12345第一室第二室思考題為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進(jìn)行校正？在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細(xì)菌的大小時(shí)，其測定結(jié)果是否相同？為什么？根據(jù)你的體會，說明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準(zhǔn)確？實(shí)驗(yàn)五

培養(yǎng)基的制備與滅菌一、培養(yǎng)基的制備目的要求明確培養(yǎng)基的配制原理通過對基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟按培養(yǎng)基的用途分基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基按成分不同分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基基本原理四種培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（一種天然培養(yǎng)基，用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌）

配方：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化鈉5g瓊脂20g水1000mlpH7.2-7.4滅菌121℃20min

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（一種液體培養(yǎng)基，用于大腸菌群的生理生化鑒定）配方：牛肉膏3g

乳糖5g

氯化鈉5g

蛋白胨10g

水1000ml1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1ml

先將藥品溶解于1升水中，后調(diào)pH7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混勻，分裝入有小倒管的試管中，115℃20min滅菌產(chǎn)硫化氫培養(yǎng)基，一種半合成培養(yǎng)基，用于腸道細(xì)菌的生理生化鑒定。配方：檸檬酸鐵胺4g蛋白胨20g氯化鈉5g

硫代硫酸鈉

0.5g瓊脂20g水1000mlpH7.2滅菌115℃15min

伊紅美蘭培養(yǎng)基（一種鑒別培養(yǎng)基，用于大腸菌群的生理生化鑒定）配方：磷酸氫二鉀2g

乳糖10g

蛋白胨10g

瓊脂20g

水1000ml2％伊紅水溶液20ml0.5％美藍(lán)水溶液13mlpH7.2～7.4

滅菌115℃20min器材溶液或試劑

4mol/LNaOH，1mol/LHCl，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、產(chǎn)硫化氫培養(yǎng)基的配方藥品。儀器或其他用具

試管，三角瓶，搪瓷杯，量筒，天平，藥匙，電磁爐，高壓蒸氣滅菌鍋，pH試紙(pH5.5～9.0)，硅膠塞，棉花，報(bào)紙，記號筆等。操作步驟（一）1．計(jì)算：根據(jù)配方按照用量計(jì)算。2.稱量：3．溶解：如有瓊脂，要不斷攪拌避免糊底。4、調(diào)節(jié)pH：用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)，以pH試紙或pH計(jì)測定。5．過濾：趁熱用四層紗布過濾。

操作步驟（二）6.分裝試管：固體不超過試管高度的1/5；液體、半固體不超過試管高度的1/4或1/3。三角燒瓶：總體積的一半為限。管口或瓶口不得沾有培養(yǎng)基操作步驟（三）7.加塞1.正確；2.管內(nèi)部分太短，外部太松；3.外部過小操作步驟（三）8.包扎：注明培養(yǎng)基的名稱。9.滅菌

：按各自培養(yǎng)基滅菌的溫度、時(shí)間滅菌。10.擱置斜面

(1/3～l/2，不能超過1/2)。11.無菌檢查了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。

目的要求二、消毒與滅菌

滅菌是指殺死一切微生物的營養(yǎng)體，芽孢和孢子。消毒則指消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體，因而只是部分滅菌。消毒與滅菌的方法很多，一般可分為加熱、過濾、照射和使用化學(xué)藥品等方法。

基本原理干熱滅菌火焰灼燒法干熱滅菌法（烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法）濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法紫外線滅菌法微孔濾膜過濾除菌火焰灼燒法直接在火焰上灼燒滅菌主要用于實(shí)驗(yàn)室接種針(環(huán))、試管口、三角瓶口和金屬小工具等的滅菌。干熱滅菌法設(shè)備：電熱烘箱適用于耐高溫器皿，160-170℃，維持2小時(shí)注意事項(xiàng)：溫度不可超過180℃，以防玻璃器皿上的棉塞及包裝紙烤焦著火。滅菌時(shí)物品不宜堆放得太緊，以免妨礙空氣流通。滅菌物品不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。電烘箱內(nèi)溫度＜70℃時(shí)，方可打開箱門，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。2.濕熱滅菌(一）高壓蒸汽滅菌法：是將物品放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)0.1MPa，121℃保持15～30min進(jìn)行滅菌，從而導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。時(shí)間的長短可根據(jù)滅菌物品種類和數(shù)量的不同而有所變化，以達(dá)到徹底滅菌為準(zhǔn)。此法適用于培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品等的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。原因一：濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低。

卵白蛋白含水量/%30分鐘內(nèi)凝固所需溫度/℃50562574~801880~9061450160~170蛋白質(zhì)含水量與凝固所需溫度的關(guān)系原因二：濕熱的穿透力比干熱大。原因三：濕熱的蒸氣有潛熱存在。間歇滅菌法：

應(yīng)用于不易于高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基、含糖培養(yǎng)基等。此法是用阿諾氏流動蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌，每天加熱100℃30min、連續(xù)三天，可徹底滅菌。煮沸消毒法：注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。一般煮沸消毒時(shí)間為10～15min。超高溫殺菌：

此法指在溫度和時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)分別為135～150℃和2～8s的條件下對牛乳或其他液態(tài)食品進(jìn)行處理的一種工藝。2.濕熱滅菌(二）高壓蒸汽滅菌法（以手提式高壓蒸汽滅菌鍋為例）

操作步驟（三）全自動數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌鍋1.裝鍋先向外層鍋內(nèi)加入適量的水，放入內(nèi)鍋，裝入待滅菌物品。2.加蓋將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺栓，勿使漏氣。3.滅菌加熱，并同時(shí)打開排氣閥，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，升溫至l21℃時(shí)維持15~20min。4.降溫取物

滅菌結(jié)束后，切斷電源，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開排氣閥，開蓋取物。操作步驟（三）加壓蒸汽滅菌法0.1MPa，121℃，20min滅菌注意事項(xiàng)：切勿忘記加水，加水量不可過少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。鍋內(nèi)冷空氣必須完全排盡后，才能關(guān)上排氣閥，維持所需壓力。壓力一定要降到“0”時(shí)，才能打開排氣閥，開蓋取物。滅菌全程必須有人看守。紫外線滅菌法適用于無菌室、接種箱、手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過1.2m為宜。若紫外線照射與3%~5%的石炭酸溶液或2%~3%的來蘇爾等化學(xué)消毒劑結(jié)合使用，可加強(qiáng)滅菌效果。注意事項(xiàng)：紫外線對眼結(jié)膜及視神經(jīng)有損傷作用，對皮膚有刺激作用，故不能直視紫外線燈光，更不能在紫外線燈光下工作。過濾除菌法適用于不耐熱的液體物質(zhì)（如維生素、血清、酶等熱敏性物質(zhì)）。濾膜孔徑：≤0.22μm缺點(diǎn)：無法去除培養(yǎng)液中的病毒和噬菌體。思考題培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意哪些問題？為什么？為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需的溫度高，時(shí)間長？請?jiān)O(shè)計(jì)干熱滅菌和濕熱滅菌效果比較方案。在高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降低“0”時(shí)才能打開排氣閥，開蓋取物？實(shí)驗(yàn)六水體中細(xì)菌總數(shù)測定與大腸菌群生理生化反應(yīng)（一）水體中細(xì)菌總數(shù)測定目的要求1.了解水樣的采取方法2.應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)法測定水樣細(xì)菌總數(shù)基本原理

通過將樣品制成均勻的一系列不同稀釋度的稀釋液（使樣品中的微生物細(xì)胞充分分散，成單個(gè)細(xì)胞在），再取一定量的稀釋液接種，使其均勻分布于培養(yǎng)皿中特定的選擇性培養(yǎng)基內(nèi)，最后根據(jù)在平板上長出的菌落數(shù)計(jì)算出每克或每毫升樣品中的微生物數(shù)量。實(shí)驗(yàn)器材菌種：大腸桿菌菌懸液培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基儀器或其他用具：1mL無菌吸管，無菌平皿，盛有4.5mL無菌水的試管、吸耳球、培養(yǎng)箱等。操作步驟（一）水樣的采集（了解）1.自來水：水龍頭火焰灼燒3min→放水5min→用滅菌三角瓶接水→分析2.池水、河水或湖水：將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水面下10-15cm處→翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞→取水→蓋好瓶塞，取出→冰箱中保存或立即檢查操作步驟（二)細(xì)菌總數(shù)測定（兩種方法）傾注法（本次實(shí)驗(yàn)采用）涂布法1.編號：取無菌平皿9個(gè)，分別表明10－3、10-4、10-5（稀釋度）各三套。另取無菌水5支，依次標(biāo)明10－1、10-2、10－3、10-4、10-510-310-410-5原樣10-110-210-310-410-50.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.2ml0.2ml0.2ml2.稀釋:放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只接觸一個(gè)稀釋度。3.取樣4.倒平板：倒入融化后冷卻至45℃的培養(yǎng)基15ml，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻。5.培養(yǎng)：37℃倒置培養(yǎng)18～24h實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄稀釋度10-310-410-5平板123123123菌落數(shù)平均菌落數(shù)計(jì)算方法細(xì)菌總數(shù)（個(gè)/ml）書P363稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方法例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比值菌落總數(shù)(個(gè)/ml)報(bào)告方式(個(gè)/ml)10-110-21